NCPP對小鼠免疫增強作用及機理的研究.pdf

1、巨噬細胞在機體非特異性免疫和特異性免疫中起重要作用，它是參與免疫調節(jié)的重要細胞。單核/巨噬細胞系統(tǒng)除具有吞噬功能，還可發(fā)揮抗原呈遞(antigenpresentation)作用，屬于抗原呈遞細胞(antigen-presentationcell，APC)，可輔助T淋巴細胞活化，并與淋巴細胞相互刺激發(fā)揮免疫調節(jié)作用。巨噬細胞也是機體抗腫瘤免疫中的重要效應細胞。巨噬細胞的抗腫瘤作用具有選擇性，即僅殺傷瘤細胞而不殺傷正常細胞，其殺傷效應與腫瘤

2、的抗原結構及瘤細胞增生周期無關，且可殺傷對化療、放療呈抗性的腫瘤細胞。另外，只有激活的巨噬細胞才可發(fā)揮抗瘤效應。IL-1能促進B淋巴細胞分泌抗體，T淋巴細胞表達IL-2受體，并分泌大量IL-2，還能增強NK細胞的殺瘤活性等。TNF-α及NO是激活的巨噬細胞殺傷腫瘤細胞的主要效應分子。Klostergaard等發(fā)現(xiàn)，巨噬細胞殺傷腫瘤細胞至少存在兩種機制：即TNF-α介導的殺傷機制和NO介導的殺傷機制，兩者具有協(xié)同作用。TNF-α可通過誘導

3、腫瘤細胞調亡及抑制腫瘤血管形成，導致腫瘤出血壞死等途徑發(fā)揮作用；NO則使腫瘤細胞三羧酸循環(huán)中的烏頭酸酶DNA合成的限速酶及核糖核酸還原酶失活，而最終導致腫瘤細胞死亡。IFN-γ具有殺傷病毒和腫瘤的作用，誘導單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等MHCⅡ類抗原的表達，使其參與抗原提呈和特異性免疫的識別過程。協(xié)同誘導TNF并促進巨噬細胞殺傷病原微生物。IFN抗腫瘤的機理可能是：抑制腫瘤細胞增殖；誘導NK、CTL等殺傷細胞，并協(xié)同IL-2增強LAK

4、活性；誘導腫瘤細胞表達MHCⅡ類抗原，增強對殺傷細胞的敏感性。短棒狀桿菌(CorynebacteriumParvum，CP)制劑(CPP)是一種非特異性免疫增強劑，它是用從健康人骨髓中分離的一種厭氧革蘭氏陽性桿菌經甲醛滅活制成的死菌苗。CPP促進機體免疫反應和抗腫瘤療效已被許多實驗及臨床研究所證實，尤其在消退癌性胸水方面具有獨特療效。CPP抗腫瘤作用主要是通過對單核巨噬細胞系統(tǒng)強大而持久的刺激，引起Mφ增生、活化、吞噬功能增強及誘導分泌

5、腫瘤壞死因子(TNF-α)、干擾素(IFN)、白細胞介素(IL)、活性氧(H2O2、NO)等癌細胞殺傷因子及增強NK細胞殺傷活性，達到抑制和殺傷腫瘤細胞的目的。分子免疫研究的進展加深了人們對免疫系統(tǒng)抗腫瘤功能及免疫治療作用重要性的認識。目前，CPP可以說是激活Mφ活性最好的制劑之一，但副作用較大限制了其臨床應用。若能利用現(xiàn)代高科技手段制備出療效好、副作用低的新制劑，將有著重要的應用價值。為此，我們在對CP進行深入研究的基礎上，利用先進的

6、納米技術，制備出了無細胞短棒狀桿菌納米級制劑(NCPP)。新制劑不但完全具備CPP的抗腫瘤活性，且副作用明顯低于CPP。本文進一步研究了NCPP增強免疫的作用及其機理，為進一研究其抗腫瘤作用提供理論依據(jù)。 方法1.NCPP是通過采用納米技術破碎CP，經離心去除無效的上清部分，收集沉淀部分制備的新制劑。 2.將小鼠隨機分為3組，分別為NCPP組、CPP組及對照組。3組小鼠分別在腹腔注射NCPP、CPP和生理鹽水第10天時處

7、死并分別稱體重和脾重，計算脾指數(shù)。 3.將小鼠隨機分為NCCP實驗組、CPP實驗組和對照組，三組小鼠腹腔注射艾氏腹水癌細胞，于注射癌細胞前1天及注射后次日起，連續(xù)(間隔1天)腹腔分別注射NCPP、CPP和生理鹽水5次，計算小鼠存活率。小鼠腹腔注射NCPP、CPP或生理鹽水10天后，分別測定腹腔巨噬細胞(Mφ)吞噬率、吞噬指數(shù)、過氧化氫(H2O2)、一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)、白細胞介素(IL)等細

8、胞因子水平、脾臟自然殺傷(NK)細胞殺傷率及T細胞增殖指數(shù)。 結果：NCPP組和CPP組與對照組相比均有明顯的抑瘤作用；脾指數(shù)均大于2.0；腹腔Mφ吞噬率、吞噬指數(shù)、產生H2O2、一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)、白細胞介素(IL)等細胞因子的量均有顯著的提高(P＜0.01)；脾臟NK細胞殺傷率也均有明顯提高(P＜0.05)；但脾臟T細胞增殖指數(shù)均無明顯差異(P＞0.05)。上述所有實驗中，NCPP和C

9、PP兩組間均無明顯差異(P＞0.05)。表明NCPP具有與CPP相同的脾激活及抑瘤作用，其機理可能是通過強力激活Mφ及NK細胞吞噬、殺傷功能所致。NCPP的毒性低于CPP。 結論NCPP與CPP具有相同的作用，能激活巨噬細胞、NK細胞等免疫效應細胞，使之分泌多種細胞因子及重要介質。它們能有效地增強機體的免疫效應，可引起免疫小鼠脾臟腫大，巨噬細胞增殖加快，腹腔巨噬細胞明顯增多，吞噬功能明顯增強，并能增強NK細胞殺傷活性，從而達到抑