安徽琴魚的形態(tài)學(xué)鑒別和線粒體DNA的系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、琴魚（Rhinogobius SP）屬于鱸形目（Perciformes）蝦虎魚亞目(Gobioidei)蝦虎魚科(Gobiidae)吻蝦虎魚屬(Rhinogobius)，是安徽省皖南山區(qū)地方特有魚類，也是安徽省二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前琴魚的種屬關(guān)系只鑒定至吻蝦虎魚屬。由于蝦虎魚體型較小，且種類繁多，其游泳能力不強(qiáng)，許多種類由于地理隔絕等因素形成了新種或亞種，造成了蝦虎魚的分類較為混亂。本文主要從形態(tài)學(xué)和分子分類學(xué)兩個(gè)方面對(duì)

2、琴魚的種屬關(guān)系進(jìn)行鑒定和分析，得到以下結(jié)論:
　　一、琴魚外形細(xì)長(zhǎng)，前端呈圓柱狀，后部呈側(cè)扁形，雌魚體長(zhǎng)和體寬的比例較雄魚略小，且體色比雄魚淺，體被大櫛鱗，頭部無鱗、腹部無鱗，無背鰭前鱗，無側(cè)線，胸鰭透明無色，基部無黑色斑點(diǎn)，展開呈圓形，與琴魚形態(tài)學(xué)特征最為相似的是褐吻蝦虎魚和波氏吻蝦虎魚，但波氏吻蝦虎魚的胸鰭鰭條數(shù)比琴魚多2-3條，且第一背鰭上有一藍(lán)黑色斑，而褐吻蝦虎魚第一背鰭高聳呈三角形。
　　二、通過PCR擴(kuò)增得到琴魚

3、線粒體基因組全長(zhǎng)，通過序列分析，得到結(jié)論如下:琴魚線粒體基因組全長(zhǎng)16483bp（登錄號(hào):KU871066.1），堿基組成為:A(27.06％)、T(26.21％)、G(16.89％)、C(29.84％)其中G的含量相對(duì)較少，A、T、C堿基數(shù)量基本相當(dāng)，并且A+T堿基(53.27％)大于G+C堿基(46.73％)。包括37個(gè)編碼基因和一個(gè)非編碼控制區(qū)（D-loop區(qū)），編碼基因包括13個(gè)蛋白質(zhì)基因、2個(gè)rRNA基因，22個(gè)tRNA基因，

4、其中tRNA基因中的Gln、Ala、Asn、Cys、Tyr、Ser、Glu、Pro基因在L鏈上編碼，剩余的基因均編碼在H鏈上。最長(zhǎng)的非編碼區(qū)位于Asn和Cys之間，共有27bp，重復(fù)編碼區(qū)域均不超過10bp，最多為7bp。
　　三、采用了鄰接法和最大似然法兩種方法分別對(duì)16S rRNA、ND1、ND2、COXⅠ和Cyt b基因建立系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果顯示，兩種方法分別針對(duì)上述基因建立的進(jìn)化樹都明確地將琴魚歸類至吻蝦虎魚屬，支持形態(tài)學(xué)上

5、的分類結(jié)果。鄰接法構(gòu)建的進(jìn)化樹中，除ND2基因建立的進(jìn)化樹將子陵吻蝦虎魚歸類于裸頭蝦虎魚屬外，其他4個(gè)進(jìn)化樹都將吻蝦虎魚聚在一起，但屬內(nèi)種之間的親緣關(guān)系不完全相同，且屬以上層次的親緣關(guān)系差異較大。
　　最大似然法建樹，除ND2基因建立的進(jìn)化樹將子陵吻蝦虎魚歸類于裸頭蝦虎魚屬外，其他4個(gè)進(jìn)化樹都將吻蝦虎魚聚在一起。16S rRNA和COXⅠ進(jìn)化樹中，與吻蝦虎魚屬親緣關(guān)系最近的是矛尾蝦虎魚屬（Chaemrichthys）和鈍尾蝦虎魚屬

6、(Amblychaeturichthys)，ND1進(jìn)化樹中與吻蝦虎魚屬較為接近的是線塘鱧屬（Nemateleotris），ND2進(jìn)化樹中與之親緣關(guān)系最接近的屬是縞蝦虎虎魚屬（trigonocephalus），Cytb進(jìn)化樹中與吻蝦虎魚屬親緣關(guān)系較為接近的是短蝦虎魚屬（Brachygobius）。
　　四、琴魚和吻蝦虎魚的3個(gè)種以及虎魚屬的三個(gè)種遺傳距離比較。在16SrRNA基因遺傳距離明顯小于其他基因，ND1和ND2進(jìn)化速度較快，

7、COX1和Cyt b較為保守，全序列的進(jìn)化速度和Cyt b基因最為接近。與琴魚遺傳距離最短的為褐吻蝦虎魚，Mt DNA的遺傳距離接近0.095;其次是波氏吻蝦虎魚，遺傳距離為0.113。
　　綜合形態(tài)學(xué)特征和分子分類學(xué)分析結(jié)果，認(rèn)定琴魚為吻蝦虎魚一地方亞種，是否為新種還需進(jìn)一步研究鑒定。
　　本文通過形態(tài)學(xué)和分子水平兩個(gè)方面，準(zhǔn)確鑒定出琴魚的種屬關(guān)系，為開發(fā)和保護(hù)琴魚資源提供理論基礎(chǔ);同時(shí)獲得了琴魚線粒體基因組全長(zhǎng)，補(bǔ)充了G