西洋參與胡蘿卜體細胞雜交及雜交細胞愈傷組織質(zhì)量評價.pdf

1、目的利用植物原生質(zhì)體融合(體細胞雜交)(Somatic Hybridization)技術(shù)使細胞內(nèi)遺傳物質(zhì)重新組合,獲得新型體細胞雜種的性質(zhì),將西洋參的基因轉(zhuǎn)入胡蘿卜中,克服遠緣雜交中的不親和障礙,再生出具有產(chǎn)生高含量的單一或多種藥效成分的雜交細胞系,為西洋參的種質(zhì)資源開發(fā)、品種改良、優(yōu)化和良種選育提供理論與實驗數(shù)據(jù),同時為中藥現(xiàn)代化研究探索一條新的途徑.方法誘導(dǎo)胡蘿卜、西洋參愈傷組織并進行細胞培養(yǎng);西洋參(Panax quinquefo

2、lium L.)與胡蘿卜(Daucus carota var.sativus Hoffm.)原生質(zhì)體用PEG法進行體細胞融合,利用形態(tài)學(xué)、同工酶、染色體、隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)和5S rDNA間隔序列技術(shù)對獲得的再生愈傷組織進行雜種鑒定;采用HPLC法和紫外分光光度法分別對雜交細胞愈傷組織中人參皂苷Rb1和多糖成分進行分析.結(jié)果誘導(dǎo)出生長快速、黃色顆粒狀的胡蘿卜胚性愈傷組織,并建立了細胞懸浮系;選擇了最佳西洋參愈傷化培養(yǎng)基和繼

3、代培養(yǎng)基.體細胞融合培養(yǎng)后獲得對稱融合再生的愈傷組織29個,經(jīng)同工酶和RAPD分析初步確定了雜種細胞系,過氧化物同工酶和RAPD分析圖譜出現(xiàn)雙親特征譜帶及新帶且譜帶清晰:有效成分分析中9個含有西洋參有效藥用成分人參皂苷Rb1,6個雜交細胞愈傷組織中人參皂苷Rb1含量是未融合前西洋參愈傷組織中的1.1~2.1倍,其中2個尤為突出,多于西洋參愈傷組織含量的4倍,初步體現(xiàn)了雜種優(yōu)勢.實驗表明,利用體細胞融合技術(shù)已成功地將西洋參藥用成分人參皂苷