牛IL-18真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)FMD疫苗免疫增強(qiáng)作用的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素-18(interleukin-18，IL-18)是Okamura等(1995)從小鼠肝臟中克隆獲得的。Nakamori等(2003)研究發(fā)現(xiàn)，IL-18具有抗腫瘤、抗感染及免疫調(diào)節(jié)等著重要作用，在免疫治療及免疫佐劑方面有著潛在的應(yīng)用前景?？谔阋?FootandMouthDisease，F(xiàn)MD)是危害牛、豬、羊等偶蹄動(dòng)物以及人的一種烈性傳染病，如何增強(qiáng)動(dòng)物的抗病能力和免疫應(yīng)答水平，最大限度地提高疫苗的免疫效果是當(dāng)前我國(guó)防制口蹄

2、疫生產(chǎn)實(shí)踐中迫切需要解決的問題。近年來隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)研究的進(jìn)展，白細(xì)胞介素作為疫苗高效分子佐劑己成為疫苗免疫佐劑研究的熱點(diǎn)，但牛IL-18對(duì)口蹄疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用如何尚不清楚，為此，本研究從分子免疫佐劑的角度出發(fā)構(gòu)建了牛IL-18真核表達(dá)載體，并研究了該表達(dá)載體對(duì)FMD滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用。 本論文根據(jù)GeneBank收錄的牛白細(xì)胞介素-18(BoIL-18)基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，以其原核表達(dá)質(zhì)粒為模板，進(jìn)行

3、PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物與真核表達(dá)載體pcDNA3.1重組，陽性克隆經(jīng)PCR擴(kuò)增和核酸內(nèi)切酶酶切鑒定準(zhǔn)確無誤，核酸序列測(cè)定結(jié)果與原始基因序列完全一致，閱讀框也正確無誤，將該重組質(zhì)粒命名為pcDNA3.1-BoIL-18。將pcDNA3.1-BoIL-18重組質(zhì)粒大量提取后與FMD疫苗同時(shí)免疫小白鼠，結(jié)果表明同時(shí)接種的小白鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和NK細(xì)胞活性在接種第21天后均明顯高于單純疫苗組，所產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)在28天后與單純疫苗組差異顯著。從