正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選桑白皮總黃酮的提取工藝

1、<p>　　正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選桑白皮總黃酮的提取工藝</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 桑白皮;總黃酮;正交設(shè)計(jì);提取工藝 </p><p>　　桑白皮是?？浦参锷?Morus alba L.)的干燥根皮，為一常用中藥，性甘、寒，歸肺經(jīng)，具有瀉肺平喘、利水消腫功能，主治肺熱喘咳、水腫脹滿(mǎn)尿少、面目肌膚浮腫。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)桑白皮的藥理活性進(jìn)行了大量研究，并找到了一系列有效成分。桑

2、白皮主要含多種黃酮類(lèi)成分，包括桑酮、桑酮醇、桑根酮、桑根酮醇、桑素、桑皮根素等。文獻(xiàn)報(bào)道其總黃酮具有利尿、降壓、降糖、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗癌及抗HIV等作用[1]。桑白皮中總黃酮的提取方法主要有傳統(tǒng)的水煮法、醇提法及微波輔助萃取法等方法[2，3]。為了有效開(kāi)發(fā)和利用資源，本文采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)桑白皮總黃酮的提取工藝進(jìn)行了研究。 </p><p><b>　　1 材料與方法 </b></p>

3、<p>　　1.1 儀器與試劑 TU1900紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司) 。SHBⅢ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。無(wú)水乙醇AR;三氯化鋁AR;醋酸鈉AR;蘆丁(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所);桑白皮購(gòu)于藥材市場(chǎng)。 </p><p><b>　　1.2 方法 </b></p><p>　　1.2.1 樣品提取：精密稱(chēng)取5

4、.0 g桑白皮粗粉9份，置于250 ml圓底燒瓶中，按表1和表2選擇的因素水平在50℃下進(jìn)行回流提取，趁熱過(guò)濾，洗滌殘?jiān)?，收集?00 ml容量瓶中，用60%的乙醇定容，作為供試品溶液。 </p><p>　　1.2.2 總黃酮含量測(cè)定 </p><p>　　1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作：精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10 mg，置于100 ml的容量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，即得蘆丁儲(chǔ)備液(

5、0.10 mg/ml)。分別精密吸取蘆丁儲(chǔ)備液( 0.10 mg/ml) 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml于25 ml容量瓶中，加60%乙醇補(bǔ)充至6 ml，分別加入2 ml(0.1 mol/L)三氯化鋁溶液，3 ml(1 mol/ml)醋酸鈉溶液，用60%乙醇稀釋到刻度，搖勻，放置30 min，以試劑作空白參比液，于417 nm處測(cè)吸光度。測(cè)定結(jié)果用最小二乘法作線(xiàn)性回歸，吸光度(A)與濃度(C)之間的回歸

6、方程 A=0.0327C-0.0208(r=0.9999)，線(xiàn)性范圍為10.00～50.00 μg/ml。 </p><p>　　1.2.2.2 樣品中總黃酮含量的測(cè)定：精密量取供試品溶液3 ml，置10 ml容量瓶中，自“加60%乙醇補(bǔ)充至6 ml”起，按“1.2.2.1”項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算樣品溶液的濃度及黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表2。 </p><p>　　1.2.3 正交試

7、驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果：主要對(duì)乙醇濃度(A)、乙醇用量(B)、提取時(shí)間(C)及提取次數(shù)(D)等4個(gè)因素進(jìn)行四因素三水平L9(34)正交試驗(yàn)，考察因素和水平見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2。　表1 因素水平表水平因素 A/% B /倍 C/h D/次表2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果由表2中極差R值可知，在桑白皮總黃酮的提取工藝中，各因素對(duì)提取效果的影響程度為D&gt;A&gt;B&gt;C。即提取次數(shù)&gt;乙醇濃度&gt;乙醇用

8、量&gt;提取時(shí)間。從表2中K值大小可看出，A2B2C1D3為最佳工藝，即桑白皮加10倍60%的乙醇，在50℃回流提取三次，每次1 h。 </p><p>　　1.2.4 最佳工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)：為考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性，按該工藝條件進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)3次，測(cè)得桑白皮總黃酮的平均提取率為1.78 mg/g。 </p><p><b>　　2 討論 </b></p

9、><p>　　2.1 提取方法的選擇 黃酮類(lèi)化合物一般采用極性較大的溶劑進(jìn)行提取(如甲醇、乙醇、水等) [4]，故從節(jié)約時(shí)間、成本和可行性角度出發(fā)，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)比較了水煎、回流和超聲3 種方法的提取效率，結(jié)果顯示乙醇回流提取方法較好。 </p><p>　　2.2 對(duì)照品的選擇 由于蘆丁亦為黃酮類(lèi)化合物，且經(jīng)顯色后的吸收?qǐng)D譜在417 nm左右出現(xiàn)最大吸收，故采用蘆丁作為對(duì)照品測(cè)定桑白皮總黃酮的含

10、量。實(shí)驗(yàn)表明，該測(cè)定方法穩(wěn)定性好，精密度高。 </p><p>　　2.3 通過(guò)正交試驗(yàn)，確定回流提取桑白皮總黃酮最佳工藝為：將 5 g桑白皮粉末，在50℃用50 ml 60% 的乙醇回流提取1 h，提取3次。這時(shí)桑白皮總黃酮的得率為1.78 mg/g。 </p><p>　　2.4 本次實(shí)驗(yàn)選擇了對(duì)總黃酮提取影響較大的乙醇濃度、乙醇用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)為4個(gè)主要因素，其中提取次數(shù)影響

11、最大，為最顯著因子，其次為乙醇濃度和乙醇用量，提取時(shí)間影響最小。所以，實(shí)際生產(chǎn)中為可適當(dāng)縮短提取時(shí)間，減少乙醇用量，以提高效率，節(jié)約成本。 </p><p>　　該提取工藝相對(duì)于其他工藝穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便，成本低，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供了參考。 </p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】 </b></p><p>　　[1] 張明發(fā), 沈雅琴. 桑白

12、皮的藥理研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)藥，2006,27(4)：164. </p><p>　　[2] 張國(guó)剛，黎瓊紅，李樂(lè)道，等. 桑白皮中總黃酮提取工藝研究[J].中草藥，2005，36(11)：1662. </p><p>　　[3] 陳菁菁，李向榮. 微波萃取法提取桑葉和桑白皮的黃酮類(lèi)成分[J].中藥材，2006，29(10)：1090. </p><p>　　[4