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文檔簡介
1、本研究用RAPD技術、線粒體DNA上的細胞色素b基因及D-Loop序列分析方法,結合形態(tài)學性狀分析研究了美麗硬仆骨舌魚(Scleropages formosus)的3個主要自然種群:紅龍魚、金龍魚和青龍魚之間的遺傳差異,結果如下: 1.所檢測的形態(tài)學數(shù)據(jù)表明三個種群在形態(tài)上極為相似,其最明顯的差異是體色,分別為金紅色、金黃色和青灰色;此外金龍魚的軀體比紅龍魚和青龍魚的略顯肥厚,其體高和體厚的比值為1.75,而紅龍魚和青龍魚的比值分別為
2、1.95和l.94。 2.篩選出13條引物,對美麗硬仆骨舌魚12個樣本(5尾紅龍、4尾金龍和3尾青龍)進行RAPD擴增。結果從12尾龍魚中共檢測到126個位點,其中多態(tài)性位點73個,多態(tài)位點的比例為57.9%。美麗硬仆骨舌魚個體間的遺傳距離值介于O.04~O.3之間,3個群體內(nèi)的遺傳距離分別是:紅龍魚0.124,青龍魚0.119,金龍魚0.175。而群體間的遺傳距離分別是:紅龍魚與青龍魚之間為0.16,紅龍魚與金龍魚之間為0.231,金
3、龍魚與青龍魚之間為0.19。在遺傳關系圖譜上,紅龍魚和青龍魚聚為一支,金龍魚單獨聚成一支。 3.進行線粒體DNA Cytb基因序列的克隆及分析,金龍魚(Jl)、紅龍魚(H2)和青龍魚(q3)的Cytb基因的全長為1141bp,共有5個變異位點,即5個轉(zhuǎn)換位點,它們都在密碼子的第三位,所編碼的氨基酸只有1個變異。用Vector NTI suite8軟件分析個體間的遺傳距離,青龍與紅龍之間的遺傳距離為O.003,青龍與金龍的為0.004,
4、紅龍與金龍的為O.003。 4.進行線粒體DNA D-Loop序列的克隆,擴增獲得三尾(金龍魚1、紅龍魚1、紅龍魚2)美麗硬仆骨舌魚的D-Loop全序列,并對其序列特征進行分析。美麗硬仆骨舌魚D-Loop的結構與大部分魚類的相似,靠近D-Loop的5’端有3個終止相關序列TAS(I、Ⅱ、Ⅲ),靠近D-Loop的3’端有4個保守區(qū)域CSBI、CSB2、CSB3、CSB—D,在終止相關序列和保守區(qū)域之間是連續(xù)重復區(qū)域。由于每個個體的連續(xù)重復
5、區(qū)域個數(shù)的不等,導致線粒體DNA長度的異質(zhì)性。根據(jù)D-Loop全序列的測序結果設計引物擴增另外三尾(金龍魚2、青龍魚1和青龍魚2)靠近5’端的連續(xù)重復區(qū)域區(qū)及其旁側(cè)共714bp長的序列,測序并進行遺傳關系分析。在6尾美麗硬仆骨舌魚的此714bp長的D-Loop片段序列中檢測出29個轉(zhuǎn)換位點。用MEGA3.O分析此片斷得出,青龍魚與金龍魚之間的遺傳距離為O.011~O.029,青龍魚與紅龍魚之間的遺傳距離為O.013~0.03,紅龍魚與金
6、龍魚之間的遺傳距離為0.016~0.037。以澳洲星點龍魚作為外群構建遺傳關系樹。在此關系圖中,金龍魚和紅龍魚混雜且聚成一支,青龍魚單獨成一支,澳洲星點龍魚與美麗硬仆骨舌魚從進化樹的根部就已經(jīng)被分開。 用RAPD對基因組DNA的研究結果表明,紅龍魚和青龍魚之間的遺傳關系較近,金龍魚與它們的較遠而在系統(tǒng)進化樹上單獨分為一支。此分析的結果與Gen的研究結果相同,且形態(tài)學的結果也偏向于支持金龍魚的特異性。但mtDNA上Cytb和D-Loo
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