維生素C與幼建鯉消化吸收能力及其抗氧化作用關(guān)系研究.pdf

1、本研究旨在探索維生素C對(duì)幼建鯉生長(zhǎng)、消化吸收能力的影響及其抗氧化的作用關(guān)系。通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，研究了幼建鯉不同發(fā)育階段血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中酶性抗氧化系統(tǒng)指標(biāo)和非酶性抗氧化物質(zhì)含量的變化，揭示出幼建鯉不同發(fā)育階段體內(nèi)抗氧化的變化規(guī)律；在此基礎(chǔ)上，研究了不同維生素C水平對(duì)幼建鯉血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中的抗氧化規(guī)律及其作用方式；研究了維生素C對(duì)幼建鯉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的沉積效率的影響并確定了需要量；系統(tǒng)深入研究了維生素C對(duì)

2、幼建鯉消化器官發(fā)育、消化吸收功能的影響；通過(guò)細(xì)胞模型研究維生素C對(duì)幼建鯉腸上皮細(xì)胞的增值、分化和抗氧化的影響，探索維生素C對(duì)魚(yú)腸上皮細(xì)胞氧化的保護(hù)作用及其作用方式。主要的研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　 1.不同體重建鯉血液、肌肉、肝胰臟和腸道中抗氧化指標(biāo)變化規(guī)律研究選擇體重為18.0±0.2g(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)的健康建鯉750尾，設(shè)5個(gè)階段，每階段150尾，每個(gè)階段3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾魚(yú)。五個(gè)階段均飼喂相同的試驗(yàn)飼糧，試驗(yàn)開(kāi)始后

3、每階段間隔14天取樣一次，用于測(cè)定幼建鯉血清、肝胰臟、腸道和肌肉的抗氧化指標(biāo)。
　　 2.維生素C對(duì)幼建鯉生長(zhǎng)性能、體蛋白、脂肪和灰分影響選擇體重為12.63±0.02g(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)的健康建鯉900尾。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，每個(gè)處理共150尾魚(yú)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾魚(yú)。分別飼畏維生素C含量為0mg/kg、21.4mg/kg、45.1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142.1mg/kg的試驗(yàn)日糧60

4、天。結(jié)果表明：維生素C能夠極顯著提高幼建鯉特異增長(zhǎng)率和攝食量(P＜0.01)，當(dāng)飼料維生素C含量分別達(dá)到40.9和45.1mg/kg后，其特異性生長(zhǎng)率和攝食量均達(dá)到最大且達(dá)平臺(tái)(P＞0.05)；維生素C極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)提高幼建鯉蛋白質(zhì)沉積率、脂肪沉積率和磷的沉積率，當(dāng)飼料維生素C含量分別達(dá)到39.4mg/kg和38.6mg/kg時(shí)，蛋白沉積率和脂肪沉積率分別達(dá)到最大并達(dá)平臺(tái)值(P＞0.05)，對(duì)灰分和鈣的沉積

5、沒(méi)有顯著影響(P＞0.05)。
　　 3.維生素C與幼建鯉消化吸收能力的關(guān)系研究選擇體重為12.63±0.02g(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)的健康建鯉900尾。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，每個(gè)處理共150尾魚(yú)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾魚(yú)。分別飼喂維生素C含量為0mg/kg、21.4mg/kg、45.1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142.1mg/kg的試驗(yàn)日糧60天。
　　 4.維生素C對(duì)幼建鯉不同組織中抗氧化指

6、標(biāo)的影響選擇體重為12.63±0.02g(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)的健康建鯉900尾。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，每個(gè)處理共150尾魚(yú)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾魚(yú)。分別飼喂維生素C含量為0mg/kg、21.4mg/kg、45.1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142.1mg/kg的試驗(yàn)日糧60天。結(jié)果表明：維生素C極顯著降低幼建鯉血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中丙二醛(MDA)、蛋白質(zhì)羰基的含量(P＜0.01)，當(dāng)維生素C含量分別

7、達(dá)42.9mg/kg、46.6mg/kg、50.4mg/kg和61.4mg/kg飼糧后，血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中的MDA含量下降致最低水平并達(dá)到平臺(tái)值；而血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中的蛋白質(zhì)羰基含量與飼料維生素C的水平呈顯著的線性關(guān)系，并隨著飼料維生素C的添加呈顯著下降(P＜0.01)。維生素C極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)提高幼建鯉血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中抗超氧陰離子(ASA)和抗羥自由基(AHR)的清除能

8、力，并且與相應(yīng)組織中的MDA和蛋白質(zhì)羰基含量呈極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)的負(fù)相關(guān)關(guān)系；維生素C能夠極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)地提高幼建鯉血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中酶性抗氧化指標(biāo)超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)和谷胱甘肽(GR)的活力，相關(guān)分析表明，這些酶均與相應(yīng)組織中的MDA或蛋白質(zhì)羰基呈極顯著(P＜0.01)或顯著(P

9、＜0.05)的負(fù)相關(guān)關(guān)系。維生素C能夠極顯著(P＜0.01)地提高幼建鯉血液、肝胰臟、腸道和肌肉組織中非酶性抗氧化物質(zhì)還原性谷胱甘肽(GSH)的含量，并分別與相應(yīng)組織中的MDA含量和蛋白羰基含量呈極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)的負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　 5.維生素C對(duì)鯉魚(yú)腸上皮細(xì)胞增殖分化的影響采用單因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為6個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。選擇體重為80g左右的健康鯉魚(yú)制備腸道上皮細(xì)胞。對(duì)分離的腸上皮細(xì)胞

10、進(jìn)行接種培養(yǎng)72h后分別添加維生素C濃度為0、4、10、16、22、28mg/L的生長(zhǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)96h，收集培養(yǎng)液，對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析測(cè)試。結(jié)果表明：隨著維生素C濃度的上升，觀察發(fā)現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量明顯增多，并形成大的細(xì)胞集落和成片的單層細(xì)胞，細(xì)胞個(gè)體變大，成明顯的橢圓形，輪廓清晰，從MTTOD值也發(fā)現(xiàn)，其值隨維生素C濃度的增加而上升，到10mg/L后，達(dá)到平臺(tái)值(P＞0.05)。維生素C對(duì)腸上皮細(xì)胞的蛋白含量，堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、

11、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、Na+，K+-ATP酶和乳酸脫氫酶活性有顯著的影響(P＜0.05)。能夠顯著增加鯉魚(yú)腸上皮細(xì)胞的蛋白合成(P＜0.05)，當(dāng)培養(yǎng)液中維生素C的濃度分別達(dá)22mg/L和10mg/L后，細(xì)胞中總蛋白含量和培養(yǎng)液蛋白含量達(dá)到最大并達(dá)到穩(wěn)定值；顯著增加鯉魚(yú)腸上皮細(xì)胞中堿性磷酸酶的活力(P＜0.05)，當(dāng)培養(yǎng)液中的維生素C濃度達(dá)16mg/L后，堿性磷酸酶活力不再升高并達(dá)到穩(wěn)定；顯著提高鯉魚(yú)腸上皮細(xì)胞谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性(P＜0

12、.05)，當(dāng)維生素C濃度達(dá)16mg/L后，GOT和GPT活性最強(qiáng)且達(dá)到平臺(tái)值；Na+，K+-ATP酶的活性也在維生素C濃度達(dá)16mg/L后不再上升，并達(dá)到平臺(tái)值；對(duì)乳酸脫氫酶的活性也有顯著的影響(P＜0.05)，當(dāng)維生素C濃度達(dá)22mg/L后活性降到最低。
　　 6.維生素C對(duì)鯉魚(yú)腸上皮細(xì)胞氧化保護(hù)作用的影響采用單因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為7個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。選擇體重80g左右的健康鯉魚(yú)制備腸道上皮細(xì)胞。對(duì)分離的腸上皮

13、細(xì)胞進(jìn)行接種培養(yǎng)72h后按0mg/L(空白對(duì)照)、0mg/L+100umolH202、4mg/L+100umolH202、10mg/L+100umolH202、16mg/L+100umolH202、22mg/L+100umolH2O2和28mg/L+100umolH202設(shè)計(jì)處理生長(zhǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)16h，收集培養(yǎng)液，對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析測(cè)試。結(jié)果表明：與空白對(duì)照組對(duì)比觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)100μmol/LH202處理16h后，細(xì)胞數(shù)量減少，不規(guī)則和

14、輪廓不清楚細(xì)胞增多，折光性減弱，貼壁能力降低；而用4、10、16和22mg/LVC處理后，細(xì)胞形狀、折光性、貼壁能力得到明顯改善，并可見(jiàn)大量完整細(xì)胞。100umol的H202導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激，與空白對(duì)照相比，顯著增加培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的含量(P＜0.05)，顯著降低細(xì)胞蛋白含量(P＜0.05)，細(xì)胞生長(zhǎng)受阻，細(xì)胞結(jié)果受到破壞；與空白對(duì)照相比，培養(yǎng)液中MDA和蛋白質(zhì)羰基含量顯著增加(P＜0.05)，清除超氧陰離子和羥自由基的能力

15、顯著下降(P＜0.05)，抗氧化酶的活性和非酶性抗氧化物質(zhì)的含量顯著降低(P＜0.05)。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下通過(guò)添加不同濃度的維生素C能夠顯著降低培養(yǎng)液中MDA和蛋白質(zhì)羰基的含量(P＜0.05)；顯著恢復(fù)抗超氧陰離子和抗羥自由基的能力(P＜0.05)，ASA能力恢復(fù)至空白對(duì)照水平，AHR能力比空白對(duì)照水平顯著增強(qiáng)(P＜0.05)；SOD、CAT、GST、GR的活性和GSH含量顯著上升(P＜0.05)，至28mg/L時(shí)達(dá)到空白對(duì)照水平，而G