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文檔簡(jiǎn)介
1、疫苗是畜牧生產(chǎn)中控制動(dòng)物傳染病的重要工具,但在臨床實(shí)際中存在疫苗免疫失敗和油佐劑疫苗注射困難等現(xiàn)象。我們前期的研究表明,GSLS和油佐劑有協(xié)同作用,能提高疫苗的免疫效果,本論文在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究GSLS和油佐劑協(xié)同作用增強(qiáng)疫苗免疫效果的合適比例,觀察GSLS與油佐劑組合增強(qiáng)豬FMD疫苗和雞ND疫苗的免疫效果,并對(duì)油佐劑疫苗添加GSLS后的黏滯度進(jìn)行了觀察。研究結(jié)果可為應(yīng)用GSLS改進(jìn)動(dòng)物疫苗提供參考。
1.FMD疫苗中
2、添加不同劑量GSLS對(duì)小鼠免疫反應(yīng)的影響
目的:觀察GSLS對(duì)小鼠注射FMD油佐劑疫苗免疫佐劑作用,篩選GSLS對(duì)FMD油乳劑疫苗免疫佐劑作用的合適濃度。方法:將56只雌性ICR小鼠隨機(jī)分為7組,組1小鼠皮下注射0.1 ml的FMDV抗原+0.1 ml生理鹽水,組2-7每組小鼠腹部皮下分別注射含不同濃度GSLS(0、2、4、6、8和10μg/0.2 ml)的FMD油乳劑疫苗,小鼠免疫2次,間隔3周。二免后2周采血,用雙抗夾
3、心ELISA方法檢測(cè)血清中FMDV特異性IgG水平.結(jié)果:疫苗中添加4、6、8和10μg的GSLS能顯著提高小鼠血清中FMDV特異性IgG水平(P<0.05),其中以4μg組的FMDV特異性IgG水平最高。結(jié)論:FMD油乳劑疫苗中添加GSLS可顯著提高小鼠的FMDV特異性IgG水平,提高的幅度呈劑量依賴關(guān)系,以4μg組的幅度最高。
2.GSLS對(duì)低劑量抗原FMD油乳劑疫苗免疫效果的影響
目的:比較FMD全抗原
4、劑量油乳劑疫苗和含GSLS的低劑量抗原油乳劑疫苗對(duì)小鼠的免疫效果。方法:將72只ICR小鼠隨機(jī)分成9組,每組8只小鼠。各組動(dòng)物皮下注射的實(shí)驗(yàn)疫苗組成如下:(1)100μl的FMDV抗原+100μl生理鹽水;(2)100μl抗原+100μl油佐劑Oil#10;(3)100μl抗原+100μl油佐劑MC52;(4)~(6)100μl,50μl或25μl抗原+100μl油佐劑Oil#10+GSLS(4μg);(7)~(9)100μl,50μl
5、或25μl抗原+100μl油佐劑MC52+GSLS(4μg)。免疫2次,間隔3周,每次注射的體積為200μl。二免后2周采血,并取脾臟制備脾臟淋巴細(xì)胞懸液。用雙抗夾心ELISA檢測(cè)血清中FMDV特異性IgG水平,用MTT法檢測(cè)經(jīng)ConA、LPS和FMDV刺激后的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù),并用RT-PCR方法檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞經(jīng)FMDV刺激后的IFN-γ和IL-4以及轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3中mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:含GSLS的油佐劑疫苗誘
6、導(dǎo)的特異性IgG效價(jià)顯著高于不合GSLS的油佐劑疫苗(P<0.05);含GSLS的半劑量抗原的油乳劑疫苗誘導(dǎo)的血清特異性IgG效價(jià)高于不含GSLS的全劑量抗原油乳劑疫苗,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P>0.05);含GSLS的四分之一劑量抗原的油乳劑疫苗誘導(dǎo)的血清特異性IgG效價(jià)低于不合GSLS的全劑量抗原油乳劑疫苗,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。此外,油乳劑疫苗中添加GSLS后,增強(qiáng)了小鼠脾臟淋巴細(xì)胞受Con A、LPS和FMDV刺激產(chǎn)生增
7、殖能力(P<0.05),提高脾臟淋巴細(xì)胞受FMDV刺激后IFN-γ、IL-4、T-bet和GATA-3的mRNA表達(dá)水平(P<0.05)。結(jié)論:油佐劑疫苗中添加GSLS能顯著增強(qiáng)小鼠的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答,使僅含一半抗原劑量疫苗誘導(dǎo)的IgG水平到含全劑量抗原誘導(dǎo)的IgG水平。
3.FMD油佐劑疫苗中添加不同劑量GSLS對(duì)豬的免疫效果
目的:觀察FMD油佐劑疫苗添加GSLS對(duì)豬的免疫效果。方法:試驗(yàn)一:將48只豬
8、隨機(jī)分成6組,每頭豬頸部分別皮下注射含GSLS為0μg、10μg、20μg、40μg、80μg和160μg的FMD疫苗,免疫2次,間隔3周,每次注射疫苗劑量2 ml。在免疫前,免疫后第3、6周前腔靜脈采血,用正向間接血凝法檢測(cè)血清中IHA水平,并分離淋巴細(xì)胞,用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖。試驗(yàn)二:將24頭豬隨機(jī)分成4組,每頭豬頸部皮下分別注射含不同佐劑FMD疫苗(Oil#10,MC52,Oil#10+40μg GSLS,MC52+40μg
9、 GSLS),免疫1次,注射體積為2 ml。于免疫前,免疫后第3、6周前腔靜脈采血,檢測(cè)血清中IHA效價(jià),IgG和IgG亞類水平。結(jié)果:試驗(yàn)一:免疫后3、6周,每個(gè)劑量的FMD疫苗中添加40μgGSLS能顯著提高豬特異性IHA效價(jià)(P<0.05),外周血淋巴細(xì)胞受FMDV刺激后產(chǎn)生的增殖能力顯著升高(P<0.05),而受Con A刺激后產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞增殖能力高于對(duì)照組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。試驗(yàn)二:與不添加GSLS的對(duì)照組相比
10、,添加GSLS的油佐劑疫苗組在免疫后3周,IHA效價(jià)升高不顯著(P>0.05),IgG、IgGl和IgG2水平顯著升高(P<0.05);免疫后6周,血清中IHA效價(jià)顯著升高(P<0.05),IgG、IgG1和IgG2水平均顯著上升(P<0.05)。結(jié)論:每個(gè)劑量FMD油佐劑疫苗中添加40μg GSLS能顯著增強(qiáng)豬的體液免疫和細(xì)胞免疫.
4.不同劑量GSLS對(duì)雞新城疫油佐劑疫苗免疫的影響
目的:觀察雞ND疫苗中
11、添加GSLS對(duì)雞免疫反應(yīng)的影響。方法:將60只1日齡梅嶺土雞分成5組,每組12只,12日齡時(shí),在每只雞的胸大肌內(nèi)分別注射含不同劑量的GSLS(0、2、4、6和8μg)雞ND油佐劑疫苗,免疫為0.2 ml。于免疫前,免疫后1、2和3周經(jīng)心臟采血收集血樣,用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定血清HI效價(jià),3周后摘取雞脾臟,制備脾臟淋巴細(xì)胞懸液,采用MTT法檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)果:每劑量疫苗中添加6μg的GSLS,血清HI效價(jià)在免疫后1周升高不顯著,在免疫
12、后第2周和第3周,顯著升高(P<0.05);免疫后3周,脾臟淋巴細(xì)胞對(duì)LPS和NDV刺激的增殖反應(yīng)顯著高于對(duì)照組(P<0.05),各組脾臟淋巴細(xì)胞對(duì)ConA刺激的增殖反應(yīng)之間沒(méi)有明顯差異(P>0.05); ND疫苗中添加GSLS對(duì)雞的體重不產(chǎn)生顯著差異(P>0.05);各組雞的疫苗注射部位沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的局部副作用。結(jié)論:ND疫苗中添加GSLS能顯著增強(qiáng)雞的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平,并對(duì)免疫雞不產(chǎn)生可見(jiàn)的副作用。
5.油佐
13、劑疫苗中添加GSLS對(duì)疫苗黏滯性的影響
目的:觀察油佐劑疫苗中添加GSLS對(duì)疫苗黏滯性的影響。方法:將GSLS(30g)溶解在60 ml二甲基亞砜中,制備361 mg/ml的GSLS儲(chǔ)存液(83 ml),根據(jù)用量將GSLS儲(chǔ)存液添加在MC52白油中并攪拌均勻,然后與FMDV抗原混合,采用均質(zhì)乳化機(jī)制備分別制備油相/水相比為1比1(或2比1),吐溫濃度分別為0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的油包水型
14、FMD油乳劑疫苗,采用玻璃粘度計(jì)測(cè)定各組疫苗的黏滯性。結(jié)果:當(dāng)吐溫濃度為1.0%和1.5%時(shí),添加4μg劑量GSLS油佐劑疫苗(1比1)流動(dòng)時(shí)間顯著短于對(duì)照組(P<0.05);當(dāng)吐溫濃度為為1.5%和2.0%時(shí),添加4μg/劑量GSLS能顯著降低油佐劑疫苗(2比1)流動(dòng)時(shí)間(P<0.05)。結(jié)論:油乳劑疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滯性。
綜上所述,F(xiàn)MD油乳劑疫苗中添加GSLS可顯著提高小鼠血清特異性IgG水平,提高的
15、幅度呈劑量依賴關(guān)系,以4μg組的幅度最高;FMD油佐劑疫苗中添加GSLS能顯著增強(qiáng)小鼠血清FMDV特異性IgG水平和淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化指數(shù),增強(qiáng)使僅含一半抗原劑量疫苗誘導(dǎo)的IgG水平到含全劑量抗原誘導(dǎo)的IgG水平,說(shuō)明GSLS增強(qiáng)小鼠對(duì)低劑量抗原疫苗的免疫應(yīng)答;FMD疫苗中添加40μg的GSLS能顯著增強(qiáng)豬血清IHA,IgG和IgG亞類水平,增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖指數(shù),表明GSLS對(duì)豬FMD疫苗具有較好的免疫佐劑作用;ND疫苗中添加6μgGSL
16、S能顯著增強(qiáng)雞血清HI效價(jià)和淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化指數(shù),并且沒(méi)有對(duì)免疫雞產(chǎn)生明顯可見(jiàn)的副作用,說(shuō)明GSLS能通過(guò)增強(qiáng)雞的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答來(lái)發(fā)揮免疫佐劑作用;當(dāng)吐溫濃度為1.0%和1.5%時(shí),添加4μg劑量GSLS油佐劑疫苗(油/水=1∶1)流動(dòng)時(shí)間顯著短于對(duì)照組(P<0.05);當(dāng)吐溫濃度為為1.5%和2.0%時(shí),添加4μg/劑量GSLS能顯著降低油佐劑疫苗(油/水=2∶1)流動(dòng)時(shí)間(P<0.05),說(shuō)明油乳劑疫苗中添加GSLS能降
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