木鱉子皂甙對(duì)口蹄疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究.pdf

1、口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是一種偶蹄動(dòng)物的烈性接觸性傳染病,主要危害牛、羊、豬等家畜。使用FMD疫苗是許多國(guó)家預(yù)防與控制FMD暴發(fā)的主要手段。然而有報(bào)道認(rèn)為,FMD疫苗的免疫效果并不十分理想。前期的研究表明,將中藥木鱉子中提取的皂甙(ExtracTiO2 of Cochinchina momordicaseed,ECMS)和疫苗混合經(jīng)注射途徑免疫動(dòng)物可以提高疫苗的免疫效果。木鱉子是一個(gè)傳統(tǒng)中藥,在中國(guó)

2、已經(jīng)使用了1000多年?？诜o藥是中藥的傳統(tǒng)給藥方法。本論文的研究口服ECMS對(duì)疫苗免疫接種的免疫調(diào)節(jié)作用,為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)中藥木鱉子提供參考。
　　 實(shí)驗(yàn)一
　　 目的：為研究口服ECMS和南美的皂樹(shù)皂甙Quil A(一種公認(rèn)的)以及皮下注射FMDV亞洲Ⅰ型抗原對(duì)小鼠體重增重的影響。
　　 方法：40只小鼠隨機(jī)分成4組,每組10只。ECMS口服組小鼠在免疫前一天灌胃250μL含200μg ECMS的溶液,Qui

3、l A組小鼠灌服250μL含200μg Quil A的溶液,陰性對(duì)照組小鼠同時(shí)口服250μL生理鹽水,空白組不作處理。小鼠采用相同方式免疫2次,間隔3周。小鼠可自由采食和飲水,在實(shí)驗(yàn)第0、7、14、28和42天分別稱(chēng)體重。
　　 結(jié)果：相同日齡各組間小鼠體重?zé)o顯著差異。初步結(jié)論口服 ECMS、Quil A以及FMDV抗原免疫注射對(duì)小鼠體重增重沒(méi)有影響。
　　 實(shí)驗(yàn)二
　　 目的：觀(guān)察口服不同天數(shù)ECMS和Quil

4、 A對(duì)皮下注射O型口蹄疫抗原的體液免疫水平的增強(qiáng)作用。
　　 方法：將42只ICR小鼠隨機(jī)分成7組,每組6只。組二、三、四小鼠分別在免疫前口服1、2、3次250μL含200μg ECMS的溶液,每天1次,組五、六、七小鼠分別口服1、2、3次Quil A溶液,每次灌胃200μg Quil A,每天1次,組一在免疫前口服一次250μL生理鹽水為對(duì)照。最后1次口服后48小時(shí),小鼠皮下注射200μL O型口蹄疫抗原。3周后,用同樣方式口

5、服和免疫1次,組一小鼠皮下注射200μl生理鹽水。二免后2周,采血檢測(cè)血清抗FMDV特異性IgG水平,以及抗體亞類(lèi)IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3水平。
　　 結(jié)果：和初步結(jié)論免疫前1次口服ECMS(200μg)和QA(200μg)可提高皮下注射FMDV抗原誘導(dǎo)的血清特異性IgG和多數(shù)IgG亞類(lèi)的抗體水平,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異不顯著(P0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)三
　　 目的：觀(guān)察口服1次(1天)ECMS和Qu

6、il A對(duì)皮下注射亞洲1型口蹄疫抗原的免疫增強(qiáng)作用。
　　 方法：ECMS口服組小鼠在免疫前口服1次250μl含200μg ECMS的溶液,Quil A組小鼠口服1次含200μg QuilA的溶液,對(duì)照組小鼠在免疫前口服一次250μl生理鹽水?？诜?8小時(shí),小鼠皮下注射200μl O型口蹄疫抗原。采用同樣方式口服和免疫一次,間隔3周。二免后2周,采血檢測(cè)血清抗FMDV特異性IgG水平,以及抗體亞類(lèi)IgG1、IgG2a、IgG2

7、b和IgG3水平,并分離脾淋巴細(xì)胞檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的分泌。
　　 結(jié)果：Quil A口服組小鼠IgG水平顯著高于對(duì)照組IgG(P0.05)。ECMS口服小鼠血清IgG水平,IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3水平均顯著高于對(duì)照組(P0.05)。ECMS口服組小鼠的脾淋巴細(xì)胞在體外受Con A刺激后分泌的IFN-y和IL-5水平均顯著高于對(duì)照組小鼠(P0.05)。初步結(jié)論小鼠在免疫前口服1次ECM

8、S能同時(shí)提高機(jī)體抗FMD免疫的Thl和Th2型免疫應(yīng)答反應(yīng)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)四
　　 目的：研究比較口服ECMS和疫苗中添加ECMS對(duì)口蹄疫亞洲I型和O型病原雙價(jià)商品苗的免疫增強(qiáng)作用。
　　 方法：32只ICR小鼠隨機(jī)分成4組,每組8只。ECMS口服組小鼠在免疫前灌胃200μg ECMS, ECMS注射組在FMD雙價(jià)疫苗中添加50μg ECMS,對(duì)照組同時(shí)灌胃生理鹽水,小鼠皮下注射100μLFMD雙價(jià)疫苗。采用同

9、樣方式口服和免疫一次,間隔3周。二免后2周,采血檢測(cè)血清抗FMDV亞洲I型或O型抗原特異性IgG、IgG1、IgG2a, IgG2b和IgG3水平。
　　 結(jié)果：口服ECMS和疫苗添加ECMS都能顯著提高小鼠注射口蹄疫亞洲I型和O型病原雙價(jià)商品苗后血清抗FMDV亞洲I型或O型抗原特異性IgG和多數(shù)抗體亞類(lèi)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)五
　　 目的：觀(guān)察口服ECMS對(duì)處于免疫抑制狀態(tài)小鼠注射FMD雙價(jià)疫苗的免疫增強(qiáng)作用。

10、r>　　 方法：40只ICR小鼠隨機(jī)分成5組,每組8只。組一：空白對(duì)照組,僅注射100μL生理鹽水；組二：僅免疫FMD疫苗；組三：每只小鼠連續(xù)4天每天注射0.5 mg地塞米松形成免疫抑制,然后注射FMD疫苗；組四：每只小鼠連續(xù)4天每天注射0.5 mg地塞米松形成免疫抑制后,口服1次250μL含0.2mg ECMS的溶液,然后注射FMD疫苗；組五：每只小鼠連續(xù)4天每天注射0.5mg地塞米松形成免疫抑制后,皮下注射100μL含50μg E

11、CMS的溶液,然后注射FMD疫苗。間隔3周后,用同樣方法進(jìn)行第二次免疫。二免后2周,采血檢測(cè)血清抗FMDV亞洲I型和O型抗原特異性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3水平。
　　 結(jié)果：小鼠皮下注射地塞米松后對(duì)口蹄疫疫苗的免疫應(yīng)答降低,而口服或皮下注射ECMS則可提高免疫抑制小鼠對(duì)口蹄疫疫苗免疫產(chǎn)生的血清抗體IgG及其抗體亞類(lèi)的水平。
　　 綜上所述,通過(guò)本論文研究得到以下結(jié)果：(1)1次口服ECMS或Qu

12、ilA對(duì)小鼠體重增重沒(méi)有顯著影響；(2)免疫前1次口服ECMS (200μg)和QA(200μg)可提高皮下注射FMDV抗原誘導(dǎo)的血清特異性IgG和多數(shù)IgG亞類(lèi)的抗體水平,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異不顯著(P0.05)；(3)小鼠在免疫前口服1次ECMS能同時(shí)提高機(jī)體抗FMD免疫的Th1和Th2型免疫應(yīng)答反應(yīng)水平；(4)口服ECMS和疫苗添加ECMS都能顯著提高小鼠注射口蹄疫亞洲I型和O型病原雙價(jià)商品苗后血清抗FMDV亞洲Ⅰ型或O型抗原特異性Ig