西洋參懸浮細(xì)胞大量培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、西洋參（Panax quinquefalium）是五加科（Aralaccae）人參屬多年生草本名貴藥材，其性較溫和，具有滋補(bǔ)、強(qiáng)心、鎮(zhèn)定、抗癌和抗衰老等多種醫(yī)療功效?，F(xiàn)代化學(xué)及藥理學(xué)研究表明：西洋參的主要有效成份是人參皂甙（Saponin），目前還不能人工合成。無論野生還是栽培的西洋參由于其自身的生理特性，一般需四至六年才能收獲入藥，產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場的需要。因此，通過細(xì)胞培養(yǎng)方法大量生產(chǎn)人參皂甙，以滿足人們的需要，具有十分重要的意義

2、和廣闊的市場前景。
　　 以四年生西洋參根為實驗材料，在MS基本培養(yǎng)基中添加2，4-D、KT等植物激素，通過對參根外植體的誘導(dǎo)和培養(yǎng)，篩選出來質(zhì)地疏松、生長快速的愈傷組織無性系。然后，通過對MS基本培養(yǎng)基中添加的2，4-D、KT、NAA、IBA等不同植物激素的濃度配比與組合的篩選，建立了西洋參愈傷組織無性系培養(yǎng)的生長培養(yǎng)基配方（MS+1.0mg/L2.4-D+0.1mg/L KT+0.5 mgL/NAA+0.5 mg/L IBA

3、+700mg/L LH+3％蔗糖）。將該愈傷組織接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，經(jīng)多次繼代，篩選獲得了分散程度好的西洋參懸浮細(xì)胞系，并對其進(jìn)行了動力學(xué)分析，表明該細(xì)胞系具有高產(chǎn)、性能穩(wěn)定的特點，可用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)人參皂甙。
　　 通過在西洋參細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過程中添加、改變各種理化因子，研究其理化因子與西洋參懸浮細(xì)胞生長量和皂甙產(chǎn)量的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)將MS培養(yǎng)基中的肌醇、煙酸、維生素B1、維生素B6、甘氨酸的濃度增加一倍，可以使西洋

4、參細(xì)胞培養(yǎng)物的生長量提高100％。西洋參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)至高峰期（20天左右），在培養(yǎng)液中添加終濃度為18-40g/L的D-半乳糖，可使西洋參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物中皂甙產(chǎn)量提高2倍以上，達(dá)到677.25mg/L。并且，D-半乳糖也具有促進(jìn)細(xì)胞生長的作用。
　　 建立并優(yōu)化了西洋參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)工藝體系：培養(yǎng)溫度（24±1）℃，培養(yǎng)液pH值6.0，生長周期是25-30天。取處于對數(shù)生長期的西洋參懸浮細(xì)胞接種到懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液中，當(dāng)細(xì)胞仍處于生長