磷脂在黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)人工微粒飼料中應(yīng)用及其作用機(jī)理的研究.pdf

1、磷脂是一種生物活性物質(zhì)，具有獨(dú)特的理化性質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，其應(yīng)用前景十分廣闊。雖然已有研究報(bào)道磷脂在水產(chǎn)動(dòng)物幼體飼料中具有潛在的重要作用，但目前關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物幼體需要磷脂的原因缺乏了解。本論文通過(guò)系統(tǒng)研究在黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)人工飼料中添加磷脂對(duì)其生長(zhǎng)、發(fā)育、存活、耐受力、脂類代謝、抗氧化功能及腸道和肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響，從宏觀和微觀初步探討仔稚魚(yú)對(duì)磷脂需求的機(jī)理，為磷脂在仔稚魚(yú)人工飼料中的應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供參考。 1.黃顙魚(yú)早期發(fā)育階段受精卵和魚(yú)

2、體脂類及脂肪酸組成變化目的：研究黃顙魚(yú)受精卵孵化期間和仔魚(yú)發(fā)育階段磷脂、脂肪含量和脂肪酸的組成變化規(guī)律。方法：采用常規(guī)化學(xué)分析方法和氣相色譜法對(duì)黃顙魚(yú)從魚(yú)卵受精開(kāi)始至仔魚(yú)孵化后未投餌的7d內(nèi)的脂類含量和脂肪酸組成進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：受精卵在整個(gè)孵化期間脂肪含量有下降趨勢(shì)，而磷脂含量在受精16h后略有增加。受精卵中不飽和脂肪酸含量大于飽和脂肪酸含量。受精卵在整個(gè)孵化期間各種脂肪酸含量無(wú)明顯變化。仔魚(yú)孵化后，魚(yú)體總脂肪和磷脂含量急劇下降，總脂含

3、量從0日齡的4.57％降低到7日齡的0.75％，磷脂含量則從1.32％下降到0.14％。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，0～5日齡，魚(yú)體總脂肪含量的下降幅度明顯大于磷脂。仔魚(yú)在饑餓期間魚(yú)體脂肪酸組成發(fā)生明顯變化，單不飽和脂肪酸含量下降最為明顯，尤其是C18:1。仔魚(yú)在饑餓期間，脂肪酸按n-9>n-6>n-3順序被先后利用，黃顙魚(yú)仔魚(yú)發(fā)育階段主要以單不飽和脂肪酸作為能量代謝基質(zhì)，而C20:4n6(AA)和C22:6n3(DHA)優(yōu)先于C20:5n3(EP

4、A)被保存下來(lái)。結(jié)論：磷脂是黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)階段代謝的重要能源，是仔稚魚(yú)正常生長(zhǎng)和發(fā)育所必需的重要營(yíng)養(yǎng)素，仔稚魚(yú)對(duì)磷脂的需求量很大。 2.人工飼料中添加磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)生長(zhǎng)、存活及耐受力的影響目的：研究人工微粒飼料中添加不同水平磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)生長(zhǎng)、存活及耐受力的影響。方法：通過(guò)生長(zhǎng)試驗(yàn)，選取同批孵化的黃顙魚(yú)仔魚(yú)，隨機(jī)分成5組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10000尾魚(yú)，其中四組飼喂人工飼料，另外一組飼喂輪蟲(chóng)，作為對(duì)照組，進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)

5、，試驗(yàn)期21d。試驗(yàn)人工飼料均含94％的同一種基礎(chǔ)飼料和6％脂肪源，脂肪源由不同添加水平的大豆磷脂(0％、2％、4％、6％)和魚(yú)油、豆油(2:1)(6％、4％、2％、0％)構(gòu)成。試驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)定各試驗(yàn)組仔稚魚(yú)生長(zhǎng)性能、存活率及耐受力。結(jié)果：日糧磷脂含量顯著影響黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)生長(zhǎng)(p<0.05)。各組黃顙魚(yú)的體重和全長(zhǎng)隨飼料中磷脂添加量的提高呈上升趨勢(shì)，其中以添加6％磷脂的人工飼料組的仔稚魚(yú)生長(zhǎng)最佳，和輪蟲(chóng)組飼喂效果相當(dāng)。14日齡和21日齡

6、時(shí)，磷脂對(duì)黃顙魚(yú)肥滿度變化的影響均未達(dá)到顯著水平(p>0.05)。在本試驗(yàn)條件下飼喂人工飼料的黃顙魚(yú)存活率都比較高，達(dá)到90％以上，除PL0組外，各組差異不顯著。未添加磷脂組黃顙魚(yú)的存活率低于其它各組且隨著飼料中磷脂水平的增加有提高的趨勢(shì)。7～14日齡PL6組和輪蟲(chóng)對(duì)照組黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)的日增重、體長(zhǎng)相對(duì)增長(zhǎng)率、體重相對(duì)增長(zhǎng)率、特定生長(zhǎng)率顯著高于其它試驗(yàn)組(p<0.05)，而PL0組最低(p<0.05)。14～21日齡各組日增重較7～14日

7、齡高，仍以PL6組日增重最明顯，而輪蟲(chóng)對(duì)照組此階段日增重與7～14日齡期間相比卻增長(zhǎng)不多。14～21日齡階段各組黃顙魚(yú)體長(zhǎng)相對(duì)增長(zhǎng)率、體重相對(duì)增長(zhǎng)率、特定生長(zhǎng)率均比7～14日齡有所下降，尤其以輪蟲(chóng)對(duì)照組下降最為明顯。但PL0組體重增長(zhǎng)率和特定生長(zhǎng)率卻顯著高于其它各組(p<0.05)。從整個(gè)試驗(yàn)期來(lái)看，黃顙魚(yú)的日增重、體長(zhǎng)相對(duì)增長(zhǎng)率、體重相對(duì)增長(zhǎng)率、特定生長(zhǎng)率均隨飼料中磷脂水平的上升而提高。黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)體重與體長(zhǎng)的回歸方程符合魚(yú)類生長(zhǎng)的一

8、般模式。各組黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)體重與體長(zhǎng)關(guān)系式指數(shù)b在2.62～2.77之間。黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)飼料系數(shù)隨磷脂添加水平的增加呈下降趨勢(shì)。磷脂對(duì)提高黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)耐受力的影響效果不是很明顯。結(jié)論：磷脂能有效促進(jìn)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)生長(zhǎng)，提高飼料效率，增加存活率。 3.人工飼料中添加磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)魚(yú)體脂類和脂肪酸組成的影響目的：研究飼料中不同脂肪源及磷脂添加水平對(duì)黃顙魚(yú)脂質(zhì)代謝特別是脂肪酸相對(duì)含量的影響，進(jìn)一步探討磷脂促生長(zhǎng)作用機(jī)理。方法：試驗(yàn)設(shè)計(jì)與

9、第2部分相同，飼養(yǎng)結(jié)束后，測(cè)定各試驗(yàn)組黃顙魚(yú)魚(yú)體脂類成分及脂肪酸組成。結(jié)果：各組飼料在穩(wěn)定性試驗(yàn)前后其脂肪酸組成并無(wú)明顯增減變化。磷脂對(duì)人工飼料在水中的脂肪酸穩(wěn)定性無(wú)顯著影響。隨飼料中磷脂添加量上升和日齡增長(zhǎng)，黃顙魚(yú)魚(yú)體總脂肪含量有升高的趨勢(shì)。PL4、PL6組魚(yú)體脂肪含量顯著高于PL0、PL2組(p<0.05)。21日齡魚(yú)體脂肪含量以PL6組最高，顯著高于其它各組(p<0.05)，其他兩組間差異不顯著(p>0.05)。飼料中添加不同水平

10、的磷脂對(duì)14日齡黃顙魚(yú)魚(yú)體磷脂含量有影響，14日齡時(shí)，PL4、PL6與輪蟲(chóng)對(duì)照組間魚(yú)體磷脂含量差異不顯著(p>0.05)，均顯著高于PL0組(p<0.05)。21日齡各組間魚(yú)體磷脂含量無(wú)顯著性差異(p>0.05)。21日齡與14日齡相比，PL0組魚(yú)體磷脂含量增加幅度顯著高于其他組(p<0.05)。14日齡時(shí)，魚(yú)體C18:2n6c、C18:3n6、C18:3n3、PUFA和n-6PUFA含量各組間有顯著差異(p<0.05)，且隨磷脂添加水

11、平增加而增加。PL6組EPA和DHA含量顯著高于PL0組(p<0.05)。魚(yú)體的C18:0、SFA含量隨磷脂添加而顯著降低。21日齡時(shí)，魚(yú)體的C18:2n6c、PUFA和n-6PUFA含量在添加磷脂組仍是顯著升高(p<0.05)，與此相反，C16:0、SFA含量降低。不同日齡魚(yú)體脂肪酸組成比較，C18:2n6c、C18:3n3、EPA、DHA、PUFA和n-3PUFA含量有隨日齡增長(zhǎng)而呈上升的趨勢(shì)，而C16:0、C20:4n6和SFA含

12、量呈進(jìn)一步降低的趨勢(shì)。輪蟲(chóng)對(duì)照組魚(yú)體脂肪酸組成與人工飼料各組比較，其C16:0、C18:0、EPA和SFA含量較高，C18:2n6c、DHA和PUFA含量相對(duì)較低，與輪蟲(chóng)中相應(yīng)脂肪酸的含量存在著較明顯的平行變化趨勢(shì)。結(jié)論：飼料中添加磷脂，能夠促進(jìn)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)體內(nèi)脂類沉積，改善飼料中的EFA的有效吸收與利用。 4.人工飼料中添加磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)抗氧化能力及ATP酶活性的影響目的：研究飼料中添加磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)抗氧化損傷能力及某

13、些重要代謝酶的影響，以進(jìn)一步探討磷脂對(duì)仔稚魚(yú)生長(zhǎng)影響的機(jī)制。方法：試驗(yàn)設(shè)計(jì)與第2部分相同，飼養(yǎng)結(jié)束后，測(cè)定各試驗(yàn)組黃顙魚(yú)魚(yú)體中抗氧化酶活性及ATP酶活性。結(jié)果：隨著飼料中磷脂水平的提高，黃顙魚(yú)魚(yú)體中的MDA含量逐漸下降，SOD、CAT和GST活性相應(yīng)得到提高，GSH-PX活性也是以磷脂組顯著高于未添加磷脂組(p<0.05)，其中磷脂添加水平為4％時(shí)GSH-PX活性達(dá)到峰值，當(dāng)磷脂添加水平達(dá)到6％時(shí)，GSH-PX活性不再提高。21日齡各組

14、黃顙魚(yú)魚(yú)體中的SOD、CAT、GST、GSH-PX活性比14日齡時(shí)有所上升，而MDA含量進(jìn)一步下降。添加適量磷脂可顯著提高黃顙魚(yú)Na+、K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。14日齡和21日齡時(shí)，添加磷脂組黃顙魚(yú)Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均顯著高于未添加磷脂PL0組(p<0.05)，其中以PL4組ATPase活性最高，而PL0組ATPase活性最低。不同日齡黃顙魚(yú)ATPase活性比較，21日齡人工飼料

15、各組魚(yú)Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性比14日齡略有下降。結(jié)論：磷脂能夠維持黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)細(xì)胞膜的完整性，降低自由基對(duì)生物膜的過(guò)氧化損傷，提高機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的活力和ATP酶活性。 5.飼料中不同磷脂添加水平對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)前腸和肝臟組織學(xué)的影響目的：研究在實(shí)際配方的人工微粒飼料中添加商品大豆磷脂對(duì)黃顙魚(yú)仔稚魚(yú)消化腸道肝臟器官發(fā)育及脂肪消化吸收的影響，進(jìn)一步從組織學(xué)消化生理角度揭示磷脂對(duì)仔稚魚(yú)促生長(zhǎng)作用機(jī)理。方法：

16、試驗(yàn)設(shè)計(jì)與第2部分相同，分別于14日齡和21日齡取樣，制作組織切片，用病理成像系統(tǒng)和光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察分析。結(jié)果：14日齡時(shí)PL0組黃顙魚(yú)稚魚(yú)前腸出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積，細(xì)胞漿內(nèi)有大量脂肪泡，肝臟固有結(jié)構(gòu)不清，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂，肝竇消失，肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞漿呈空泡狀。隨著飼料中油脂添加量減少、磷脂添加量的增加，黃顙魚(yú)稚魚(yú)前腸粘膜上皮細(xì)胞中脂滴積聚現(xiàn)象逐漸減輕，杯狀細(xì)胞數(shù)目增多，肝細(xì)胞空泡化程度降低。當(dāng)飼料中添加6％磷脂時(shí)，黃顙魚(yú)前腸上皮細(xì)胞和肝