肺炎鏈球菌PpmA蛋白的原核表達(dá)及初步鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：為獲得大量、高純度的肺炎鏈球菌假定蛋白酶成熟蛋白(putative protease maturation protein A，PpmA)以用于免疫動(dòng)物制備抗體，開(kāi)發(fā)研制肺炎鏈球菌快速診斷試劑盒。
　　方法：提取肺炎鏈球菌 TIGR4菌株的DNA,根據(jù)基因庫(kù)中報(bào)道的PpmA基因序列，從肺炎鏈球菌TIGR4基因中擴(kuò)增出PpmA基因序列，采用體外基因重組法將PpmA序列連接到原核表達(dá)質(zhì)粒 pBAD/gⅢA上，構(gòu)建出重組質(zhì)粒 pB

2、AD/gⅢA-PpmA,用酶切、PCR及測(cè)序鑒定。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TOP10中，經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)，進(jìn)行蛋白表達(dá)，獲得的重組蛋白用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行初步鑒定。
　　結(jié)果:克隆出的PpmA基因同基因庫(kù)中報(bào)道的PpmA基因序列一致；成功構(gòu)建出重組質(zhì)粒 pBAD/gⅢA-PpmA，基因測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒構(gòu)建正確； SDS-PAGE顯示在37-kDa處見(jiàn)到目的蛋白PpmA條帶

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