磷酸三(2-丁氧基)乙酯(TBOEP)亞慢性暴露對斑馬魚的生殖損傷和內分泌干擾效應.pdf

1、近年來，火災的連續(xù)發(fā)生和蔓延，對人們的生命和財產安全造成了巨大的損失。有機磷系阻燃劑（organophosphate flame retardants，OPFRs）作為多溴聯(lián)苯(polychorinated biphenyls，PCBs)、多溴聯(lián)苯醚(poly brominated diphenyl ethers,PBDEs)的替代品，因具有極好的阻燃效果被普遍用到電子、紡織、家裝原料、交通運輸?shù)刃袠I(yè)中，在世界范圍內的需求量和使用量大幅

2、度的增加。磷酸三(2-丁氧基)乙酯(Tris(2-butoxyethyl) phosphate，TBOEP)作為一種典型的有機磷阻燃劑正在被普遍的使用，而且呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。近幾年有研究發(fā)現(xiàn)，TBOEP具有神經、發(fā)育、內分泌干擾、生殖等生物毒性，但是這些研究大多停留在宏觀個體水平，其潛在的微觀分子機制的相關研究依然匱乏。
　　本研究以成年斑馬魚為受試生物，探究了TBOEP對成年斑馬魚亞慢性暴露后的生殖毒性和內分泌干擾效應。在本研

3、究中，成年的雌雄斑馬魚相互配對地暴露在濃度為0μg/L，5μg/L，50μg/L，500μg/L的TBOEP溶液中，暴露周期為21d。在暴露結束后，我們研究了TBOEP對成年斑馬魚生殖功能的影響，包括雌魚的累積產卵量的變化，子代胚胎的成活率和孵化率，以及胚胎的卵徑等暴露終點指標，并觀察了斑馬魚性腺的病理組織學變化。我們還采用ELISA試劑盒檢測了魚體內性激素含量的變化，實時定量PCR(RT-PCR)檢查了下丘腦-垂體-性腺-肝臟(Hyp

4、othalamic-pituitary-gonadal-liver, HPGL axis)上類固醇合成相關的基因的轉錄水平的變化。主要結果如下:
　　1.在暴露結束后，TBOEP的暴露顯著地降低了雌魚的平均累積產卵量，在暴露最后一天子代胚胎的孵化率和成活率也顯著性降低，同時，卵徑也顯著性地降低。
　　2.性腺的病理組織學切片觀測發(fā)現(xiàn)TBOEP暴露后，卵巢中不成熟的卵原細胞和卵黃前期卵母細胞的比例顯著性升高，而成熟的卵黃期卵母

5、細胞和排卵前期的卵母細胞比例顯著性下降，表明TBOEP明顯抑制了卵巢中卵母細胞的成熟;在雄魚中，精巢中不成熟精母細胞比例顯著性升高，成熟的精子細胞的比例顯著性下降，表明TBOEP明顯阻滯了雄魚的精子成熟。
　　3.雌魚和雄魚血清中雌二醇(E2)的濃度在500μg/L濃度組都顯著性的升高，而只有雄魚血清中的睪酮(T)的濃度在最高濃度組顯著性的升高，此外，雌魚體內的T/E2比值在最高濃度組顯著性下降，雄魚的T/E2比值在最高濃度組顯著

6、性升高。
　　4.RT-PCR結果顯示，雌魚和雄魚HPGL軸上類固醇合成相關的基因在轉錄水平都受到了顯著地影響。其中，雌魚和雄魚腦中的基因大多數(shù)顯著性下調，只有cyp19b在雌魚和雄魚腦中都顯著性的上調;雌魚和雄魚性腺中的基因大多數(shù)顯著性上調，只有cyp19a在雄魚性腺中顯著性下調;雌魚肝臟中的基因都顯著性的上調。
　　這些結果表明TBOEP可以通過干擾斑馬魚HPGL軸破壞體內的激素平衡，影響卵泡和精子的發(fā)育成熟，最終影響生