原生質(zhì)體技術(shù)在茯苓菌種復(fù)壯、育種和生活史研究中的應(yīng)用.pdf

1、本研究以茯苓栽培菌株T1和野生菌株L為材料，采用原生質(zhì)體技術(shù)進行菌株復(fù)壯與菌株間原生質(zhì)體融合，獲得了菌核產(chǎn)量高于出發(fā)菌株的復(fù)壯株與株間原生質(zhì)體融合子。具體結(jié)果如下：
　　 將茯苓菌株T1經(jīng)活化與擴大培養(yǎng)后，制備原生質(zhì)體，經(jīng)再生后挑取再生菌落136個；比較它們在CYM平板上的生長速度，篩選出25個生長速度優(yōu)于T1的再生菌株；測定25個再生菌株在麥粒和松木屑培養(yǎng)基上的菌絲生長速度，栽培試驗結(jié)果顯示，初篩和復(fù)篩再生菌株的平均菌核產(chǎn)量總

2、體上高于出發(fā)菌株T1。以CYM平板上菌絲生長速度作為初篩條件，以菌絲在松木屑培養(yǎng)基上菌絲生長速度為復(fù)篩條件，將茯苓栽培的菌核產(chǎn)量為目標(biāo)，能有效的提高育種效率。
　　 在雙親滅活原生質(zhì)體融合試驗中，紫外滅活和水浴熱滅活的最低致死時間分別為9min和20min。聚乙二醇（PEG6000）作為促融劑，T1和L兩個菌株的滅活原生質(zhì)體等量混合，融合子滅活位點互補得以再生，未融合的親本原生質(zhì)體則不能再生。拮抗試驗表明，118個再生菌落中有7

3、1個與雙親均有拮抗；上述71個再生菌株之間配對均能融合生長到一起；初步認定這71個再生菌株是融合子。采用ISSR-PCR對菌絲生長速度較快的32個融合子進行分析鑒定，其中引物P27能同時擴增出雙親特異性條帶，從分子水平進一步驗證了融合子。
　　 茯苓菌株L的原生質(zhì)體再生菌株、單孢菌株以及自身的配對實驗結(jié)果顯示：單孢菌株間，以及絕大多數(shù)原生質(zhì)體再生菌株間配對均能融合生長到一起；單孢菌株與出發(fā)菌株間的配對均出現(xiàn)拮抗；另有原生質(zhì)體再生

4、菌株LP-13、LP-25、LP-62、LP-91、LP-136與分別能與L形成柵欄型拮抗線，并且在菌絲交界處形成蜂窩或花瓣狀子實體。菌株LP-13、L、B5、T1的ITS測序結(jié)果確定它們都是茯苓菌株。對子實體進行石蠟切片與掃描電鏡的形態(tài)學(xué)觀察，揭示茯苓每個擔(dān)子上有4個擔(dān)子梗，每個擔(dān)子梗上著生了一個橢圓形的擔(dān)孢子；熒光核染色顯示茯苓擔(dān)孢子普遍是雙核的，單孢萌發(fā)的菌絲為有隔多核。
　　 以上研究表明，原生質(zhì)體再生技術(shù)結(jié)合不同培養(yǎng)基