2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩113頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、蝦蟹是我國重要的經(jīng)濟水生甲殼動物,也是出口創(chuàng)匯的重要水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。伴隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展的同時,病害造成的經(jīng)濟損失也越來越大,其中顫抖病是中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)最嚴重的流行病之一。2002年王文等首次在水生動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)致病性螺原體,2004年根據(jù)“科霍法則”確定其為中華絨螯蟹顫抖病的病原體,隨后又發(fā)現(xiàn)該螺原體還可導致南美白對蝦(Penaeus vannamei)、克氏原螯蝦(Procambarus clar

2、kia)的大規(guī)模死亡,2010年正式將其命名為中華絨螯蟹螺原體(Spiroplasma eriocheiris)。對于這一新型病原微生物的生物學特性、致病機制、防治方法等諸多方面急需深入系統(tǒng)研究。本論文應用免疫學技術、分子生物學技術、噬菌體展示肽庫篩選技術等針對中華絨螯蟹螺原體開展研究,并獲得以下主要結(jié)果:
  1、抗中華絨螯蟹螺原體系列單抗及多抗的制備及鑒定
  分別用中華絨螯蟹螺原體(S.eriocheiris)菌懸液及

3、全菌體蛋白免疫Balb/c小鼠,按常規(guī)方法融合,得到20株穩(wěn)定分泌抗S.eriocheiris抗體的雜交瘤細胞株,從中挑選4株連同本實驗室前期制備的2株雜交瘤細胞,制備、純化單克隆抗體,并進行免疫球蛋白類型、親和力、滴度以及特異性的鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),單抗5C11、5D9、6F5、12H5重鏈均為IgG1,輕鏈均為κ,單抗6H7、7C8重鏈為IgG2a,輕鏈為κ;6H7親和力最高,5D9最低;ELISA,Westernblot檢測表明,7C

4、8和6H7為S.eriocheiris特異性單抗,其余4株單抗與S.eriocheiris發(fā)生結(jié)合,同時與S.mirum、S.melliferum出現(xiàn)交叉反應;6株單抗均與江蘇省八個不同地區(qū)分離的S.eriocheiris菌株結(jié)合。多克隆抗體與S.eriocheiris結(jié)合,同時與S.mirum、Smelliferum以及解尿脲原體(U.urealyticum)出現(xiàn)交叉反應。
  2、中華絨螯蟹螺原體特定功能蛋白模擬表位的篩選及鑒

5、定
  通過制動、變形等試驗發(fā)現(xiàn),單抗6F5、7C8、12H5使S.eriocheiris形態(tài)發(fā)生明顯改變,多數(shù)螺旋結(jié)構(gòu)消失,光鏡下呈散點狀;單抗5D9及混合單抗使S.eriocheiris運動性部分喪失,光鏡下見其運動較呆板,在液面呈漂浮狀。在此基礎上,首先以S.eriocheiris特異性單抗6H7為靶分子篩選噬菌體展示十二肽庫,獲得一致性插入序列:FQGINHYNQMER,通過生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)該序列與S.eriochei

6、ris的類粘附蛋白(ALP)具有一定的同源性;Westernblot結(jié)果表明單抗6H7能夠與ALP結(jié)合;ELISA結(jié)果顯示,展示該序列的噬菌體肽能夠與6H7特異性結(jié)合,并且呈現(xiàn)劑量依賴性,S.eriocheiris能夠競爭抑制這種結(jié)合;免疫電鏡發(fā)現(xiàn)單克隆抗體6H7能夠與S.eriocheiris菌體表面結(jié)合。隨后采用相同的篩選策略,以能夠使S.eriocheiris發(fā)生形態(tài)改變的6F5,7C8,12H5三種單抗混合物作為靶分子進行肽庫的

7、篩選,獲得9種不同的氨基酸序列,通過生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)噬菌體克隆NM4.32和NM4.38的共有序列YMRDMQSGLPRY與S.eriocheiris及S.mirum的細胞形狀決定蛋白(MreB)具有很高的同源性;噬菌體克隆NM4.39的序列與非凡螺原體細胞分裂蛋白(FtsZ)有一定程度的同源性。
  3、中華絨螯蟹螺原體快速檢測方法的研究
  應用所制備的單克隆抗體及多克隆抗體建立了雙抗夾心ELISA檢測方法。該方法對

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論