人參皂甙Rb1強化EN對POFS模型的實驗研究.pdf

1、目的： 1.以“適量中段小腸切除-吻合術(shù)”建立穩(wěn)定可靠的術(shù)后疲勞綜合征（Postoperative Fatigue Syndrome POFS）實驗動物模型；通過術(shù)后一般情況觀察、檢測學習記憶的Morris水迷宮試驗、評估體力耐力的改良懸尾試驗、血清白蛋白（Albumin，AL）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin，TF）、前白蛋白（Prealbumin，PA）及纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）含量、氧自由基等評估手段

2、超氧化物岐化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、脂質(zhì)過氧化物（lipid Peroxides，LPO）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）建立POFS客觀的評估體系； 2.通過人參皂甙Rbl（Panaxoside Rbl，P-Rbl）強化腸內(nèi)營養(yǎng)（Enteral Nutrition，EN）方案的對術(shù)后疲勞綜合征進行干預，研究該方案對術(shù)后疲勞康復過程中的影響。 實驗設(shè)計和方法： 1.實

3、驗動物SPF級SD雄性大鼠，體重（250-275g），由上海中科院實驗動物中心提供（SCXK滬2007-0005）。 2.檢測指標：①改良懸尾試驗檢測大鼠精神及體力耐力情況； ②Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)測定大鼠學習及記憶重現(xiàn)能力； ③自發(fā)活動視頻分析系統(tǒng)測定大鼠自主性活動情況； ④化學比色法測定白蛋白、過氧化物歧化酶、丙二醛、脂質(zhì)過氧化物含量； ⑤酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖

4、維連接蛋白含量、IL-2； ⑥免疫濁度法測定前白蛋白含量； ⑦FACSCalibur流式細胞儀器測CD4-、CD8+細胞含量。 3.方法 分兩部分進行 3.1建模： SPF級雄性SD大鼠42只，稱重編號按隨機區(qū)組表分為對照組（C組）、70%中段小腸切除組（70%組）、40%中段小腸切除組（40%組）、10%組中段小腸切除組（10%組）。麻醉后，沿腹白線開腹。C組：開腹，僅翻動腸襻；后3組

5、分別切除70%、40%、10%中段小腸長度，剩余腸端行端端吻合，關(guān)腹，術(shù)后單鼠單籠飼養(yǎng)。術(shù)后觀察一般情況、進行改良懸尾試驗（Improved Tail Suspension Test，ITST）檢測其體力耐力及精神狀況、Morris水迷宮試驗（Morris Water Maze，MWM）檢測其視覺相關(guān)的學習及記憶重現(xiàn)能力等行為學試驗，并以血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、纖維連接蛋白評價其術(shù)后營養(yǎng)狀況，以血清SOD、MDA評價其手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)

6、激導致氧自由基改變情況。 3.2人參皂甙Rbl強化EN對POFS模型療效及機制探討： 60只SPF級雄性SD大鼠，按體重隨機區(qū)組分對照組（Control Group，C組）、模型組（Model Group，M組）、EN+高劑量Rbl組（EN+High Dose-P-Rbl Group，EHP組）、EN+中劑量Rbl組（EN+Middle Dose-P-Rbl Group，EMP組）、EN+低劑量Rbl組（EN+Low D

7、ose-P-Rbl Group，ELP組）。麻醉后，沿腹白線開腹，除C組外，后4組先行70%中段小腸切除-吻合術(shù)（參考第一部分實驗操作），再行胃造瘺術(shù)，將內(nèi)徑0.3cm軟硅膠管帶測孔一端由胃大彎胃胃底處置入胃腔，行雙荷包縫合固定，另一端由背部皮下隧道引導至肩胛間區(qū)并固定與皮膚，接輸營養(yǎng)液裝置，作胃內(nèi)營養(yǎng)置管。關(guān)腹，術(shù)后當天禁食不禁水，單鼠單籠飼養(yǎng)。C組、M組予以常規(guī)飼料喂養(yǎng)，人參皂甙Rbl強化EN組予以腸內(nèi)營養(yǎng)百普素及不同劑量的人參皂甙

8、Rbl，觀察術(shù)后體重等一般情況；Morris水迷宮試驗測定學習與記憶重現(xiàn)能力、改良懸尾試驗測定其體力耐力及精神狀況；FACSCalibur流式細胞儀評估免疫功能CD4+、CD8+、IL2；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維連接蛋白含量、白細胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）；化學比色法測定白蛋白、過氧化物歧化酶、丙二醛、脂質(zhì)過氧化物含量。 結(jié)果： 1.建模結(jié)果： 70%小腸切除組大鼠一

9、般情況POFS表征符合程度最佳，體力、耐力下降，學習記憶能力下降，并出現(xiàn)一定程度的抑郁傾向（P<0.05），血清急性期蛋白水平明顯下降（P<0.05），與疲勞相關(guān)的氧自由基也處于失衡狀態(tài)（P<0.05）。 2.腸內(nèi)營養(yǎng)干預的療效及其機制的探討結(jié)果： EHP組及EMP組在改善POFS方面效果明顯，ELP組在部分指標改善顯著：體重方面，除M組外各組交替上升，術(shù)后第7天都明顯增加（P<0.05）。Morris水迷宮試驗中，E

10、N+Rbl能明顯縮短學習潛伏期及增加準確穿越目標平臺次，EHP及EMP組（P<0.01）； ELP組（P<0.05）。在改良懸尾試驗中，EHP及EMP組能明顯增加掙扎域上面積（P<0.05），減少單次最長靜止休息時間，EHP及ELP組作用類似（P<0.05），EMP組效果突出（P<0.01）。在自發(fā)活動試驗（Open Field Test，OFT）中，高劑量人參皂甙Rbl強化EN組相對M組，總路程、中央路程、活動次數(shù)、豎起修飾次數(shù)等各指

11、標有明顯好轉(zhuǎn)（P<0.05）；中、低劑量人參皂甙Rbl強化EN組相對M組，以上各指標部分有好轉(zhuǎn)（P<0.05）；EN+Rbl能增加轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、纖維連接蛋白血清含量（P<0.05），其中EHP能極其明顯地增加纖維連接蛋白含量（P<0.01）。各治療組能增加CD4+T細胞比例及IL-2含量（P<0.05），但對于CD8+T細胞無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。EHP及EMP組能增加SOD活性減少LPO及MDA含量（P<0.05）。

12、 結(jié)論 1.70%小腸切除-吻合術(shù)建立的大鼠動物模型，具有臨床POFS的基本特點，是建立POFS動物模型的一個良好方法。適度的手術(shù)創(chuàng)傷是引起POFS的啟動因素，也是制作該動物模型的關(guān)鍵；而由神經(jīng)-內(nèi)分泌-高代謝反應(yīng)所引起術(shù)后營養(yǎng)障礙則是其發(fā)展的必須條件，兩則有相互促進的關(guān)系。 2.予以術(shù)后營養(yǎng)支持，能緩解、遏制POFS的發(fā)生發(fā)展；人參是傳統(tǒng)補益中藥，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等都有廣泛作用，促進疲勞恢復、提高應(yīng)激能力均有