橘子及其加工制品中的赤霉素檢測(cè)【開題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報(bào)告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　橘子及其加工制品中的赤霉素檢測(cè)</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><

2、p>　　赤霉素是一種廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑，幾乎在植物生長、發(fā)育的各個(gè)階段都起著調(diào)節(jié)作用。自1935年日本科學(xué)家從水稻赤霉菌中分離出一種活性制品，并得到結(jié)晶，定名為赤霉素（GA）以來，目前已從高等植物和微生物中分離出70余種赤霉素。赤霉素是植物的四大類激素之一，廣泛地存在于植物組織中。橘子(Citrus)，蕓香科，柑橘屬，原產(chǎn)地中國。在我國栽培橘子已經(jīng)有4000多年歷史，而且分布十分廣泛。我國生產(chǎn)柑橘包括臺(tái)灣省在內(nèi)有19個(gè)省(市、自

3、治區(qū))，種植的縣(市、區(qū))有985個(gè)。柑橘果實(shí)營養(yǎng)豐富，胡蘿卜素(維生素A原)含量僅次于杏，比其他水果都高。除含多種維生素外，還含鎂、硫、鈉、氯和硅等元素。同時(shí)，它色香味兼優(yōu)，既可鮮食，又可加工成以果汁為主的各種加工制品，廣受消費(fèi)者的青睞。世界有135個(gè)國家生產(chǎn)柑橘，年產(chǎn)量10282.2萬噸，面積10730萬畝，均居百果之首。我國水果總產(chǎn)量5000萬噸，位居世界首位，但出口量僅為16萬噸，占世界水果出口總量的3%。</p>

4、<p>　　中國加入世界貿(mào)易組織后，我國對(duì)外貿(mào)易的國際環(huán)境得到較大改善。然而，我國的農(nóng)產(chǎn)品出口并沒有因此而大幅度提高，直接原因是農(nóng)殘超標(biāo)，檢驗(yàn)檢疫方面不過關(guān)。根據(jù)日本肯定列表最終數(shù)據(jù)查詢  (2006年5月29日起實(shí)施)暫定 菠菜、菠蘿、草菇、草莓、橙(包括臍橙)、蔥(包括韭蔥) 大白菜、大蒜、豆瓣菜、鱷梨、番木瓜、番茄、番石榴、繁殖洋蔥等使用的最高限量MRL為0.2 ppm；美國(USA )允

5、許蘋果中的農(nóng)藥殘留限量要求（1999年3月15日）聯(lián)邦法律條款（40 CFR 120）赤霉素殘留限量（Tolerance, ppm）為0.5。然而據(jù)相關(guān)資料顯示，我國現(xiàn)在對(duì)于赤霉素檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)只有兩個(gè)：SN 0350-1995出口水果中赤霉素殘留量檢驗(yàn)方法（行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）和DB11/ T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉 6-芐基腺嘌呤、 2,4-滴、赤霉素、福美雙的測(cè)定（北京地方標(biāo)準(zhǔn)）。由此可見我國產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的制定與國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)

6、標(biāo)準(zhǔn)差距較大。同時(shí)，檢驗(yàn)檢疫實(shí)驗(yàn)室作為技術(shù)執(zhí)法的主體，檢測(cè)力量不足，檢測(cè)技術(shù)和方法落后，不僅嚴(yán)重阻礙中國農(nóng)產(chǎn)品的出口，而且造成控制產(chǎn)品質(zhì)量上的空缺，使我國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量難以與國際</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　基本內(nèi)容：</b></p><p>　　以橘子及其加工制品（如橘子罐頭等）中的赤霉

7、素為研究對(duì)象，采用SPE固相萃取結(jié)合高效液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用儀等方法，對(duì)橘子及其加工制品中的赤霉素的檢測(cè)進(jìn)行研究，并優(yōu)化其條件。</p><p>　　1、篩選適合樣品（橘子及其加工制品）的前處理方法；</p><p>　　2、采用色譜分析方法，對(duì)橘子及其加工制品中的赤霉素進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)化分析條件；</p><p>　　3、建立相關(guān)的檢測(cè)方法，并明確相關(guān)檢測(cè)方法的回收率、

8、檢測(cè)限等。</p><p><b>　　擬解決的問題：</b></p><p>　　1、樣品中赤霉素提取溶劑的選擇；</p><p>　　2、篩選出樣品中赤霉素濃縮和凈化的前處理方法；</p><p>　　3、固相萃取（SPE）與高效液相色譜檢測(cè)路線的條件優(yōu)化；</p><p>　　4、色譜條件對(duì)

9、于標(biāo)準(zhǔn)品檢出的影響，確定優(yōu)化的色譜條件。</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　　1、資料檢索：</b></p><p>　　以“赤霉素”、“GA3”、“高效液相”、“液質(zhì)聯(lián)用”、“氣相色譜”等為檢索詞，檢索中國期刊全文數(shù)據(jù)庫（1989－2010）、萬方數(shù)據(jù)庫（1989－2010）和維普數(shù)據(jù)庫（1989－20

10、10）等數(shù)據(jù)庫，以“gibberellin”、“GA3”、“HPLC” 、“LC-MS”等為關(guān)鍵詞檢索Science Director(1989,2010)，查找相關(guān)文獻(xiàn)。</p><p><b>　　優(yōu)化色譜條件：</b></p><p>　　采用高效液相色譜和LC-MS檢測(cè)器對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，分析得到赤霉素的保留時(shí)間。通過分析色譜圖，研究色譜條件的改變對(duì)標(biāo)樣

11、檢測(cè)的影響。</p><p><b>　　篩選前處理方法：</b></p><p>　　根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，采用SPE固體萃取柱將前處理后的樣品進(jìn)行凈化，并通過色譜分析的結(jié)果篩選出適合樣品（橘子及其加工制品）的前處理方法。</p><p><b>　　建立檢測(cè)方法：</b></p><p>　　根據(jù)實(shí)際樣

12、品的色譜結(jié)果，進(jìn)一步完善色譜條件等，建立相應(yīng)的檢測(cè)方法。并在此檢測(cè)方法下，確定赤霉素的檢出限，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算RSD值等。</p><p><b>　　技術(shù)路線：</b></p><p>　　橘子及其制品中赤霉素的檢測(cè)</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2009年9月—2010年11月

13、：</p><p>　　1、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：查找資料，文獻(xiàn)綜述的撰寫，英文參考文獻(xiàn)的翻譯；</p><p>　　2、文獻(xiàn)整理，實(shí)驗(yàn)方案的確定，完成開題報(bào)告。</p><p>　　2010年10月—2011年３月：</p><p><b>　　1、開展實(shí)驗(yàn)；</b></p><p>　　2、優(yōu)化實(shí)

14、驗(yàn)方案中的各條件；</p><p>　　3、獲得實(shí)驗(yàn)過程中的各類數(shù)據(jù)。</p><p>　　2011年3月—2011年5月：</p><p>　　1、整理和補(bǔ)充相關(guān)數(shù)據(jù)，整理實(shí)驗(yàn)結(jié)果；</p><p><b>　　2、撰寫論文初稿；</b></p><p><b>　　3、論文定稿。&l

15、t;/b></p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]中國農(nóng)科院植保研究所等編.農(nóng)藥分析,化學(xué)工業(yè)出版社,北京,1998.</p><p>　　[2]李金,石晶,趙曉亮等.分析化學(xué)，1994,22 (8):80 1-804.</p><p>　　[3]丁 靜,沈鎮(zhèn)德,方亦雄,

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17、><p>　　[6]印天壽, 陳世勇, 于群英, 等. 赤霉素的快速分光光度測(cè)定法的研究[J]. 分析化學(xué), 1990, 18 (10) : 966- 969.</p><p>　　[7]中國科學(xué)院植物研究所、遺傳研究所“920” 編寫小組.“920”農(nóng)藥技術(shù)資料匯編.第l集.北京:科學(xué)出版社1970.</p><p>　　[8]陳玉鑾, 王占文, 孫思祥. 赤霉素的磷

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19、-39.</p><p>　　[11]Shengjie Hou, Jiang Zhu, Mingyu Dinga, et al.Simultaneous determination of gibberellic acid, indole-3-acetic acid and abscisic acid in wheat extracts by solid-phase extraction and liquid ch

20、romatography–electrospray tandem mass spectrometry[J].Talanta,2008(76):798–802.</p><p>　　[12]王 勇,程金芬.高效液相色譜法檢測(cè)赤霉素A3組份[J].中國抗生素雜志,1990,4:35-37.</p><p>　　[13]陳小鵬,王秀峰,孫小鐳,等.高效液相色譜測(cè)定黃瓜瓜條中赤霉素和脫落酸含量[J

21、].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2005(1):65-67.</p><p>　　[14]唐根源,吳紅京.高效液相色譜法測(cè)定小麥幼苗中植物生長調(diào)節(jié)劑[J].分析試驗(yàn)室,1997,16(5):66-69.</p><p>　　[15]朱智甲,郝振芳,張曉惠,等.高效液相色譜紫外檢測(cè)法測(cè)定小麥幼苗中的內(nèi)源激素[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,1999,16(3):281-283.</p><p>

22、　　[16]湛社霞,孫世宏,臧李納,等.高效液相色譜法測(cè)定水果中的赤霉素、苯甲酸、糖精鈉和胭脂紅[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(7):1330-1332.</p><p>　　[17]陳波浪,鄭春霞,盛建東,等.HPLC分離和測(cè)定棉花中3種植物激素[J].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(1):28-30.</p><p>　　[18]XIE JUN，ZHANG Yizheng.

23、 Determination of plant intrinsic hormones by reversed-phase high-performance liquid chromatography [J].Journal of Instrumenta1 Analysis.2001,1:60-62.</p><p>　　[19]WANG Ruozhong, XIAO Langtao, LAN Wanhuang,

24、et a1. High performance liquid chromatographic determination of internal hormones in inter-subspecific hybrid rice [J].Chinese．Journal of Chromatography.2002,2:148-157.</p><p>　　[20]張有林,黨 婭,張 靜,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)

25、定銀鳳桃中的赤霉素和脫落酸[J].西北植物學(xué)報(bào),2005,25(7):1467-1471.</p><p>　　[21]Grolamys Castillo , Servando Martinez. Reversed-phase C18 high-performance liquid chromatography of gibberellins GA3 and GA1[J].Journal of Chromatog

26、raphy A,1997, 782 (1):137-139.</p><p>　　[22]葛雅琨,張?jiān)?胡 睿,等.蔬菜中赤霉素殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法研究[J].吉林化工學(xué)院學(xué)報(bào),2005,22(2):13-16.</p><p>　　[23]張 政,張 強(qiáng),王轉(zhuǎn)花.高效液相色譜法測(cè)定赤霉素A3的含量[J].色譜,1993,11(4):254-255.</p><

27、;p>　　[24]顧覺奮,王義明,劉文華.赤霉素A3的反相高壓液相色譜分析[J].中國抗生素雜志,1991,16(5):370-375.</p><p>　　[25]張玉宗,陳振玲,呂杏者,等.高效液相色譜法測(cè)定谷子幼苗中的GA1和GA3[J].色譜,1999,17(5):469-472.</p><p>　　[26]喬坤云,張 敏.高壓液相色譜測(cè)定新疆庫爾勒香梨中赤霉素(GA3)方

28、法研究[J].特產(chǎn)研究,2002(4):25-26.</p><p>　　[27]朱曙東,趙 琛,趙文君,等.反相高效液相色譜分析赤霉素GA3含量[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1993,28(10):788-791.</p><p>　　[28]黃紅林,劉 實(shí),張?zhí)抑?固相萃取一高效液相色譜測(cè)定番茄中的赤霉素GA3殘留[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào),2005,25(1):75-77.</p>&l

29、t;p>　　[29]付 磊,陶燕飛.氣相色譜法測(cè)定草莓中的赤霉素[J].武漢科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2002,25(4):359-360.</p><p>　　[30]許慶琴，范哲鋒,杜黎明.大口徑毛細(xì)管氣相色譜法快速測(cè)定植物組織中的赤霉素[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2000,16(6):524.</p><p>　　[31]黃紅林,張?zhí)抑?劉 實(shí),等.SPE—GC—MS選擇離子法直

30、接測(cè)定果品中赤霉素殘留量[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),2006,3:194-196.</p><p>　　[32]馬煥普.用GC—MS檢測(cè)蘋果種子層積過程中內(nèi)源MeJA,GA3,GA4和GA7的變化[J].植物生理學(xué)報(bào),1996,22(1):81-88.</p><p>　　[33]吳 萍,劉 玲.芥藍(lán)未熟種子赤霉素的GC／MS定性分析[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),1997,18(2):67-76.&l

31、t;/p><p>　　[34]梁 沛,張?zhí)抑?黃紅林.固相萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水果中的赤霉素GA3殘留[J].第四屆海峽兩岸分析化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集,2006(11):68-69.</p><p>　　[35]劉艷琴,王浩,楊紅梅,等.高效液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素殘留量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(16):330-331.</p><p&g

32、t;　　[36]王 駿,張 卉,胡 梅,等.液相色譜一質(zhì)譜測(cè)定獼猴桃中赤霉素和脫落酸的含量[J].食品工業(yè),2008(4):74-76.</p><p>　　[37]Shengjie Hou, Jiang Zhu, Mingyu Dinga,et al. Simultaneous determination of gibberellic acid, indole-3-acetic acid and abscisi

33、c acid in wheat extracts by solid-phase extraction and liquid chromatography–electrospray tandem mass spectrometry[J].Talanta,2008(76):798–802.</p><p>　　[38]何解定.中國突破農(nóng)產(chǎn)品出口技術(shù)壁壘的對(duì)策研究[J].社會(huì)縱橫,2009,24(14):28-29.&

34、lt;/p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　果蔬中赤霉素檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀</p><p>　　摘 要：赤霉素是廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)各領(lǐng)域的一種植物激素，其殘留過量則會(huì)對(duì)人體造成危害。目前我國還沒有建立關(guān)于赤霉素的國

35、際標(biāo)準(zhǔn)。本文介紹了我國果蔬出口國的赤霉素含量的要求，分析了傳統(tǒng)檢測(cè)赤霉素方法的缺點(diǎn)，并重點(diǎn)介紹了目前用于果蔬中赤霉素的檢測(cè)方法及其研究現(xiàn)狀。</p><p>　　關(guān)鍵詞：赤霉素；檢測(cè)；高效液相色譜</p><p>　　赤霉素是一種廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑，幾乎在植物生長、發(fā)育的各個(gè)階段都起著調(diào)節(jié)作用。赤霉素在植物體內(nèi)的形成部位一般是嫩葉、芽、幼根以及未成熟的種子等幼嫩組織。1926年日本病理學(xué)

36、家黑澤在水稻惡苗病的研究中發(fā)現(xiàn)水稻植株發(fā)生徒長是由赤霉菌的分泌物所引起的。1935年日本藪田從水稻赤霉菌中分離出一種活性制品，并得到結(jié)晶，定名為赤霉素（GA）。第一種被分離鑒定的赤霉素稱為赤霉酸（GA3），現(xiàn)已從高等植物和微生物中分離出70余種赤霉素。</p><p>　　圖1 赤霉素的結(jié)構(gòu)圖</p><p>　　赤霉素中生理活性最強(qiáng)、研究最多的是GA3。它能顯著地促進(jìn)植物莖、葉生長，特別

37、是對(duì)遺傳型和生理型的矮生植物有明顯的促進(jìn)作用；能代替某些種子萌發(fā)所需要的光照和低溫條件，從而促進(jìn)發(fā)芽；可使長日照植物在短日照條件下開花，縮短生活周期；能誘導(dǎo)開花，增加瓜類的雄花數(shù)，誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)，提高坐果率，促進(jìn)果實(shí)生長，延緩果實(shí)衰老。除此之外，GA3還可用于防止果皮腐爛；在棉花盛花期噴灑能減少蕾鈴脫落；馬鈴薯浸種可打破休眠；大麥浸種可提高麥芽糖產(chǎn)量等等。 </p><p>　　赤霉素作用廣泛[1,2]，但屬

38、于低毒植物生長調(diào)節(jié)劑，當(dāng)大量使用時(shí)會(huì)產(chǎn)生一定毒性。我國目前還沒有相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)，有必要建立高靈敏、快速的赤霉素殘留檢測(cè)方法。</p><p>　　1 國內(nèi)外赤霉素限量要求</p><p>　　根據(jù)日本肯定列表最終數(shù)據(jù)查詢  (2006年5月29日起實(shí)施) 暫定 菠菜、菠蘿、草菇、草莓、橙(包括臍橙)、蔥(包括韭蔥) 大白菜、大蒜、豆瓣菜、鱷梨、番木瓜、番茄、番

39、石榴、繁殖洋蔥等使用的最高限量MRL為0.2 ppm。美國(USA )允許蘋果中的農(nóng)藥殘留限量要求（1999年3月15日）聯(lián)邦法律條款（40 CFR 120）赤霉素殘留限量（Tolerance, ppm）為0.5。中國臺(tái)灣2007年2月1日公布了有關(guān)食品內(nèi)殺蟲劑殘留限量草案以及擬撤消殺蟲劑最大殘留限量(MRLs)遺漏名單中的殺蟲劑，草案對(duì)芹菜內(nèi)的赤霉素(gibberellicacid)也規(guī)定了最大殘留限量。</p><

40、;p>　　在國內(nèi)關(guān)于赤霉素檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)有以下兩個(gè)：①SN 0350-1995出口水果中赤霉素殘留量檢驗(yàn)方法（Method for the determination of gibberellic acid residues in fruits for export），此為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，主要采用方法為熒光分光光度計(jì)法；②DB11/ T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉、6-芐基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美雙的測(cè)定，此為北京地方

41、標(biāo)準(zhǔn)，主要采用方法為HPLC-DAD法。但是，目前還未建立相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　2 果蔬中赤霉素的檢測(cè)方法</p><p>　　赤霉素的測(cè)定方法主要有三大類：生物鑒定法、免疫法和物理化學(xué)法。生物鑒定法靈敏度雖高，但準(zhǔn)確度不很好，且操作費(fèi)時(shí)[3]；免疫法的準(zhǔn)確度和靈敏度很高，但因制備抗體復(fù)雜而難以推廣[4]。常見的理化測(cè)定法主要有熒光比色法、紫外分光光度法、溴酸鉀滴定法[5]

42、、福林反應(yīng)法[6]、2,4-二硝基苯肼比色法[7]、磷鉬雜多酸法[8]等。熒光法[9,10]是GA測(cè)定的經(jīng)典方法，但該法操作過繁，試劑消耗量大，且需要真空泵及冰浴等條件；紫外分光光度法的準(zhǔn)確度都易受雜質(zhì)的干擾而降低；溴酸鉀滴定法選擇性較差，不能用于發(fā)酵液中赤霉素測(cè)定。而且這些方法都只能檢測(cè)同系混合物的總量，不能分辨各有效成分，尤其是GA3含量，因此不符合檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，特別是不能滿足出口檢驗(yàn)要求。</p><p>　　

43、隨著色譜儀、質(zhì)譜儀的出現(xiàn)，很大程度上解決了這一大難題。質(zhì)譜分析儀具有高靈敏度和選擇性，因此是檢測(cè)植物激素最有效的檢測(cè)器。最近幾年，LC–ESI-MS/MS已被用于檢測(cè)植物樣品中的IAA和ABA，但是被用于檢測(cè)GA3的報(bào)道比較少[11]。國內(nèi)外對(duì)果蔬原料中的赤霉素進(jìn)行定性和定量的研究常采用HPLC法、GC-MS法、LC-MS法等方法。</p><p>　　2.1 高效液相色譜法</p><p&g

44、t;　　高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法。在70年代末，高效液相色譜開始逐步用于檢測(cè)除乙烯以外的植物激素。國外研究者那時(shí)也開始研究用高效液相色譜儀來分離檢測(cè)赤霉素組份的含量了。Reeve等人在把赤霉素各組份的羧基酯化后，再用高效液相色儀來分離其酯化衍生物。Lin J.T.等則是用反相高效液相色譜技術(shù)來直接分離赤霉素各組份。實(shí)驗(yàn)證明[12]高效液相色譜對(duì)赤霉素的定性、定量測(cè)量是準(zhǔn)確可靠的。</p><p>

45、　　目前，HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜測(cè)定植物樣品中內(nèi)源激素含量時(shí)，經(jīng)常見到分離效果差、峰形不良及嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，這些都與流動(dòng)相、流速、檢測(cè)器種類和檢測(cè)波長關(guān)系很大，因此選擇合適的內(nèi)源激素提取方法和色譜條件較為重要[13]。</p><p>　　赤霉素是重要的內(nèi)源性激素之一，在植物中的含量較少，為方便檢測(cè)，很多研究建立同時(shí)檢測(cè)植物中多種激素的方法。唐根源[14]和朱智甲[15]

46、等人均采用用反相高效液相色譜紫外檢測(cè)法來測(cè)定麥苗中激素的含量，選擇最佳色譜條件顯儀器參數(shù)，建立了相應(yīng)的檢測(cè)法。湛社霞等人[16]研究并建立高效液相色譜法測(cè)定水果中赤霉素、苯甲酸、糖精鈉和胭脂紅含量的方法。陳波浪等[17]采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定棉花體內(nèi)吲哚3-乙酸(IAA)、玉米索(Z)和赤霉素(GA3)。但是同時(shí)檢測(cè)多種植物激素不能獲得每種植物激素的詳細(xì)信息，同時(shí)，隨著貿(mào)易問題的加劇，建立特定植物激素在植物中的定性和定量方法

47、也顯得越來越重要。</p><p>　　通過改變色譜條件及適當(dāng)?shù)那疤幚矸椒?，可以使植物?nèi)源性激素的有效分離，從而建立單獨(dú)檢測(cè)果蔬中赤霉素的HPLC方法。高效液相色譜法(HPLC)具有靈敏度高、專一性強(qiáng)和重復(fù)性好等特點(diǎn)，謝君[18]曾采用HPLC 內(nèi)標(biāo)法測(cè)定GA3和ABA，但內(nèi)標(biāo)物必須具有和測(cè)定物相似的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，因而確定內(nèi)標(biāo)物難度較大。但是由于赤霉素在植物中的含量較少，因此前處理很關(guān)鍵。王若仲等[19]用HPLC

48、測(cè)定GA3和ABA，在樣品提取過程中要連續(xù)經(jīng)過3種分離柱(PVPP，DEAE，Sep-Pak C18)，前處理十分復(fù)雜。對(duì)此，張有林等[20]采用HPLC外標(biāo)法同時(shí)分離和測(cè)定GA3和ABA，前處理簡單，所測(cè)成分損失少，靈敏度高，并具有較高的回收率和精密度。而Grolamys Castillo和Servando Martinez[21]則采用反相C18高效液相色譜法，建立了赤霉素GA3和GA1的檢測(cè)方法。葛雅琨等[22]使用高效液相色譜(

49、HPLC)對(duì)蔬菜中的農(nóng)藥GA3殘留進(jìn)行分析檢測(cè)，建立了液液萃取與SPE-PAK C18固相萃取相結(jié)合純化GA3的方法。通過不同的加標(biāo)方式及優(yōu)化前處理和檢測(cè)方法，可以有效地提高赤霉素的分</p><p>　　目前在植物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的108種赤霉素中，A1（GA1）和赤霉素A3（GA3）是影響植物株高的主要因素，一般常以生理活性最強(qiáng)的GA3作為檢測(cè)指標(biāo)。GA1和GA3的結(jié)構(gòu)類似且各自的質(zhì)量比很低，檢測(cè)起來很困難，曾經(jīng)通用

50、一時(shí)的熒光比色法、碘量法等都只能測(cè)出赤霉素總含量，而不能測(cè)出各個(gè)成分的含量。對(duì)此，張政等[23]采用反相HPLC方法，實(shí)現(xiàn)了農(nóng)用赤霉素各組分較好地分開。赤霉索A3為極性物質(zhì)，發(fā)酵液中一些雜質(zhì)為非極性物質(zhì)，顧覺奮等[24]針對(duì)赤霉素的這個(gè)特點(diǎn)，采用用反相色譜柱，就使赤霉素的色譜峰出現(xiàn)較早，這樣既節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。張玉宗等[25]研究發(fā)現(xiàn)采用價(jià)格便宜的甲醇-磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，10Min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了GA1和GA3的分離。喬坤云等[26]也通過優(yōu)

51、化色譜條件和色譜參數(shù)，建立了新疆庫爾勒香梨中赤霉素（GA3）高壓液相色譜的測(cè)定方法。</p><p>　　高效液相色譜除了可以有效地分離植物內(nèi)的各個(gè)赤霉素同系物，同時(shí)還可以用于赤霉素的定量檢測(cè)。朱曙東等[27]在研究赤霉素的定量檢測(cè)方法時(shí)，運(yùn)用RP-HPLC成功地將GA3與其它組分分離，建立了精確測(cè)定GA3含量的新方法。其優(yōu)越性全面超出各傳統(tǒng)分析方法，可望成為赤霉素質(zhì)量分析的標(biāo)準(zhǔn)方法。黃紅林等[28]研究建立了固

52、相萃取-高效液相色譜(SPE-HPLC)法來分析測(cè)定番茄中赤霉素GA3殘留量。</p><p>　　2.2 GC 和GC-MS法</p><p>　　近年來，質(zhì)譜儀的出現(xiàn)為檢測(cè)果蔬中的赤霉素創(chuàng)造了條件。采用GC和GC—MS等儀器進(jìn)行分析檢測(cè)，靈敏度高，重復(fù)性好，尤其適用于痕量植物樣品的測(cè)定。</p><p>　　氣相色譜常被用于檢測(cè)植物果蔬中的各種農(nóng)藥殘留，特別適用

53、于揮發(fā)性的物質(zhì)的檢測(cè)。付磊[29]研究草莓中外源植物激素GA3時(shí)采用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)分析，建立了一種采用530μm大口徑毛細(xì)管色譜柱、不經(jīng)衍生化處理而直接測(cè)定植物生長素GA3的氣相色譜方法。許慶琴等[30]對(duì)不同固定相的大口徑毛細(xì)管柱進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)赤霉素在非極性固定相毛細(xì)管柱中不僅靈敏度高、出峰速度快，而且重現(xiàn)性好。采用太口徑毛細(xì)管色譜柱，無需衍生化處理，直接進(jìn)樣測(cè)定樣品中赤霉素含量結(jié)果令人滿意。</p><p&g

54、t;　　為了更加準(zhǔn)確地對(duì)赤霉素進(jìn)行定性分析，很多研究中往往采用靈敏度高、檢測(cè)限較低的質(zhì)譜儀，特別能適用于在植物中含量本身就比較微量的赤霉素。黃紅林等[31]采用固相萃取代替?zhèn)鹘y(tǒng)的液液萃取，研究了樣品在C18萃取柱上的保留行為，純化效果顯著。采用HP-1的色譜柱，無需柱前衍生化，直接進(jìn)樣GC-MS測(cè)定，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)克服了樣品基體干擾，靈敏度較全譜掃描高。并建立了固相萃氣相色譜質(zhì)譜選擇離子(SPE-GC-MSIM)直接分析果品中赤

55、霉素(GA3)殘留量的方法。馬煥普[32]已將GC-MS方法用于檢測(cè)蘋果種子層積過程中GA7的變化，并獲得了相關(guān)的檢測(cè)數(shù)據(jù)。</p><p>　　GAs的結(jié)構(gòu)具有較多的相似之處，用常規(guī)的理化分析方法很難將每一種GA進(jìn)行有效的分離及定性分析，而質(zhì)譜儀則可以通過對(duì)GAs的定性分析，找到特征GAs，繼而進(jìn)行更深入的研究工作。吳萍等[33]先借助生物試法對(duì)芥藍(lán)中的赤霉素進(jìn)行必要的分離純化，并采用質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)了

56、對(duì)芥藍(lán)種子中GAs的定性、定量分析。 </p><p>　　2.3 LC-MS法</p><p>　　隨著聯(lián)用技術(shù)的日趨完善，HPLC-MS逐漸成為最熱門的分析手段之一。HPLC -MS作為已經(jīng)比較成熟的技術(shù)，目前己在生化分析、天然產(chǎn)物分析、藥物和保健食品分析以及環(huán)境污染物分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。利用HPLC-MS分析混合樣品，和其他方法相比具有高效快速，靈敏度高，只需品進(jìn)行簡

57、單預(yù)處理或衍生化，尤其適用于含量少、不易分離得到或在分離過程中易的組分。</p><p>　　梁沛等[34]采用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行處理，以液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜為檢測(cè)手段，建立了測(cè)定水果中赤霉素GA3殘留的新方法，可以為確定赤霉素殘留標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。劉艷琴等[35]也采用高效液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)來測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素，并建立了相關(guān)的檢測(cè)方法。該法具有樣品處理簡單、測(cè)定周期短等優(yōu)點(diǎn)，適用于大量樣品的快速篩選

58、、測(cè)定。王駿等[36]建立用HPLC-MS測(cè)定獼猴桃中赤霉素和脫落酸殘留量的方法。盛杰厚等[37]則是采用固相萃取和液質(zhì)聯(lián)用儀，同時(shí)檢測(cè)小麥種的赤霉素、吲哚乙酸和脫落酸，并獲得了較高的回收率。</p><p><b>　　3 總結(jié)與展望</b></p><p>　　我國是果蔬生產(chǎn)和出口大國，然而由于發(fā)達(dá)國家的技術(shù)壁壘[38]，我國的果蔬出口量并沒有因進(jìn)入WTO 而大幅

59、度的提高。所以，建立和完善果蔬中的農(nóng)藥殘留及各種限量物質(zhì)的檢測(cè)方法越來越重要。</p><p>　　目前，高效液相和氣相色譜法在果蔬赤霉素檢測(cè)上的應(yīng)用及研究越來越廣泛。由于質(zhì)譜儀的檢測(cè)較靈敏、檢測(cè)限低，開始對(duì)聯(lián)用技術(shù)有了初步的探索。隨著科技的不斷發(fā)展進(jìn)步，聯(lián)用檢測(cè)技術(shù)將會(huì)成為未來研究的重點(diǎn)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><

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67、7):1330-1332.</p><p>　　[17]陳波浪,鄭春霞,盛建東,等.HPLC分離和測(cè)定棉花中3種植物激素[J].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(1):28-30.</p><p>　　[18]XIE JUN,ZHANG Yizheng. Determination of plant intrinsic hormones by reversed-phase high-per

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69、rnal hormones in inter-subspecific hybrid rice [J].Chinese.Journal of Chromatography. 2002,2:148-157.</p><p>　　[20]張有林,黨 婭,張 靜,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定銀鳳桃中的赤霉素和脫落酸[J].西北植物學(xué)報(bào),2005,25(7):1467-1471.</p><p>　

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72、375.</p><p>　　[25]張玉宗,陳振玲,呂杏者,等.高效液相色譜法測(cè)定谷子幼苗中的GA1和GA3[J].色譜,1999,17(5):469-472.</p><p>　　[26]喬坤云,張 敏.高壓液相色譜測(cè)定新疆庫爾勒香梨中赤霉素(GA3)方法研究[J].特產(chǎn)研究,2002(4):25-26.</p><p>　　[27]朱曙東,趙 琛,趙文君,等.

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74、59-360.</p><p>　　[30]許慶琴,范哲鋒,杜黎明.大口徑毛細(xì)管氣相色譜法快速測(cè)定植物組織中的赤霉素[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào),2000,16(6):524.</p><p>　　[31]黃紅林,張?zhí)抑?劉 實(shí),等.SPE—GC—MS選擇離子法直接測(cè)定果品中赤霉素殘留量[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),2006,3:194-196.</p><p>　　[32

75、]馬煥普.用GC—MS檢測(cè)蘋果種子層積過程中內(nèi)源MeJA,GA3,GA4和GA7的變化[J].植物生理學(xué)報(bào),1996,22(1):81-88.</p><p>　　[33]吳 萍,劉 玲.芥藍(lán)未熟種子赤霉素的GC/MS定性分析[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),1997,18(2):67-76.</p><p>　　[34]梁 沛,張?zhí)抑?黃紅林.固相萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水果中的赤霉素GA3殘留[J

76、].第四屆海峽兩岸分析化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集,2006(11):68-69.</p><p>　　[35]劉艷琴,王浩,楊紅梅,等.高效液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素殘留量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(16):330-331.</p><p>　　[36]王 駿,張 卉,胡 梅,等.液相色譜一質(zhì)譜測(cè)定獼猴桃中赤霉素和脫落酸的含量[J].食品工業(yè),2008(4):74-76

77、.</p><p>　　[37]Shengjie Hou, Jiang Zhu, Mingyu Dinga,et al. Simultaneous determination of gibberellic acid, indole-3-acetic acid and abscisic acid in wheat extracts by solid-phase extraction and liquid chrom

78、atography–electrospray tandem mass spectrometry[J]. Talanta,2008(76):798–802.</p><p>　　[38]何解定.中國突破農(nóng)產(chǎn)品出口技術(shù)壁壘的對(duì)策研究[J].社會(huì)縱橫,2009,24(14):28-29.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p&g

79、t;<b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　橘子及其加工制品中的赤霉素檢測(cè)</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1引言2</b></p><p>　　1.1 橘子及其加工制品的進(jìn)出口現(xiàn)狀2</p>&l

80、t;p>　　1.2 赤霉素的作用2</p><p>　　1.3 赤霉素的檢測(cè)現(xiàn)狀3</p><p>　　1.3.1 高效液相色譜法3</p><p>　　1.3.2 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法3</p><p>　　1.3.3 氣相色譜法 和GC-MS法3</p><p>　　1.4 研究的目的與意

81、義4</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)材料與方法4</p><p>　　2.1 儀器與設(shè)備5</p><p>　　2.2 試劑和材料5</p><p>　　2.3 實(shí)驗(yàn)步驟5</p><p>　　2.3.1 提取5</p><p>　　2.3.2 凈化6</p>

82、<p>　　2.3.3 檢測(cè)6</p><p>　　2.4 色譜條件6</p><p>　　2.4.1 液相色譜參考條件6</p><p>　　2.4.2 質(zhì)譜參考條件6</p><p>　　2.5 結(jié)果計(jì)算7</p><p>　　2.5.1 計(jì)算赤霉素的回收率7</p>

83、<p>　　2.5.2 計(jì)算橘子樣品中赤霉素的殘留量7</p><p><b>　　3 結(jié)果與討論8</b></p><p>　　3.1 前處理方法的優(yōu)化8</p><p>　　3.1.1 提取液的確定8</p><p>　　3.1.2 提取過程的條件優(yōu)化8</p><p&

84、gt;　　3.1.3 固相萃取柱的選擇8</p><p>　　3.2 色譜條件的優(yōu)化10</p><p>　　3.2.1 流動(dòng)相的選擇10</p><p>　　3.2.2 進(jìn)樣量的大小的確立11</p><p>　　3.3 檢測(cè)儀器的改進(jìn)11</p><p>　　3.3.1 高效液相色譜法11&

85、lt;/p><p>　　3.3.2 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法12</p><p>　　3.3.3 超級(jí)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法12</p><p>　　3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及最低檢測(cè)限13</p><p>　　3.5 回收率及變異系數(shù)的測(cè)定14</p><p>　　3.6 橘子樣品的檢測(cè)15</p>

86、<p><b>　　4 結(jié)論15</b></p><p>　　致 謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)16</b></p><p>　　摘 要： 本論文提出了在橘子及其加工制品中檢測(cè)赤霉素殘留的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法。橘子樣品采用90%的丙酮溶液提取，經(jīng)MAX柱凈化，最后用甲醇定容

87、檢測(cè)。色譜柱為Atlantis C18柱(3µm, 2.1mm×150mm )；流動(dòng)相為甲醇-水及0.01m M的磷酸緩沖液；赤霉素質(zhì)譜測(cè)定的定量離子對(duì)為345.0→239.0，主要定性離子對(duì)分別為345.0→143.1、345.0→221.1以及345.0→83.1。赤霉素濃度在0.01µg/mL～0.1µg/mL范圍內(nèi)，藥物峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.9991。該方法具有較好

88、的回收率及穩(wěn)定性，赤霉素的最低檢測(cè)限為0.01µg/mL定量下限可達(dá)2µg/kg，低于美國、日本等國家和地區(qū)對(duì)赤霉素在水果蔬菜中的最高殘留0.2ppm的規(guī)定。</p><p>　　關(guān)鍵詞：橘子及其加工制品；赤霉素；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；檢測(cè)</p><p>　　Abstract：A method of LC-M S-MS for the detection of gibbe

89、rellin residue in mandarin orange and its processing produces has been developed. Samples were extracted with 90% acetonewater solution before being purified by MAX solid phase. At last, using methanol to make the volume

90、 constant. The solution was separated on a C18 reversed-phase column(3µm, 2.1mm×150mm ), using methanol-water containing 0.01 mM phosphate as the mobile phase. Qualitative ion of SRM was 345.0→239.0 for GA3, an

91、d its main qu</p><p>　　Key words：Mandarin orange and its processing produces; Gibberellin; LC-MS-MS; Detection</p><p><b>　　1引言</b></p><p>　　1.1 橘子及其加工制品的進(jìn)出口現(xiàn)狀</p&

92、gt;<p>　　橘子含水量高、營養(yǎng)豐富，含大量維生素C、枸櫞酸及葡萄糖等十余種營養(yǎng)物質(zhì)。食用得當(dāng)，能補(bǔ)益肌體，特別對(duì)患有慢性肝炎和高血壓患者，多吃蜜橘可以提高肝臟解毒作用，加速膽固醇轉(zhuǎn)化，防止動(dòng)脈硬化。</p><p>　　橘子及橘子罐頭是中國的大宗出口產(chǎn)品，已成為部分地區(qū)主要的經(jīng)濟(jì)來源。十年前，憑借著原料價(jià)格和人力資源的相對(duì)優(yōu)勢(shì)，中國橘子罐頭就迅速占領(lǐng)了日本市場和歐美市場，成了進(jìn)口商的搶手貨，成

93、交額約占世界貿(mào)易量的80％以上。2002年中國橘子罐頭的出口約占世界貿(mào)易量的三分之一。中國罐頭行業(yè)的出口強(qiáng)勢(shì)引起了西班牙的不滿，以往該國產(chǎn)品也主要銷往歐美市場，是與中國競爭市場份額的惟一對(duì)手。西班牙不甘心自己的失利，向歐盟委員會(huì)提出申請(qǐng)，希望對(duì)原產(chǎn)于中國的橘子罐頭采取保障措施[1]，歐盟將研究上調(diào)該產(chǎn)品的關(guān)稅或采取限額進(jìn)口的做法。</p><p>　　浙江省是橘子罐頭生產(chǎn)大省，占全國產(chǎn)量的80%，全世界產(chǎn)量的70

94、%，對(duì)歐盟的出口量也在全國各省份中居于首位。據(jù)寧波檢驗(yàn)檢疫局統(tǒng)計(jì)，2007年，寧波地區(qū)共出口桔子罐頭92389.68噸，金額7306.20萬美元，比上年分別增長0.72%和3.72%，約為全國出口桔子罐頭總量的三分之一，成為全國出口桔子罐頭最多的城市。據(jù)象山檢驗(yàn)檢疫局統(tǒng)計(jì)，2010年前10個(gè)月，象山地區(qū)共出口橘子罐頭1026批、29433.74噸、貨值3281.5萬美元，同比分別增長16.2%、19.7%和14%。</p>

95、<p>　　1.2 赤霉素的作用</p><p>　　赤霉素是一種廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑，幾乎在植物生長、發(fā)育的各個(gè)階段都起著調(diào)節(jié)作用。赤霉素在植物體內(nèi)的形成部位一般是嫩葉、芽、幼根以及未成熟的種子等幼嫩組織。1926年日本病理學(xué)家黑澤在水稻惡苗病的研究中發(fā)現(xiàn)水稻植株發(fā)生徒長是由赤霉菌的分泌物所引起的。1935年日本藪田從水稻赤霉菌中分離出一種活性制品，并得到結(jié)晶，定名為赤霉素（GA）。第一種被分離鑒

96、定的赤霉素稱為赤霉酸（GA3），化學(xué)式見下圖1。目前，已從高等植物和微生物中分離出70余種赤霉素。</p><p>　　圖1 赤霉素化學(xué)結(jié)構(gòu)式</p><p>　　赤霉素中生理活性最強(qiáng)、研究最多的是GA3。它能顯著地促進(jìn)植物莖、葉生長，特別是對(duì)遺傳型和生理型的矮生植物有明顯的促進(jìn)作用；能代替某些種子萌發(fā)所需要的光照和低溫條件，從而促進(jìn)發(fā)芽；可使長日照植物在短日照條件下開花，縮短生活周期；能

97、誘導(dǎo)開花，增加瓜類的雄花數(shù)，誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)，提高坐果率，促進(jìn)果實(shí)生長，延緩果實(shí)衰老。除此之外，GA3還可用于防止果皮腐爛；在棉花盛花期噴灑能減少蕾鈴脫落；馬鈴薯浸種可打破休眠；大麥浸種可提高麥芽糖產(chǎn)量等等。</p><p>　　1.3 赤霉素的檢測(cè)現(xiàn)狀</p><p>　　1.3.1 高效液相色譜法</p><p>　　高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法。在

98、70年代末，高效液相色譜開始逐步用于檢測(cè)除乙烯以外的植物激素。國外研究者那時(shí)也開始研究用高效液相色譜儀來分離檢測(cè)赤霉素GA3組份的含量了。Reeve等人在把赤霉素各組份的羧基酯化后，再用高效液相色儀來分離其酯化衍生物。Lin J.T.等則是用反相高效液相色譜技術(shù)來直接分離赤霉素各組份。實(shí)驗(yàn)證明[2]高效液相色譜對(duì)赤霉素的定性、定量測(cè)量是準(zhǔn)確可靠的。</p><p>　　目前，高效液相色譜除了可以有效地分離植物內(nèi)的

99、各個(gè)赤霉素同系物，同時(shí)還可以用于赤霉素的定量檢測(cè)。朱曙東等[3]在研究赤霉素的定量檢測(cè)方法時(shí)，運(yùn)用RP-HPLC成功地將GA3與其它組分分離，建立了精確測(cè)定GA3含量的新方法。其優(yōu)越性全面超出各傳統(tǒng)分析方法，可望成為赤霉素質(zhì)量分析的標(biāo)準(zhǔn)方法。黃紅林等[4]研究建立了固相萃取-高效液相色譜(SPE-HPLC)法來分析測(cè)定番茄中赤霉素GA3殘留量。</p><p>　　1.3.2 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法</p&g

100、t;<p>　　隨著聯(lián)用技術(shù)的日趨完善，HPLC-MS逐漸成為最熱門的分析手段之一。HPLC -MS作為已經(jīng)比較成熟的技術(shù)，目前己在生化分析、天然產(chǎn)物分析、藥物和保健食品分析以及環(huán)境污染物分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。利用HPLC-MS分析混合樣品，和其他方法相比具有高效快速，靈敏度高，只需品進(jìn)行簡單預(yù)處理或衍生化，尤其適用于含量少、不易分離得到或在分離過程中易的組分。</p><p>　　梁沛等

101、[5]采用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行處理，以液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜為檢測(cè)手段，建立了測(cè)定水果中赤霉素GA3殘留的新方法，可以為確定赤霉素殘留標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。劉艷琴等[6]也采用高效液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)來測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素，并建立了相關(guān)的檢測(cè)方法。該法具有樣品處理簡單、測(cè)定周期短等優(yōu)點(diǎn)，適用于大量樣品的快速篩選、測(cè)定。王駿等[7]建立用HPLC-MS測(cè)定獼猴桃中赤霉素和脫落酸殘留量的方法。盛杰厚等[8]則是采用固相萃取和液質(zhì)聯(lián)用儀，同時(shí)

102、檢測(cè)小麥種的赤霉素、吲哚乙酸和脫落酸，并獲得了較高的回收率。</p><p>　　1.3.3 氣相色譜法 和GC-MS法</p><p>　　近年來，質(zhì)譜儀的出現(xiàn)為檢測(cè)果蔬中的赤霉素創(chuàng)造了條件。采用GC和GC-MS等儀器進(jìn)行分析檢測(cè)，靈敏度高，重復(fù)性好，尤其適用于痕量植物樣品的測(cè)定。</p><p>　　氣相色譜常被用于檢測(cè)植物果蔬中的各種農(nóng)藥殘留，特別適用于揮發(fā)

103、性的物質(zhì)的檢測(cè)。付磊[9]研究草莓中外源植物激素GA3時(shí)采用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)分析，建立了一種采用530µm大口徑毛細(xì)管色譜柱、不經(jīng)衍生化處理而直接測(cè)定植物生長素GA3的氣相色譜方法。許慶琴等[10]對(duì)不同固定相的大口徑毛細(xì)管柱進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)赤霉素在非極性固定相毛細(xì)管柱中不僅靈敏度高、出峰速度快，而且重現(xiàn)性好。采用太口徑毛細(xì)管色譜柱，無需衍生化處理，直接進(jìn)樣測(cè)定樣品中赤霉素含量結(jié)果令人滿意。</p><p&

104、gt;　　為了更加準(zhǔn)確地對(duì)赤霉素進(jìn)行定性分析，很多研究中往往采用靈敏度高、檢測(cè)限較低的質(zhì)譜儀，特別能適用于在植物中含量本身就比較微量的赤霉素。黃紅林等[11]采用固相萃取代替?zhèn)鹘y(tǒng)的液液萃取，研究了樣品在C18萃取柱上的保留行為，純化效果顯著。采用HP-1的色譜柱，無需柱前衍生化，直接進(jìn)樣GC-MS測(cè)定，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)克服了樣品基體干擾，靈敏度較全譜掃描高。并建立了固相萃氣相色譜質(zhì)譜選擇離子(SPE-GC-MS)直接分析果品中赤霉

105、素(GA3)殘留量的方法。馬煥普[12]已將GC-MS方法用于檢測(cè)蘋果種子層積過程中GA7的變化，并獲得了相關(guān)的檢測(cè)數(shù)據(jù)。吳萍等[13]先借助生物試法對(duì)芥藍(lán)中的赤霉素進(jìn)行必要的分離純化，并采用質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)芥藍(lán)種子中GAs的定性、定量分析。 </p><p>　　1.4 研究的目的與意義</p><p>　　我國加入世貿(mào)組織后，在外貿(mào)進(jìn)出口方面，從我國出口的食品由于雜質(zhì)、

106、農(nóng)藥殘留[14]及食物添加劑含量高、標(biāo)簽不清等問題而屢有退貨，不僅損害我國農(nóng)產(chǎn)品出口，也給國家形象和信譽(yù)帶來了負(fù)面影響。作為技術(shù)壁壘之一，歐盟成員國已開始高度關(guān)注中國橘子罐頭的農(nóng)藥殘留問題，鑒于目前沒有確鑿證據(jù)，不能采取保護(hù)措施，為此把目光轉(zhuǎn)向了反傾銷條款，以對(duì)付中國橘子罐頭的外銷。</p><p>　　赤霉素作用廣泛[15,16]，但屬于低毒植物生長調(diào)節(jié)劑，當(dāng)大量使用時(shí)會(huì)產(chǎn)生一定毒性。根據(jù)日本肯定列表最終數(shù)據(jù)查

107、詢  (2006年5月29日起實(shí)施) 暫定 菠菜、菠蘿、草菇、草莓、橙(包括臍橙)、蔥(包括韭蔥) 大白菜、大蒜、豆瓣菜、鱷梨、番木瓜、番茄、番石榴、繁殖洋蔥等使用的最高限量MRL為0.2 ppm。美國(USA)允許蘋果中的農(nóng)藥殘留限量要求（1999年3月15日）聯(lián)邦法律條款（40 CFR 120）赤霉素殘留限量（Tolerance, ppm）為0.5。中國臺(tái)灣2007年2月1日公布了有關(guān)食品內(nèi)殺蟲劑殘留限