豬鏈球菌反應(yīng)調(diào)節(jié)因子CovR靶基因的鑒定及其磷酸化調(diào)控系統(tǒng)Stk-Stp蛋白的原核表達(dá).pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：御荷街 日 期：刊弓．5 ·嗄學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保

2、存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。( 保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學(xué)位論文屬于保密論文，密級：——保密期限為——年。學(xué)位論文作者簽名：前·荷萄 指導(dǎo)教師簽名：E t 期：佃侈．歹．吩 日 期： 兮 力歹＼屎傷垮 幺苜枷 v 廠砷A b s 仃a c

3、tA b s t r a c tS t r e p t o c o c c u ss u i s @ s u i s ) i sa ni m p o r t a n tp a t h o g e n i cb a c t e r i u mt h a t i n f e c t sp i g l e t sa n dc a u s e sm a n ys e r i o u sd i s e a s es u c ha sa r t h

4、 r i t i s ，m e n i n g i t i sa n ds e p s i s ．I tc a n b et r a n s m i t t e dt oh u m a n b e i n g s t h r o u g h w o u n d sa n do t h e rr o u t e s ．I t n o to n l yp o s e sa t h r e a tt ot h es w i n e i n d

5、 u s t r y , b u ta l s oa f f e c t s t h ep u b l i ch e a l t ha n d s a f e t y ．I nr e c e n ty e a r s ，s t u d i e s h a v es h o w n t h a t t w o —c o m p o n e n ts i g n a lt r a n s d u c t i o n s y s t e mp

6、 l a y sa n i m p o r t a n tr o l ei nr e g u l a t i n gt h ee x p r e s s i o n o f p a t h o g e nv i r u l e n c e g e n e s a n df o r m i n g o f b a c t e r i a l p a t h o g e n i c i t y ,A T C S T S r e s p o

7、n s e r e g u l a t o rC o v R w a s f o u n d t o r e g u l a t en e a r l y8 ．9 ％o f t h e ＆s u i s 2 g e n e s d i r e c t l y o r i n d i r e c t l y i n o u rp r e v i o u s s t u d i e s o nt h e p a t h o g e n i

8、cm e c h a n i s m o f t h eb a c t e r i u m ．T h e s eg e n e s i n c l u d es o m e o f t h e k n o w n o rp o t e n t i a l S ．s u i s 2p a t h o g e n i c i t yr e l a t e dg e n e s ．T h e f i n d i n g s s u g g e

9、 s t e dt h a tc o v R i s ag l o b a lr e p r e s s o ri n v i r u l e n c er e g u l a t i o no fs ．s u i s2 ．T ob e t t e ru n d e r s t a n d i n g t h er o l eo fC o v Ri n p a t h o g e n i c p r o c e s s ，O U r r

10、 e s e a r c h h a s b e e n f o c u s e d o nt h e v i r u l e n c em e c h a n i s m o f C o v R ．T h ec h r o m a t i ni m m u n o p r e c i p i t a t i o ne x p e r i m e n tw a sp e r f o r m e d t o s c r e e nt h

11、et a r g e tg e n e sd i r e c t l yr e g u l a t e db yC o v R ．s ．s u i s20 5 Z Y H 3 3 s t r a i n w a sf i x e dw i t h1 ％f o r m a l d e h y d eS Oa st o c r o s s —l i n kD N A a n d p r o t e i nt o g e t h e r ．T

12、 h eg e n o m i c D N AW a sd i s r u p t e d i n t o f r a g m e n t so f 10 0 —5 0 0b p ，a n dt h e n i m m u n o p r e c i p i t a t e dw i ma n t i - C o v R m o n o c l o n a l a n t i b o d y ．A f t e rt h a t ，D N

13、 A f r a g m e n t s w e r ee x t r a c t e d ，p u r i f i e d ，a n d u l t i m a t e l yd e t e c t e db y t h eg e n e r a lP C R a s s a y ．F i n a l l y , w es u c c e s s f u l l ys c r e e n e do u t 2 t a r g e tg

14、 e n e s s s u 0 5 —1 6 6 8 a n d s s u 0 5 一J 7 3 2 ．I t w a sf o u n d t h a t C o v Rw a sr e g u l a t e d b y e u k a r y o t i c —l i k e s e r i n e ／t h r e o n i n ep r o t e i nk i n a s eei n S ．a(chǎn) g a l a c t

15、i a ea n ds ．p n e u m o n i a ei n r e c e n ty e a r s ．W es p e c u l a t et h a t t h e S t k ／S t p p h o s p h o r y l a t i o ns y s t e mm a ya l s o e x i s t i n Ss u i s ，w h i c h m a ym o d u l a t eC o v Rb

16、 y p h o s p h o r y l a t i o no r d e p h o s p h o r y l a t i o n ．T h ep r e s e n ts t u d yh a si d e n t i f i e dt w oh o m o l o g o u se n z y m e so f s t ka n d s i pb yo f a n a l y i n gt h eg e n o m eo f

17、 ＆s u i s2 C h i n e s eh i g hv i r u l e n ts t r a i n 0 5 Z Y H 3 3 ．T h es s u 0 5 —0 4 2 8g e n e e n c o d i n g as e r i n e ／t h r e o n i n e p r o t e i n k i n a s e ( S t k ) a n d s s u 0 5 —0 4 2 7 g e n e

18、 e n c o d i n g i t sc o r r e s p o n d i n g p h o s p h a t a s e ( S t p ) ．T h e t a r g e t D N A f r a g m e n t s w e r e s u c c e s s f u l l ya m p l i f i e du s i n g t h eg e n o m i ct e m p l a t eo fC h

19、 i n e s es t r a i n s0 5 Z Y H 3 3 ．S u b s e q u e n t l y ，t a r g e t g e n e s w e r e i n s e r t e d i n t o p M D 18 一T v e c t o r ，a n d t h e n s u b c l o n e d i n t op r o k a r y o t i ce x p r e s s i o