磷脂在黃顙魚仔稚魚人工微粒飼料中應(yīng)用及其作用機(jī)理的研究.pdf

1、磷脂是一種生物活性物質(zhì)，具有獨(dú)特的理化性質(zhì)和營養(yǎng)價值，其應(yīng)用前景十分廣闊。雖然已有研究報道磷脂在水產(chǎn)動物幼體飼料中具有潛在的重要作用，但目前關(guān)于水產(chǎn)動物幼體需要磷脂的原因缺乏了解。本論文通過系統(tǒng)研究在黃顙魚仔稚魚人工飼料中添加磷脂對其生長、發(fā)育、存活、耐受力、脂類代謝、抗氧化功能及腸道和肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響，從宏觀和微觀初步探討仔稚魚對磷脂需求的機(jī)理，為磷脂在仔稚魚人工飼料中的應(yīng)用開發(fā)提供參考。 1.黃顙魚早期發(fā)育階段受精卵和魚

2、體脂類及脂肪酸組成變化目的：研究黃顙魚受精卵孵化期間和仔魚發(fā)育階段磷脂、脂肪含量和脂肪酸的組成變化規(guī)律。方法：采用常規(guī)化學(xué)分析方法和氣相色譜法對黃顙魚從魚卵受精開始至仔魚孵化后未投餌的7d內(nèi)的脂類含量和脂肪酸組成進(jìn)行測定。結(jié)果：受精卵在整個孵化期間脂肪含量有下降趨勢，而磷脂含量在受精16h后略有增加。受精卵中不飽和脂肪酸含量大于飽和脂肪酸含量。受精卵在整個孵化期間各種脂肪酸含量無明顯變化。仔魚孵化后，魚體總脂肪和磷脂含量急劇下降，總脂含

3、量從0日齡的4.57％降低到7日齡的0.75％，磷脂含量則從1.32％下降到0.14％。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，0～5日齡，魚體總脂肪含量的下降幅度明顯大于磷脂。仔魚在饑餓期間魚體脂肪酸組成發(fā)生明顯變化，單不飽和脂肪酸含量下降最為明顯，尤其是C18:1。仔魚在饑餓期間，脂肪酸按n-9>n-6>n-3順序被先后利用，黃顙魚仔魚發(fā)育階段主要以單不飽和脂肪酸作為能量代謝基質(zhì)，而C20:4n6(AA)和C22:6n3(DHA)優(yōu)先于C20:5n3(EP

4、A)被保存下來。結(jié)論：磷脂是黃顙魚仔稚魚階段代謝的重要能源，是仔稚魚正常生長和發(fā)育所必需的重要營養(yǎng)素，仔稚魚對磷脂的需求量很大。 2.人工飼料中添加磷脂對黃顙魚仔稚魚生長、存活及耐受力的影響目的：研究人工微粒飼料中添加不同水平磷脂對黃顙魚仔稚魚生長、存活及耐受力的影響。方法：通過生長試驗，選取同批孵化的黃顙魚仔魚，隨機(jī)分成5組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)10000尾魚，其中四組飼喂人工飼料，另外一組飼喂輪蟲，作為對照組，進(jìn)行飼養(yǎng)試驗

5、，試驗期21d。試驗人工飼料均含94％的同一種基礎(chǔ)飼料和6％脂肪源，脂肪源由不同添加水平的大豆磷脂(0％、2％、4％、6％)和魚油、豆油(2:1)(6％、4％、2％、0％)構(gòu)成。試驗結(jié)束后，測定各試驗組仔稚魚生長性能、存活率及耐受力。結(jié)果：日糧磷脂含量顯著影響黃顙魚仔稚魚生長(p<0.05)。各組黃顙魚的體重和全長隨飼料中磷脂添加量的提高呈上升趨勢，其中以添加6％磷脂的人工飼料組的仔稚魚生長最佳，和輪蟲組飼喂效果相當(dāng)。14日齡和21日齡

6、時，磷脂對黃顙魚肥滿度變化的影響均未達(dá)到顯著水平(p>0.05)。在本試驗條件下飼喂人工飼料的黃顙魚存活率都比較高，達(dá)到90％以上，除PL0組外，各組差異不顯著。未添加磷脂組黃顙魚的存活率低于其它各組且隨著飼料中磷脂水平的增加有提高的趨勢。7～14日齡PL6組和輪蟲對照組黃顙魚仔稚魚的日增重、體長相對增長率、體重相對增長率、特定生長率顯著高于其它試驗組(p<0.05)，而PL0組最低(p<0.05)。14～21日齡各組日增重較7～14日

7、齡高，仍以PL6組日增重最明顯，而輪蟲對照組此階段日增重與7～14日齡期間相比卻增長不多。14～21日齡階段各組黃顙魚體長相對增長率、體重相對增長率、特定生長率均比7～14日齡有所下降，尤其以輪蟲對照組下降最為明顯。但PL0組體重增長率和特定生長率卻顯著高于其它各組(p<0.05)。從整個試驗期來看，黃顙魚的日增重、體長相對增長率、體重相對增長率、特定生長率均隨飼料中磷脂水平的上升而提高。黃顙魚仔稚魚體重與體長的回歸方程符合魚類生長的一

8、般模式。各組黃顙魚仔稚魚體重與體長關(guān)系式指數(shù)b在2.62～2.77之間。黃顙魚仔稚魚飼料系數(shù)隨磷脂添加水平的增加呈下降趨勢。磷脂對提高黃顙魚仔稚魚耐受力的影響效果不是很明顯。結(jié)論：磷脂能有效促進(jìn)黃顙魚仔稚魚生長，提高飼料效率，增加存活率。 3.人工飼料中添加磷脂對黃顙魚仔稚魚魚體脂類和脂肪酸組成的影響目的：研究飼料中不同脂肪源及磷脂添加水平對黃顙魚脂質(zhì)代謝特別是脂肪酸相對含量的影響，進(jìn)一步探討磷脂促生長作用機(jī)理。方法：試驗設(shè)計與

9、第2部分相同，飼養(yǎng)結(jié)束后，測定各試驗組黃顙魚魚體脂類成分及脂肪酸組成。結(jié)果：各組飼料在穩(wěn)定性試驗前后其脂肪酸組成并無明顯增減變化。磷脂對人工飼料在水中的脂肪酸穩(wěn)定性無顯著影響。隨飼料中磷脂添加量上升和日齡增長，黃顙魚魚體總脂肪含量有升高的趨勢。PL4、PL6組魚體脂肪含量顯著高于PL0、PL2組(p<0.05)。21日齡魚體脂肪含量以PL6組最高，顯著高于其它各組(p<0.05)，其他兩組間差異不顯著(p>0.05)。飼料中添加不同水平

10、的磷脂對14日齡黃顙魚魚體磷脂含量有影響，14日齡時，PL4、PL6與輪蟲對照組間魚體磷脂含量差異不顯著(p>0.05)，均顯著高于PL0組(p<0.05)。21日齡各組間魚體磷脂含量無顯著性差異(p>0.05)。21日齡與14日齡相比，PL0組魚體磷脂含量增加幅度顯著高于其他組(p<0.05)。14日齡時，魚體C18:2n6c、C18:3n6、C18:3n3、PUFA和n-6PUFA含量各組間有顯著差異(p<0.05)，且隨磷脂添加水

11、平增加而增加。PL6組EPA和DHA含量顯著高于PL0組(p<0.05)。魚體的C18:0、SFA含量隨磷脂添加而顯著降低。21日齡時，魚體的C18:2n6c、PUFA和n-6PUFA含量在添加磷脂組仍是顯著升高(p<0.05)，與此相反，C16:0、SFA含量降低。不同日齡魚體脂肪酸組成比較，C18:2n6c、C18:3n3、EPA、DHA、PUFA和n-3PUFA含量有隨日齡增長而呈上升的趨勢，而C16:0、C20:4n6和SFA含

12、量呈進(jìn)一步降低的趨勢。輪蟲對照組魚體脂肪酸組成與人工飼料各組比較，其C16:0、C18:0、EPA和SFA含量較高，C18:2n6c、DHA和PUFA含量相對較低，與輪蟲中相應(yīng)脂肪酸的含量存在著較明顯的平行變化趨勢。結(jié)論：飼料中添加磷脂，能夠促進(jìn)黃顙魚仔稚魚體內(nèi)脂類沉積，改善飼料中的EFA的有效吸收與利用。 4.人工飼料中添加磷脂對黃顙魚仔稚魚抗氧化能力及ATP酶活性的影響目的：研究飼料中添加磷脂對黃顙魚仔稚魚抗氧化損傷能力及某

13、些重要代謝酶的影響，以進(jìn)一步探討磷脂對仔稚魚生長影響的機(jī)制。方法：試驗設(shè)計與第2部分相同，飼養(yǎng)結(jié)束后，測定各試驗組黃顙魚魚體中抗氧化酶活性及ATP酶活性。結(jié)果：隨著飼料中磷脂水平的提高，黃顙魚魚體中的MDA含量逐漸下降，SOD、CAT和GST活性相應(yīng)得到提高，GSH-PX活性也是以磷脂組顯著高于未添加磷脂組(p<0.05)，其中磷脂添加水平為4％時GSH-PX活性達(dá)到峰值，當(dāng)磷脂添加水平達(dá)到6％時，GSH-PX活性不再提高。21日齡各組

14、黃顙魚魚體中的SOD、CAT、GST、GSH-PX活性比14日齡時有所上升，而MDA含量進(jìn)一步下降。添加適量磷脂可顯著提高黃顙魚Na+、K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。14日齡和21日齡時，添加磷脂組黃顙魚Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均顯著高于未添加磷脂PL0組(p<0.05)，其中以PL4組ATPase活性最高，而PL0組ATPase活性最低。不同日齡黃顙魚ATPase活性比較，21日齡人工飼料

15、各組魚Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性比14日齡略有下降。結(jié)論：磷脂能夠維持黃顙魚仔稚魚細(xì)胞膜的完整性，降低自由基對生物膜的過氧化損傷，提高機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的活力和ATP酶活性。 5.飼料中不同磷脂添加水平對黃顙魚仔稚魚前腸和肝臟組織學(xué)的影響目的：研究在實際配方的人工微粒飼料中添加商品大豆磷脂對黃顙魚仔稚魚消化腸道肝臟器官發(fā)育及脂肪消化吸收的影響，進(jìn)一步從組織學(xué)消化生理角度揭示磷脂對仔稚魚促生長作用機(jī)理。方法：

16、試驗設(shè)計與第2部分相同，分別于14日齡和21日齡取樣，制作組織切片，用病理成像系統(tǒng)和光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察分析。結(jié)果：14日齡時PL0組黃顙魚稚魚前腸出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積，細(xì)胞漿內(nèi)有大量脂肪泡，肝臟固有結(jié)構(gòu)不清，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂，肝竇消失，肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞漿呈空泡狀。隨著飼料中油脂添加量減少、磷脂添加量的增加，黃顙魚稚魚前腸粘膜上皮細(xì)胞中脂滴積聚現(xiàn)象逐漸減輕，杯狀細(xì)胞數(shù)目增多，肝細(xì)胞空泡化程度降低。當(dāng)飼料中添加6％磷脂時，黃顙魚前腸上皮細(xì)胞和肝