A型鏈球菌FasA-B-C蛋白的原核表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、A型鏈球菌(Group A Streptococci，GAS)又稱為化膿性鏈球菌，是鏈球菌中致病力最強(qiáng)的菌群，其主要致病物質(zhì)是外毒素，包括致熱外毒素和溶血素等。鏈球菌的治療目前臨床上多采用聯(lián)合使用抗生素的辦法，但因鏈球菌的抗藥性問題不能解決，因而治療效果不好。 研究表明，fas(fibronectin/fibrinogen binding/haemolytic activity/streptokinaseregulator)操縱

2、子是GAS中的兩元件信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，由兩部分組成：二個(gè)組氨酸蛋白激酶(FasB，F(xiàn)asC)和一個(gè)反應(yīng)調(diào)節(jié)因子(FasA)。在fas操縱子的下游有一個(gè)短的非編碼的RNA分子(fas X)，是fas系統(tǒng)調(diào)控毒力因子表達(dá)的主要效應(yīng)因子。 本研究選擇了fas操縱子中的三個(gè)關(guān)鍵蛋白FasB，F(xiàn)asC和FasA為主要研究對(duì)象，融合表達(dá)了FasB，F(xiàn)asC的胞內(nèi)區(qū)，利用不同的表達(dá)載體表達(dá)了FasA和融合蛋白NusA-FasA，制備了FasA的抗

3、體，并嘗試用不同的方法檢測(cè)FasB/FasC能否與FasA發(fā)生直接的相互作用。與此同時(shí)，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的．fasX可能的啟動(dòng)子區(qū)序列，我們?cè)O(shè)計(jì)了特異的引物序列，利用凝膠阻滯的技術(shù)方法檢測(cè)FasA能否直接調(diào)控fasX的啟動(dòng)子區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)asB/FasC與FasA并不能直接的相互作用，F(xiàn)asA對(duì)于文獻(xiàn)報(bào)道的fasX可能的啟動(dòng)子區(qū)沒有直接的調(diào)控作用。我們的工作結(jié)果推測(cè)在FasB/C和FasA之間可能存在著一種關(guān)聯(lián)分子介導(dǎo)磷酸基團(tuán)的傳遞。