人參皂甙Rb1對大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、第一部分、人參皂甙Rb1對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用
　　 目的：研究人參皂甙Rb1在大鼠肝臟缺血再灌注損傷中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組(n=18)：假手術(shù)組(A)、對照組(B)、人參皂甙Rb1干預(yù)組(C)。人參皂甙Rb1干預(yù)組大鼠在術(shù)前10min尾靜脈注射人參皂甙Rb140mg/kg，建立肝左、中葉70％部分肝缺血再灌注模型，對照組給予同樣體積的生理鹽水。肝臟缺血90min后對缺

2、血肝葉進(jìn)行再灌注，分別于再灌注后2、6、24h收集血液及缺血肝葉組織標(biāo)本，每個時點n=6。檢測血清ALT、AST水平，肝組織HE染色后置光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化，并根據(jù)Suzuki’s評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理損傷半定量評分，ELISA檢測肝組織中MDA含量和SOD活力檢測。
　　 結(jié)果：與對照組相比，人參皂甙Rb1干預(yù)組血清ALT、AST水平均明顯下降(P<0.05)，肝臟組織病理學(xué)表現(xiàn)明顯改善，Suzuki’s評分明顯降低(P<0.0

3、5)；人參皂甙Rb1干預(yù)后肝組織MDA含量較對照組明顯下降(P<0.05)，SOD活力較對照組明顯升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、人參皂甙Rb1干預(yù)能有效改善大鼠肝臟缺血再灌注損傷引起的肝功能和肝臟器質(zhì)性損害；
　　 2、人參皂甙Rb1能減少缺血再灌注后氧自由基的產(chǎn)生，減輕因脂質(zhì)過氧化引發(fā)的組織損傷。
　　 第二部分、人參皂甙Rb1對大鼠肝臟缺血再灌注損傷引起的細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白的影響

4、r>　　 目的：通過觀察人參皂甙Rb1對肝臟缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白的影響，探討其缺血再灌注保護(hù)作用的分子機(jī)制。
　　 方法：將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組(n=18)：假手術(shù)組(A)、對照組(B)、人參皂甙Rb1干預(yù)組(C)。人參皂甙Rb1干預(yù)組大鼠于缺血前10min通過尾靜脈注射人參皂甙Rb140mg/kg，建立肝左、中葉70％部分肝缺血再灌注模型，對照組給予同樣體積的生理鹽水。肝臟缺血90min后對缺血肝葉進(jìn)行

5、再灌注，于再灌注后6h收集缺血肝葉組織標(biāo)本。TUNEL法檢測肝細(xì)胞凋亡并計算肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)；Caspase活性定量檢測試劑盒檢測半胱天冬特異性蛋白酶-9，8，3(Caspase-9，8，3)的活性；免疫組織化學(xué)染色和Werstern blotting檢測Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)；反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測肝臟細(xì)胞Bal-c及Bax mRNA表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：與對照組(B)比較，人參皂甙Rb1干預(yù)后肝臟細(xì)胞

6、凋亡指數(shù)明顯下降(P<0.05)，人參皂甙Rb1干預(yù)組肝組織半胱天冬特異性蛋白酶-9，8，3活性降低(P<0.05)；肝臟組織Bcl-2蛋白水平較對照組(B)顯著增加(P<0.05)，肝臟組織Bax蛋白水平明顯降低(P<0.05)；肝臟組織中Bcl-2 mRNA較對照組(B)顯著增加(P<0.05)，肝臟組織Bax mRNA明顯降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、人參皂甙Rb1的干預(yù)能明顯抑制缺血再灌注后肝臟

7、細(xì)胞凋亡；
　　 2、人參皂甙Rb1抑制缺血再灌注后肝臟細(xì)胞凋亡可能與上調(diào)肝組織Bcl-2蛋白及下調(diào)Bax蛋白有關(guān)。
　　 第三部分、人參皂甙Rb1抑制缺血再灌注大鼠肝臟細(xì)胞損傷凋亡與PI3K/Akt通路的相關(guān)性研究
　　 目的：觀察人參皂甙Rb1對P13K/Akt信號通路的影響，深入探討其對缺血再灌注保護(hù)作用的分子機(jī)制。
　　 方法：將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為四組(n=6)：假手術(shù)組(A)、對照組(B)

8、、人參皂甙Rb1干預(yù)組(C)、LY294002+人參皂甙Rb1干預(yù)組(D)。LY294002+人參皂甙Rb1干預(yù)組大鼠于缺血前20min經(jīng)尾靜脈緩慢注射溶解于0.02％DMSO的LY2940020.3mg/kg，于缺血前10min經(jīng)尾靜脈注射人參皂甙Rb140mg/kg；人參皂甙Rb1干預(yù)組大鼠于缺血前20min經(jīng)尾靜脈緩慢注射與D組同體積的0.02％DMSO，于缺血前10min經(jīng)尾靜脈注射人參皂甙Rb140mg/kg；對照組給予同樣體

9、積的0.02％DMSO和生理鹽水，建立肝左、中葉70％部分肝缺血再灌注模型，肝臟缺血90min后對缺血肝葉進(jìn)行再灌注，于再灌注后6h收集血液及缺血肝葉組織標(biāo)本。TUNEL法檢測肝細(xì)胞凋亡并計算肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)；免疫組織化學(xué)染色和Werstern blot檢測PI3K、Akt和p-Akt蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測PI3K及Akt mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：與對照組(B)比較，人參皂甙Rb1干預(yù)組(C)肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)較低(P

10、<0.05)，D組肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)無顯著性差異(P>0.05)；PI3K和Akt蛋白在A組、B組、C組和D組中的表達(dá)水平均無顯著差異(P>0.05)；P-Akt蛋白在A組、B組和D組中的表達(dá)水平無顯著差異(P>0.05)，C組中p-Akt的表達(dá)明顯增加(P<0.05)；PI3K和Akt蛋白在A組、B組、C組和D組中的表達(dá)水平均無顯著差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：人參皂甙Rb1可能通過活化PI3K/Akt信號通路減少缺血再灌