黃芪多糖、人參皂甙Rb1對(duì)豬口蹄疫疫苗的佐劑效果及相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、本試驗(yàn)?zāi)康闹荚谝詢(xún)煞N補(bǔ)氣中藥成分為代表，對(duì)中藥成分作為疫苗佐劑機(jī)制進(jìn)行研究。進(jìn)行本試驗(yàn)期望得到一種新型的、經(jīng)濟(jì)的豬口蹄疫疫苗的佐劑，提高現(xiàn)有疫苗的保護(hù)力，降低現(xiàn)有疫苗的副作用，降低豬口蹄疫的發(fā)病率，減少勞動(dòng)費(fèi)用，即這種佐劑能刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，同時(shí)，通過(guò)對(duì)佐劑作用機(jī)制的探索，將給新的佐劑開(kāi)發(fā)提供一些試驗(yàn)方法，具有良好的研究意義。試驗(yàn)以常用補(bǔ)氣中藥黃芪和人參的主要有效成分——黃芪多糖和人參皂甙Rb1為代表，首先黃芪多

2、糖和人參皂甙Rb1直接與口蹄疫疫苗混勻，通過(guò)肌肉注射免疫小鼠和豬，觀(guān)察口蹄疫抗體效價(jià)的變化。試驗(yàn)結(jié)果：小鼠一免15d抗體效價(jià)與對(duì)照組差異不顯著HAlog2＜7(p＞0.05)，二免后的小鼠抗體效價(jià)HAlog＞7與對(duì)照組比較差異極顯著(p＜0.01)；黃芪多糖(0.5mg/只)+疫苗組、黃芪多糖(0.1mg/只)+疫苗組和人參皂甙Rb1(0.01mg/只)+疫苗組與對(duì)照組差異極顯著(p＜0.01)，黃芪多糖(0.05mg/只)+疫苗組和人

3、參皂甙Rb1(0.002mg/只)+疫苗組與對(duì)照組差異顯著(p＜0.05)。經(jīng)過(guò)免疫的豬一免后抗體效價(jià)都沒(méi)有達(dá)到保護(hù)免疫效價(jià)(HAlog2＜7)，二免15d抗體效價(jià)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一免的抗體效價(jià)(HAlog2＞7)，二免30d抗體效價(jià)比二免15d有些下降，但是高于只經(jīng)過(guò)一免的抗體效價(jià)(HAlog2＞7)。總之黃芪多糖和人參皂甙Rb1均能提高小鼠和豬只的口蹄疫抗體效價(jià)，并且隨著兩種成分濃度的增加對(duì)抗體效價(jià)的影響也隨之增強(qiáng)。隨后進(jìn)行大鼠腸黏膜微血管

4、內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。通過(guò)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞第Ⅷ因子相關(guān)抗原和硝酸銀鑒定，證明培養(yǎng)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞第Ⅷ因子相關(guān)抗原染色為陽(yáng)性，AgNO3染色后，黑色的硝酸銀顆粒沉積在血管內(nèi)皮細(xì)胞邊緣即細(xì)胞間隙中，呈棕黃色，細(xì)胞間以鋸齒狀結(jié)構(gòu)連接，體現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)典型的多邊形。最后黃芪多糖、人參皂甙Rb1和口蹄疫疫苗同時(shí)作用細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間觀(guān)察內(nèi)皮細(xì)胞NO、IL-6和TNF-α分泌量的變化。試驗(yàn)結(jié)果：口蹄疫疫苗(0.1μL/mL)單獨(dú)作用于腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)