錦燈籠宿萼皂苷免疫增強作用及降血糖活性研究.pdf

1、錦燈籠為茄科植物酸漿（PhysalisalkekengiL．Var．franchetii）的干燥宿萼或帶果實的宿萼。宿萼紅色或橙紅色，微苦。又名掛金燈、紅姑娘。文獻對錦燈籠果實的報道較多，但對其宿萼的報道較少。本文以成熟的錦燈籠果實宿萼為實驗材料，分離純化錦燈籠皂苷并對該皂苷的免疫活性和降血糖活性進行初步研究，為將錦燈籠宿萼皂苷開發(fā)為新型疫苗佐劑及降血糖藥物奠定了理論基礎。 錦燈籠宿萼皂苷的分離純化：成熟的錦燈籠果實宿萼，先將其

2、粉碎，經(jīng)乙醇回流提取、減壓濃縮、水飽和正丁醇萃取、將正丁醇層減壓濃縮、少量甲醇溶解、乙醚沉淀干燥得到粗皂苷，再經(jīng)D101大孔樹脂進一步分離純化錦燈籠宿萼皂苷（TSP），經(jīng)三氯醋酸、氯仿．濃硫酸、醋酐－濃硫酸等方法顯色鑒定TSP為甾體皂苷。本文以TSP為實驗材料，進一步對其進行生物學活性研究。 本文選用0．5％的兔紅細胞來檢測TSP及QuilA的溶血活性。溶血性實驗結(jié)果顯示，TSP在濃度為500μg/ml時溶血率為3．5％，有輕微

3、的溶血性，遠遠小于QuilA（HD50約為16．6μg/ml）的溶血性。 以OVA作為抗原與Alum（鋁佐劑）（200μg）、QuilA（10，20μg）、TSP（12．5，25，50μg）共同對ICR小鼠進行皮下免疫，以OVA作為陰性對照，Alum、QuilA作為陽性對照組來檢測TSP對OVA免疫小鼠細胞免疫和體液免疫應答的影響。（1）TSP對免疫小鼠細胞免疫應答的影響：通過對免疫小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗、CD4+和CD8+T淋

4、巴細胞亞群的含量變化以及對遲發(fā)型超敏反應（DTH）的實驗結(jié)果分析表明，TSP與QuilA一樣顯著增強了細胞免疫應答，其作用效果優(yōu)于鋁佐劑；（2）TSP對免疫小鼠體液免疫應答的影響：ELISA方法檢測小鼠抗血清中抗OVA特異性抗體的實驗結(jié)果表明，TSP與QuilA一樣顯著提高了IgG、IgG1及IgG2b的抗體滴度；鋁佐劑只對IgG、IgG1有明顯的增強作用，對IgG2b的抗體滴度沒有影響，證明TSP與QuilA一樣顯著增強了體液免疫應答