花生體細胞雜交法的基礎(chǔ)研究.pdf

1、花生（ArachishypogaeaL.）是我國重要的油料作物和經(jīng)濟作物之一。但由于花生栽培種遺傳基礎(chǔ)狹窄、抗逆性差、易感多種病蟲害，嚴重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)?；ㄉ鷮僖吧N具有抗旱、耐貧瘠、抗病蟲性強等優(yōu)良性狀。但在常規(guī)條件下，花生栽培種與多數(shù)野生種雜交不親和，影響這些野生種的有效利用。體細胞雜交法能克服雜交不親和性，將野生種的優(yōu)良基因?qū)牖ㄉ耘喾N中。本論文進行了花生體細胞雜交法的基礎(chǔ)研究。首先以花生幼葉為外植體，建立了高頻率植株再生體系

2、;以此體系為培養(yǎng)基礎(chǔ)對花生原生質(zhì)體分離、融合及培養(yǎng)條件進行了研究，結(jié)果如下:
　　 1.以花生品種白沙1016、花育23和花育22的成熟種胚萌發(fā)5～7d的幼葉為外植體，對不定芽誘導(dǎo)及植株再生條件進行了研究。結(jié)果表明:愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基及再分化培養(yǎng)基中添加的激素及其濃度對不定芽分化及植株再生有顯著影響，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MSB5+1mg/LNAA+6mg/LBAP、再分化培養(yǎng)基以MSB5+4mg/LBAP最有利于不定芽誘導(dǎo)及植株

3、再生，白沙1016、花育23和花育22幼葉外植體先后在上述培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽誘導(dǎo)率分別達到91.8％、88.5％和78.2％。
　　 2.以7個花生品種的幼葉為外植體，對花生體細胞胚誘導(dǎo)及植株再生條件進行了研究。結(jié)果表明:不同基因型，其最適合的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基及體胚誘導(dǎo)率(20.0～90.6％)不同，花育23、魯花7、魯花16和Krapst在添加20mg/L2，4-D的培養(yǎng)基上獲得較高的體胚誘導(dǎo)率，而白沙1016在添加5mg/L

4、2，4-D的培養(yǎng)基上獲得較高的體胚誘導(dǎo)率，其中Krapst的體胚誘導(dǎo)率最高，達到90.6％;將體細胞胚轉(zhuǎn)到萌發(fā)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基中添加4mg/LBAP有利于體胚的萌發(fā)及植株再生，不添加BAP則有利于生根;不同基因型，其植株再生率(15.7％～80.5％)也不同，白沙1016最高，達到80.5％。
　　 3.對花生原生質(zhì)體分離、融合及培養(yǎng)條件進行研究。結(jié)果表明:以花育22幼葉外植體為材料解離原生質(zhì)體，在2％CellulaseOnoz

5、ukaR-10、1％MacerozymeR-10的酶溶液中最佳酶解時間是20h，原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力均較高;酶溶液中添加抗氧化劑提高了原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力，以添加10g/LPVP或100～150mg/LASA最有效;利用固液雙層培養(yǎng)法，提高了原生質(zhì)體植板率及微愈傷形成率;以葡萄糖代替蔗糖可促進細胞分裂;培養(yǎng)基中添加不同的抗氧化劑對原生質(zhì)體分裂及微愈傷形成有重要影響，以添加檸檬酸效果最好，提高了細胞的分裂率及微愈傷形成率，PVP和ASA的