人參皂甙Rb1強(qiáng)化EN對(duì)POFS模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.以“適量中段小腸切除-吻合術(shù)”建立穩(wěn)定可靠的術(shù)后疲勞綜合征（Postoperative Fatigue Syndrome POFS）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；通過術(shù)后一般情況觀察、檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶的Morris水迷宮試驗(yàn)、評(píng)估體力耐力的改良懸尾試驗(yàn)、血清白蛋白（Albumin，AL）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin，TF）、前白蛋白（Prealbumin，PA）及纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）含量、氧自由基等評(píng)估手段

2、超氧化物岐化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、脂質(zhì)過氧化物（lipid Peroxides，LPO）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）建立POFS客觀的評(píng)估體系； 2.通過人參皂甙Rbl（Panaxoside Rbl，P-Rbl）強(qiáng)化腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)（Enteral Nutrition，EN）方案的對(duì)術(shù)后疲勞綜合征進(jìn)行干預(yù)，研究該方案對(duì)術(shù)后疲勞康復(fù)過程中的影響。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法： 1.實(shí)

3、驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重（250-275g），由上海中科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（SCXK滬2007-0005）。 2.檢測(cè)指標(biāo)：①改良懸尾試驗(yàn)檢測(cè)大鼠精神及體力耐力情況； ②Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)及記憶重現(xiàn)能力； ③自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)測(cè)定大鼠自主性活動(dòng)情況； ④化學(xué)比色法測(cè)定白蛋白、過氧化物歧化酶、丙二醛、脂質(zhì)過氧化物含量； ⑤酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖

4、維連接蛋白含量、IL-2； ⑥免疫濁度法測(cè)定前白蛋白含量； ⑦FACSCalibur流式細(xì)胞儀器測(cè)CD4-、CD8+細(xì)胞含量。 3.方法 分兩部分進(jìn)行 3.1建模： SPF級(jí)雄性SD大鼠42只，稱重編號(hào)按隨機(jī)區(qū)組表分為對(duì)照組（C組）、70%中段小腸切除組（70%組）、40%中段小腸切除組（40%組）、10%組中段小腸切除組（10%組）。麻醉后，沿腹白線開腹。C組：開腹，僅翻動(dòng)腸襻；后3組

5、分別切除70%、40%、10%中段小腸長(zhǎng)度，剩余腸端行端端吻合，關(guān)腹，術(shù)后單鼠單籠飼養(yǎng)。術(shù)后觀察一般情況、進(jìn)行改良懸尾試驗(yàn)（Improved Tail Suspension Test，ITST）檢測(cè)其體力耐力及精神狀況、Morris水迷宮試驗(yàn)（Morris Water Maze，MWM）檢測(cè)其視覺相關(guān)的學(xué)習(xí)及記憶重現(xiàn)能力等行為學(xué)試驗(yàn)，并以血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、纖維連接蛋白評(píng)價(jià)其術(shù)后營(yíng)養(yǎng)狀況，以血清SOD、MDA評(píng)價(jià)其手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)

6、激導(dǎo)致氧自由基改變情況。 3.2人參皂甙Rbl強(qiáng)化EN對(duì)POFS模型療效及機(jī)制探討： 60只SPF級(jí)雄性SD大鼠，按體重隨機(jī)區(qū)組分對(duì)照組（Control Group，C組）、模型組（Model Group，M組）、EN+高劑量Rbl組（EN+High Dose-P-Rbl Group，EHP組）、EN+中劑量Rbl組（EN+Middle Dose-P-Rbl Group，EMP組）、EN+低劑量Rbl組（EN+Low D

7、ose-P-Rbl Group，ELP組）。麻醉后，沿腹白線開腹，除C組外，后4組先行70%中段小腸切除-吻合術(shù)（參考第一部分實(shí)驗(yàn)操作），再行胃造瘺術(shù)，將內(nèi)徑0.3cm軟硅膠管帶測(cè)孔一端由胃大彎胃胃底處置入胃腔，行雙荷包縫合固定，另一端由背部皮下隧道引導(dǎo)至肩胛間區(qū)并固定與皮膚，接輸營(yíng)養(yǎng)液裝置，作胃內(nèi)營(yíng)養(yǎng)置管。關(guān)腹，術(shù)后當(dāng)天禁食不禁水，單鼠單籠飼養(yǎng)。C組、M組予以常規(guī)飼料喂養(yǎng)，人參皂甙Rbl強(qiáng)化EN組予以腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)百普素及不同劑量的人參皂甙

8、Rbl，觀察術(shù)后體重等一般情況；Morris水迷宮試驗(yàn)測(cè)定學(xué)習(xí)與記憶重現(xiàn)能力、改良懸尾試驗(yàn)測(cè)定其體力耐力及精神狀況；FACSCalibur流式細(xì)胞儀評(píng)估免疫功能CD4+、CD8+、IL2；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維連接蛋白含量、白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）；化學(xué)比色法測(cè)定白蛋白、過氧化物歧化酶、丙二醛、脂質(zhì)過氧化物含量。 結(jié)果： 1.建模結(jié)果： 70%小腸切除組大鼠一

9、般情況POFS表征符合程度最佳，體力、耐力下降，學(xué)習(xí)記憶能力下降，并出現(xiàn)一定程度的抑郁傾向（P<0.05），血清急性期蛋白水平明顯下降（P<0.05），與疲勞相關(guān)的氧自由基也處于失衡狀態(tài)（P<0.05）。 2.腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的療效及其機(jī)制的探討結(jié)果： EHP組及EMP組在改善POFS方面效果明顯，ELP組在部分指標(biāo)改善顯著：體重方面，除M組外各組交替上升，術(shù)后第7天都明顯增加（P<0.05）。Morris水迷宮試驗(yàn)中，E

10、N+Rbl能明顯縮短學(xué)習(xí)潛伏期及增加準(zhǔn)確穿越目標(biāo)平臺(tái)次，EHP及EMP組（P<0.01）； ELP組（P<0.05）。在改良懸尾試驗(yàn)中，EHP及EMP組能明顯增加掙扎域上面積（P<0.05），減少單次最長(zhǎng)靜止休息時(shí)間，EHP及ELP組作用類似（P<0.05），EMP組效果突出（P<0.01）。在自發(fā)活動(dòng)試驗(yàn)（Open Field Test，OFT）中，高劑量人參皂甙Rbl強(qiáng)化EN組相對(duì)M組，總路程、中央路程、活動(dòng)次數(shù)、豎起修飾次數(shù)等各指

11、標(biāo)有明顯好轉(zhuǎn)（P<0.05）；中、低劑量人參皂甙Rbl強(qiáng)化EN組相對(duì)M組，以上各指標(biāo)部分有好轉(zhuǎn)（P<0.05）；EN+Rbl能增加轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、纖維連接蛋白血清含量（P<0.05），其中EHP能極其明顯地增加纖維連接蛋白含量（P<0.01）。各治療組能增加CD4+T細(xì)胞比例及IL-2含量（P<0.05），但對(duì)于CD8+T細(xì)胞無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。EHP及EMP組能增加SOD活性減少LPO及MDA含量（P<0.05）。

12、 結(jié)論 1.70%小腸切除-吻合術(shù)建立的大鼠動(dòng)物模型，具有臨床POFS的基本特點(diǎn)，是建立POFS動(dòng)物模型的一個(gè)良好方法。適度的手術(shù)創(chuàng)傷是引起POFS的啟動(dòng)因素，也是制作該動(dòng)物模型的關(guān)鍵；而由神經(jīng)-內(nèi)分泌-高代謝反應(yīng)所引起術(shù)后營(yíng)養(yǎng)障礙則是其發(fā)展的必須條件，兩則有相互促進(jìn)的關(guān)系。 2.予以術(shù)后營(yíng)養(yǎng)支持，能緩解、遏制POFS的發(fā)生發(fā)展；人參是傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等都有廣泛作用，促進(jìn)疲勞恢復(fù)、提高應(yīng)激能力均有