雙須骨舌魚雌雄鑒別與性腺發(fā)育研究.pdf

1、雙須骨舌魚(Osteoglossum bicirrhosum),俗稱銀龍魚(silver arowana),隸屬于骨舌魚科(Osteoglossidae),骨舌魚屬(Osteoglossum),是現(xiàn)存的7種骨舌魚科魚類之一,素有“活化石”之稱。雙須骨舌魚原產(chǎn)于南美洲的圭亞那和亞馬遜河,在當?shù)厥且环N重要的食用魚類,但在亞洲則是一種著名的觀賞性魚類,深受人們的喜愛,具有較高的價值。但是,到目前為止,對該種魚繁殖相關生物學的研究相對較匱乏,國

2、內(nèi)繁殖技術還沒有完全成功。雙須骨舌魚雌雄魚在外部形態(tài)上難以區(qū)分,即使是在生殖季節(jié),雌雄性別特征也不明顯,另外對其性腺發(fā)育的研究也未見報道。本研究采用細胞學和分子生物學手段以及組織切片的方法對雙須骨舌魚的雌雄和性腺發(fā)育等進行了研究。以期為突破雙須骨舌魚繁殖技術提供理論基礎。主要研究結(jié)果如下:
　　1.雙須骨舌魚形態(tài)特征與核型分析
　　通過對試驗魚的觀察、測量、解剖和拍照,描述了雙須骨舌魚(Osteoglossum bicirr

3、hosum)的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構,并對其核型進行了分析:雙須骨舌魚體側(cè)扁;口上位,口裂大;側(cè)線發(fā)達,側(cè)線鱗數(shù)35-36;鰭式分別為D43-46;PⅠ-6;VⅠ-5;A50-54,C12;體長/體高5.34、體長/頭長5.23、體長/尾柄長97.62、體長/尾部長1.82;頭長/吻長3.95、頭長/眼徑6.04和頭長/眼間距2.96;體高/體寬2.05;無雌雄異型現(xiàn)象。胃發(fā)達呈U型,幽門盲囊短且粗;鰾1室,與體腔等長且位于體腔上部緊貼脊椎

4、骨。
　　以腎臟為材料,用空氣干燥法制備染色體標本,雙須骨舌魚的染色體數(shù)目為2n=56,核型公式為2sm+26st+28t,NF=58,但未見異型性染色體。
　　2.利用RSAP和SSR技術進行雙須骨舌魚的雌雄鑒定
　　采用RSAP(Restriction site amplified polymorphism)和SSR(Simple Sequence Repeats)分子標記技術,對雙須骨舌魚進行雌雄鑒定。RSAP的

5、45對引物除R1R8和R2R5不能擴增出條帶外,其余43對引物(95.6％)均能擴增出清晰的條帶,在這44對引物中R1R9、R1R10、R2R3、R2R4、R2R7、R2R8、R2R10、R3R6、R3R10、R4R9、R4R10、R6R8、R8R9等13對引物(29%)具有較好的多態(tài)性。SSR的55對引物除在調(diào)整退火溫度后都能擴增出條帶。但是,無論是RSAP還是SSR均未找到雌雄特異性片段,但我們檢驗了SSR引物的適用性并首次將RSA

6、P技術運用到了脊椎動物雙須骨舌魚中,證明了其適用性。這對RSAP技術在脊椎動物中的推廣以及利用該技術研究雙須骨舌魚的遺傳多樣性、連鎖圖譜構建和基因定位等有積極意義。
　　3.雙須骨舌魚性腺發(fā)育研究
　　在繁殖季節(jié)選取了各年齡段的雙須骨舌魚,通過對樣本的生物學數(shù)據(jù)測量,解剖性腺外部形態(tài)特征觀察,以及Bouin’s液固定后的性腺組織切片觀察等方法,對雙須骨舌魚性腺的外部形態(tài)和生殖細胞的形態(tài)以及變化情況進行了詳細的描述。通過對雌魚

7、的觀察發(fā)現(xiàn):4月齡雙須骨舌魚處于卵巢發(fā)育的Ⅱ期,所含卵母細胞絕大部分為Ⅱ時相卵母細胞,細胞核所占比例較大,約為細胞體積的一半,同時還含有少量Ⅰ時相的卵母細胞,細胞界限不明顯;8月齡至2齡雙須骨舌魚的卵巢為Ⅲ期,所含卵母細胞主要為Ⅲ時相卵母細胞,出現(xiàn)卵黃斑和卵黃顆粒;2-3齡雙須骨舌魚卵巢為第Ⅳ期卵巢,所含卵母細胞主要為第Ⅳ時相的卵母細胞,卵母細胞的最大特點是卵膜出現(xiàn)褶皺以及卵黃迅速積累;3齡以上雙須骨舌魚卵巢為第Ⅴ期卵巢,所含卵母細胞大

8、多為第Ⅴ時相卵母細胞,細胞膜表面的褶皺消失。通過對雄魚的觀察發(fā)現(xiàn):4月齡雙須骨舌魚處于精巢發(fā)育的Ⅱ期,只含有初級精母細胞,精小管結(jié)構未形成;8月齡至2齡雙須骨舌魚的精巢為Ⅲ期,所含精母細胞主要為初級精母細胞和次級精母細胞,精小管形成且小管中充滿精細胞;2-3齡雙須骨舌魚精巢為第Ⅳ期精巢,所含精母細胞主要為初級精母細胞和次級精母細胞以及精原細胞,精小管中出現(xiàn)空腔;3齡以上雙須骨舌魚精巢為第Ⅴ期精巢,所含精母細胞為次級精母細胞、精原細胞和精