雞新城疫減毒活疫苗殼聚糖納米粒的制備及其免疫效果的研究.pdf

1、新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一種急性、高度接觸性禽類傳染病,對養(yǎng)禽業(yè)造成的損害十分嚴(yán)重,被國際獸醫(yī)局定為Ⅰ類傳染病。對于ND的預(yù)防免疫接種,常用的疫苗是傳統(tǒng)的弱毒活疫苗和滅活疫苗,但二者在實(shí)際應(yīng)用中均具有一定的局限性。弱毒苗由于變異等易產(chǎn)生毒力返祖；滅活苗起效慢,免疫保護(hù)期短。因此,如何提高ND疫苗的免疫效果是疫苗免疫研究中迫切需要攻克的

2、課題,劑型的改造是提高ND疫苗免疫效果的方法之一。目前,正在發(fā)展的納米粒黏膜免疫遞送系統(tǒng)是解決上述問題的最有希望的途徑之一。
　　 本試驗(yàn)研究選用生物可降解材料殼聚糖為載體,以雞新城疫減毒活疫苗為模型藥物,采用離子交聯(lián)法制備雞新城疫減毒活疫苗殼聚糖納米粒(NDV-Chs-NPs),并對納米粒的處方、工藝及影響因素、理化特性、藥物穩(wěn)定性等進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究；同時(shí),通過Western blotting考察了NDV-Chs-NPs中

3、NDV結(jié)構(gòu)蛋白的抗原性；通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)和安全檢驗(yàn)評價(jià)了NDV-Chs-NPs黏膜免疫遞送系統(tǒng)的安全性；通過效力檢驗(yàn)和攻毒試驗(yàn)考察了其在雞體內(nèi)的免疫效果。試驗(yàn)結(jié)果表明,采用本試驗(yàn)篩選出的工藝制備出了大小均一、形態(tài)規(guī)則、外形圓整、分散性好的NDV-Chs—NPs,平均粒徑為371.1nm,Zeta電位為+2.84mV,包封率為(74±3.7)％;Western blotting試驗(yàn)結(jié)果表明,NDV被殼聚糖包裹后,NDV結(jié)構(gòu)蛋白沒有受到破壞

4、,保持了生物學(xué)活性；體外釋放試驗(yàn)結(jié)果表明,NDv-Chs-NPs具有穩(wěn)定緩釋NDV的作用；雞體內(nèi)免疫接種試驗(yàn)結(jié)果表明,采用制備的NDV—Chs-NPs免疫后可刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫,保護(hù)效力優(yōu)于新城疫常規(guī)弱毒苗；細(xì)胞毒性試驗(yàn)和安全檢驗(yàn)結(jié)果表明,NDV-Chs—NPs的毒性較小,NDV-Chs-NPs黏膜免疫遞送系統(tǒng)具有較高的安全性。
　　 本試驗(yàn)研究可實(shí)現(xiàn)疫苗在體內(nèi)的長效作用機(jī)制,從而達(dá)到降低免疫用藥成本、減少免疫