中藥學(xué)畢業(yè)論文(含文獻(xiàn)綜述)超聲提取穿破石中黃酮及其活性研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　超聲提取穿破石中黃酮及其活性研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專(zhuān)業(yè)班級(jí) 中藥學(xué)(中藥分析與鑒定

2、方向) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱(chēng) </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　誠(chéng) 信 聲 明</b></

3、p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。我承諾，論文中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文作者（簽名）： </p><p>　　年

4、 月 日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要I</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑3</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)儀器3&l

5、t;/p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)試劑4</p><p><b>　　3 實(shí)驗(yàn)步驟4</b></p><p>　　3.1 黃酮的預(yù)處理4</p><p>　　3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4</p><p>　　3.3 得率的測(cè)定5</p><p>　　3.4 單因素實(shí)驗(yàn)5

6、</p><p>　　3.5 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝6</p><p>　　3.6 大孔樹(shù)脂純化6</p><p>　　3.7 抗氧化性研究7</p><p><b>　　4 結(jié)果9</b></p><p>　　4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制9</p><p>　　4.2 提

7、取得率的測(cè)定9</p><p>　　4.3 單因素試驗(yàn)9</p><p>　　4.4 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝11</p><p>　　4.5 純化結(jié)果18</p><p>　　4.6 抗氧化性研究20</p><p><b>　　5 討論21</b></p><p>

8、;<b>　　參考文獻(xiàn)23</b></p><p><b>　　綜述26</b></p><p><b>　　致 謝38</b></p><p>　　超聲提取穿破石中黃酮及其活性研究</p><p>　　摘要：目的 以中藥材穿破石為原料，研究了穿破石中黃酮類(lèi)成分的提

9、取工藝條件、大孔樹(shù)脂純化方法和抗氧化作用，為穿破石的應(yīng)用提供有效的科學(xué)依據(jù)。方法 以一定濃度的乙醇作為提取溶劑，采用超聲提取方法，通過(guò)提取溶劑（乙醇）體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間三個(gè)因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，并以實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)最優(yōu)提取條件進(jìn)行探究并確定。純化方面以五種型號(hào)的大孔樹(shù)脂作對(duì)比，通過(guò)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附與解析確定最佳純化的樹(shù)脂型號(hào)。最后通過(guò)羥自由基的清除率和DPPH自由基清除率研究黃酮的抗氧化性。結(jié)果 以單因素實(shí)驗(yàn)為

10、基礎(chǔ)，通過(guò)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到最佳提取條件為提取溶劑濃度為70%乙醇，料液比1:15，時(shí)間30min；通過(guò)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的吸附與解析，比較5種大孔樹(shù)脂的能力得出型號(hào)NKA-9樹(shù)脂純化效果最佳。最后通過(guò)羥自由基的清除率和DPPH自由基清除率，隨濃度增加清除率變大，抗氧化效果明顯。結(jié)論 響應(yīng)面對(duì)穿破石黃酮提取的優(yōu)化具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,大孔樹(shù)脂NKA-9對(duì)穿破石的純化效果顯著，且穿破石黃酮有較強(qiáng)的抗氧化能力。</p><p>　　

11、關(guān)鍵詞：穿破石黃酮；提取工藝優(yōu)化；大孔樹(shù)脂純化；抗氧化能力</p><p>　　Ultrasonic extraction in Ventilago leiocarpa Benth of flavonoids and its active research</p><p>　　Abstract: Objective Make flavonoids from Ventilago leioca

12、rpa Benth as material to study the extraction technology of nuclear polyphenols condition, macroporous resin purification methods and antioxidant effect. Provides effective scientific basis for the application of Ventila

13、go leiocarpa Benth.Method Make one certain concentration of ethanol as extraction solvent, make use of Ultrasonic extraction method, through extraction time, extraction solvent (ethanol),liquid ratio these three facors t

14、o d</p><p>　　KeyWords: the flavonoids of Ventilago leiocarpa Benth; Extraction process optimization; Macroporous resin purification; Antioxidant capacity</p><p><b>　　1 前言</b></p&g

15、t;<p>　　穿破石，中文學(xué)名:翼核果，拉丁學(xué)名：Ventilago leiocarpa Benth。藥材來(lái)源于?？畦蠈僦参飿?gòu)棘，以根入藥，全年可采，洗凈切片曬干。主產(chǎn)于臺(tái)灣、福建、廣東、廣西、湖南、云南。本藥材性味微苦，具有祛風(fēng)利濕、活血通經(jīng)功效，主治風(fēng)濕筋骨痛、跌打損傷、腰肌勞損、貧血頭暈、四肢麻木、月經(jīng)不調(diào)等，是民間常用的本草中藥[1-3],每到南方回南天氣時(shí)候穿破石使用率較高。目前，有關(guān)穿破石的研究報(bào)告較少，本實(shí)

16、驗(yàn)主要通過(guò)從穿破石中提取黃酮類(lèi)成分進(jìn)行工藝優(yōu)化與性質(zhì)研究，為開(kāi)發(fā)穿破石的中成藥提供依據(jù)。</p><p>　　穿破石性寒涼，以化痰止咳、舒經(jīng)通絡(luò)、化瘀止痛、散結(jié)消腫為主，主治風(fēng)濕痹痛，穿破石相對(duì)偏治肝膽、癌腫病癥等，穿破石又具有護(hù)肝、抗肝纖維化、抗氧化及鎮(zhèn)痛抗炎作用，穿破石的研究熱點(diǎn)集中在對(duì)肝臟疾病及風(fēng)濕病的治療[4]。目前穿破石的臨床研究報(bào)道不多，而且研究并不規(guī)范，這與實(shí)驗(yàn)研究形成明顯的反差。究其原因，可能是因

17、為穿破石一般認(rèn)為屬于“草藥”、“民族藥”，《中藥學(xué)》教材一般沒(méi)有收錄，故臨床應(yīng)用并不廣泛。因此，應(yīng)加強(qiáng)并規(guī)范該藥的應(yīng)用研究，主要研究其在肝膽、腫瘤、風(fēng)濕、心血管、糖尿病等的治療效果，以開(kāi)發(fā)出療效確切的藥物單品或成方制劑。</p><p>　　黃酮類(lèi)可看作是2-苯基色原酮的一系列衍生物,目前黃酮類(lèi)化合物是泛指具有15個(gè)碳原子的多元酚化合物。芳環(huán)(A環(huán)、B環(huán))之間以一個(gè)三碳鏈(C環(huán))相連,用C6-C3-C6表示。其中

18、C環(huán)部分可以是脂鏈,也可以與B環(huán)部分形成六元或五元的氧雜環(huán)。根據(jù)三碳鏈氧化程度、三碳鏈?zhǔn)欠癯森h(huán)狀、B環(huán)連接位置可以衍生出許多的結(jié)構(gòu)[5-6],因此,黃酮體化合物可分為黃酮類(lèi)和黃酮醇類(lèi)、二氫黃酮類(lèi)和二氫黃酮醇類(lèi)、查爾酮類(lèi)、雙黃酮類(lèi)、異黃酮類(lèi)以及其它黃酮類(lèi)等[7-8]。</p><p>　　黃酮多以苷類(lèi)形式存在，少數(shù)為無(wú)定型粉末。游離的苷元中，除了二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷及黃烷醇有旋光性外，其余則無(wú)；苷類(lèi)由于在結(jié)構(gòu)

19、中引入糖分子，故具有旋光性，且多位左旋[9]。 </p><p>　　黃酮類(lèi)化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大的差異。黃酮苷類(lèi)一般溶于水、甲醇、乙醇等極性強(qiáng)的溶劑中，難溶于或不溶于石油醚、氯仿、石油醚等低極性有機(jī)溶劑中，結(jié)構(gòu)中糖鏈越長(zhǎng)水溶性越大。黃酮類(lèi)化合物因分子中含有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲酰胺中。因酚羥基數(shù)目及位置不同，酸性強(qiáng)弱也不同[

20、10]。 </p><p>　　黃酮的顯色發(fā)應(yīng)有幾類(lèi)，主要包括：鹽酸鎂粉反應(yīng)、鈉汞齊還原反應(yīng)、四氫硼鈉還原反應(yīng)、與金屬鹽類(lèi)試劑的絡(luò)合反應(yīng)、硼酸顯色反應(yīng)、堿性試劑反應(yīng)和與五氯化銻反應(yīng)。</p><p>　　黃酮廣泛存在自然界的某些植物和漿果中，總數(shù)大約有4千多種，其分子結(jié)構(gòu)不盡相同[11]。不同分子結(jié)構(gòu)的黃酮可作用于身體不同的器官。黃酮的功效是多方面的，第一，它是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除

21、體內(nèi)的氧自由基[12-13]，本實(shí)驗(yàn)對(duì)穿破石中黃酮成分的抗氧化性也作出初步研究。第二，黃酮可以改善血液循環(huán)，可以降低膽固醇[14]。第三，黃酮化合物可以降低血糖和血脂，更重要的是它還具有穩(wěn)定膠原質(zhì)的作用，因此它對(duì)糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細(xì)血管脆化有很好的作用[15-16]。第四，黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進(jìn)傷口愈合和止痛，櫟素由于具有強(qiáng)抗組織胺性，可以用于各類(lèi)敏感癥[17-19]。因此，對(duì)黃酮化合物的研究與利用越來(lái)越受到人們的

22、重視，其在食品、醫(yī)藥、保健品和化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用具有廣闊的前景。</p><p>　　目前，提取黃酮的方法主要有以下幾種：</p><p>　　（1）溶劑提?。孩俅碱?lèi)提?。阂掖际浅Ｓ玫狞S酮類(lèi)化合物提取溶劑，高濃度的醇（如90%-95%）適于提取苷元，60%左右濃度的醇適于提取苷類(lèi)。提取次數(shù)一般是2至4次，可用冷浸法或加熱抽提法提取[20-21]。②熱水提?。簝H限于提取苷類(lèi)，但因提取雜質(zhì)多，

23、提取率低，故不常使用。③堿性稀醇或堿性水提取：堿性提取時(shí)，所用堿的濃度不宜過(guò)高，以免在強(qiáng)堿條件下加熱破壞黃酮類(lèi)化合物的母核，一般加熱都在70攝氏度以下。提取液中加入酸，黃酮苷類(lèi)即可沉淀析出，加酸酸化時(shí)，酸性也不易過(guò)強(qiáng)，以免生成鹽，致使析出黃酮化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率[22]。 </p><p>　?。?）超聲波技術(shù)和微波技術(shù)強(qiáng)化提?。撼暡夹g(shù)和微波技術(shù)提取可強(qiáng)化浸提，縮短提取時(shí)間，提高有效成分的提取率。本

24、實(shí)驗(yàn)采用超聲提取技術(shù)超聲波提取黃酮類(lèi)物質(zhì), 在60℃水浴中通過(guò)破壞植物細(xì)胞和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),從而增加細(xì)胞內(nèi)容物通過(guò)細(xì)胞膜的穿透能力,有助于黃酮類(lèi)化合物的釋放與溶出；超聲波使提取液不斷震蕩,有助于溶質(zhì)擴(kuò)散,同時(shí)超聲波的熱效應(yīng)使水溫基本在60℃左右,對(duì)原料有水浴作用,縮短了提取時(shí)間,提高了有效成分的提出率和原料的利用率。超聲波提取操作簡(jiǎn)便快捷、無(wú)需加熱、提出率高、速度快、提取物的結(jié)構(gòu)未被破壞、效果好,顯示出明顯的優(yōu)勢(shì)。</p>&

25、lt;p>　　響應(yīng)面法廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、化學(xué)、生化、食品、動(dòng)力學(xué)研究、工程過(guò)程控制等領(lǐng)域。它是利用合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)并通過(guò)試驗(yàn)得到的一定數(shù)據(jù)，采用多元二次回歸方程來(lái)擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，通過(guò)對(duì)回歸方程的分析來(lái)尋求最優(yōu)工藝參數(shù)，解決多變量問(wèn)題的一種統(tǒng)計(jì)方法[23]。本實(shí)驗(yàn)采用響應(yīng)面分析法對(duì)穿破石黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化并得出結(jié)果。</p><p>　　本次研究目的在于通過(guò)對(duì)穿破石的提取工藝優(yōu)化和抗氧化性質(zhì)研究

26、，發(fā)掘穿破石中黃酮類(lèi)成分的最佳提取方案和功效作用，充分提高人們對(duì)穿破石的了解，增強(qiáng)藥材的使用率，為開(kāi)發(fā)出療效確切的藥物單品或成方制劑提供科學(xué)依據(jù)。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)儀器</b></p><p><b>　　表2-1 主要儀器</

27、b></p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)試劑</b></p><p><b>　　表2-2 主要試劑</b></p><p><b>　　3 實(shí)驗(yàn)步驟</b></p><p>　　3.1 黃酮的預(yù)處理</p><p>　　預(yù)處理：購(gòu)買(mǎi)穿破石若

28、干，搶水洗凈，置于60℃烘箱中烘干，用中藥打粉機(jī)粉碎，過(guò)1號(hào)篩，密封儲(chǔ)存待用；</p><p>　　3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</p><p>　　精確稱(chēng)取10mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇溶解并定容至100mL，充分搖勻，獲得0.1mg﹒mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。</p><p>　　用移液器吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品置于10mL容量瓶中

29、，按順序標(biāo)記，用70％的乙醇補(bǔ)充至5.0mL。</p><p>　　分別加入0.3mL5%的亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6分鐘；再依次加入0.3mL的10%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6min，再加入1mol﹒L-1的NaOH溶液4.0mL，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置20min。</p><p>　　以不加蘆丁溶液（即1號(hào)0.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品）為對(duì)照組，于波長(zhǎng)510nm下測(cè)吸光度。</

30、p><p>　　以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)x，吸光度為縱坐標(biāo)y，作出線性回歸方程。</p><p><b>　　3.3 得率的測(cè)定</b></p><p>　　精確稱(chēng)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的穿破石粉末5g，用70%乙醇50mL浸泡，60℃中超聲30min，抽濾，取1mL濾液于10mL容量瓶中，加入0.3mL 5%的亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6分鐘；再依次加入0.3

31、mL的10%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6min，再加入1 mol﹒L-1的NaOH溶液4.0mL，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置20 min，于波長(zhǎng)510nm下測(cè)吸光度。</p><p>　　由3.2中測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所得線性回歸方程計(jì)算出每毫升提取液中的黃酮含量，再換算成每克果皮干粉中的黃酮含量即為黃酮提取得率。</p><p><b>　　3.4 單因素實(shí)驗(yàn)</b>

32、</p><p>　　通過(guò)查閱文獻(xiàn)[24-25]可知，影響穿破石黃酮提取的因素有很多，本次單因素試驗(yàn)選擇三個(gè)因素進(jìn)行研究，它們分別為：乙醇濃度（%），提取時(shí)間（min），料液比（W∶V）。采用的實(shí)驗(yàn)方案為：每次稱(chēng)取穿破石粉末2g于50mL帶塞錐形瓶中，確定其中兩個(gè)因素，用3.3浸提的方法進(jìn)行某一水平單因素試驗(yàn)，依次對(duì)各個(gè)因素對(duì)黃酮提取得率的影響進(jìn)行研究。 </p><p><b&g

33、t;　　黃酮提取得率計(jì)算：</b></p><p>　　W%=V×c／M×100% </p><p>　　式中：c——穿破石黃酮濃度，g﹒mL-1</p><p>　　V——樣品液體積，ml</p><p>　　M——樣品稱(chēng)樣量，g</p><p>　　3.4.1 提取溶劑濃度對(duì)黃酮提取

34、得率的影響</p><p>　　提取條件：提取溫度：60℃，料液比1:10，提取時(shí)間：30min，按乙醇濃度： 30%、40%、50%、60%、70%分別進(jìn)行提取。</p><p>　　共取3份2g穿破石粉末進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性。</p><p>　　3.4.2 料液比對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　提取條件：乙醇濃度由（3.4

35、.1）決定，溫度：60℃，提取時(shí)間：30min，按料液比： 1:5、1:10、1:15、1:20、1:25分別進(jìn)行提取。</p><p>　　共取3份2g穿破石粉末進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性。</p><p>　　3.4.3 提取時(shí)間對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　提取條件:溫度60℃，乙醇濃度由（3.4.1）確定，料液比由（3.4.2）確定，按提取時(shí)間為1

36、0min、20 min、30 min、40 min、50 min分別進(jìn)行提取。</p><p>　　共取3份2g穿破石粉末進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性。</p><p>　　3.5 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝</p><p>　　由進(jìn)行的3個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)，根據(jù)響應(yīng)面中心組合設(shè)計(jì)原理，選擇提取時(shí)間乙醇濃度(X1)、料液比(X2)、提取時(shí)間(X3)作為響應(yīng)面優(yōu)化的考察因素，以提取物的

37、吸光度(或提取得率)為響應(yīng)值，應(yīng)用Design-Expert 8.0.6 Trial軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到穿破石中黃酮提取的最佳條件。</p><p>　　3.6 大孔樹(shù)脂純化</p><p>　　3.6.1 大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理</p><p>　　先分別用蒸餾水洗去AB-8，D101，NKA-9，HPD-100，X-5樹(shù)脂中細(xì)小樹(shù)脂及破碎樹(shù)脂，濕法裝柱，然后，用

38、高于樹(shù)脂層5cm的無(wú)水乙醇浸泡24h，放出浸液，繼續(xù)用無(wú)水乙醇沖洗至洗出液與水以1:5體積混合不出現(xiàn)白色渾濁，再用蒸餾水洗至無(wú)醇味，然后抽濾，60℃下真空干燥24h，放入干燥器中備用。</p><p>　　3.6.2 樣品溶液的制備</p><p>　　采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)后的最佳提取數(shù)據(jù)，對(duì)穿破石進(jìn)行提取，得到樣品溶液；</p><p>　　3.6.3 樣品溶液靜態(tài)吸附

39、與解析</p><p>　　靜態(tài)吸附：各取5種預(yù)處理后的大孔樹(shù)脂2g置于100mL錐形瓶中，加入稀釋后的樣品溶液50mL，常溫下密封，在相同攪拌速度下用磁力攪拌器攪拌，每1h測(cè)定上清液吸光值。</p><p>　　靜態(tài)解析：取上述大孔樹(shù)脂置于100mL錐形瓶中，加入70%乙醇50mL密封攪拌，每1h取上清液測(cè)定吸光值。</p><p>　　3.6.4 樣品溶液動(dòng)態(tài)吸

40、附與解析</p><p>　　動(dòng)態(tài)吸附：取靜態(tài)吸附與解析中效果最佳的兩種大孔樹(shù)脂，濕法裝柱，各加50mL樣品溶液，以2BV/h過(guò)柱，取濾液測(cè)體積與吸光值。</p><p>　　動(dòng)態(tài)解析：取70%乙醇各50mL以2BV/h速度過(guò)柱，收集濾液，測(cè)其體積與吸光值。</p><p>　　3.7 抗氧化性研究</p><p>　　3.7.1 清除羥自由

41、基</p><p>　　將穿破石黃酮純化樣品和抗壞血栓配置為不同濃度（0.1mg﹒mL-1，0.2mg﹒mL-1，0.3mg﹒mL-1，0.4mg﹒mL-1，0.5mg﹒mL-1）的樣品液。分別在試管中加入FeSO4，水楊酸-乙醇及不同濃度樣品液各2mL，最后加2mL H2O2，在37℃下反應(yīng)20min，以蒸餾水作為參比，在510nm下測(cè)定各濃度的吸光度Ax。用水代替水楊酸-乙醇測(cè)得各濃度吸光度Axo，用水代替樣

42、品液測(cè)得吸光度Ao。通過(guò)以下公式測(cè)得各濃度的穿破石黃酮提取液及抗壞血栓的清除率。</p><p>　　清除率（%）=[Ao-(Ax-Axo)]/ Ao×100%</p><p>　　式中：Ao——不加樣品的空白對(duì)照液吸光度</p><p>　　Ax——加入樣品后溶液的吸光度</p><p>　　Axo——不加顯色劑H2O2樣品溶液本

43、底的吸光度</p><p>　　3.7.2 DPPH自由基的清除</p><p>　　取不同濃度（0.0mg﹒mL-1，0.1mg﹒mL-1，0.2mg﹒mL-1，0.3mg﹒mL-1，0.4mg﹒mL-1，0.5mg﹒mL-1）穿破石黃酮純化液2mL，用70%乙醇定容至10mL，37℃暗處放置20min，波長(zhǎng)510nm下測(cè)定其吸光值A(chǔ)j。</p><p>　　取以

44、上相同濃度的黃酮純化液2mL及濃度為0.2mmol﹒ml-1的DPPH溶液2mL，先后加入同一具塞試管中，用70%乙醇定容至10mL,37℃暗處放置20min,波長(zhǎng)510nm下測(cè)定其吸光度Ai,其中純化液濃度0.0mg﹒mL-1一組吸光值記為A0,根據(jù)下列公式計(jì)算穿破石黃酮純化液對(duì)DPPH自由基的清除率。</p><p>　　DPPH自由基抑制率=[1-(Ai-Aj)／A0]×100％</p>

45、;<p><b>　　4 結(jié)果</b></p><p>　　4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖（4-1）所示。</p><p>　　圖4-1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　4.2 提取得率的測(cè)定</p><p>　　初步測(cè)定，穿破石中黃酮的提取得率為1.37

46、%,與文獻(xiàn)[15]相差有一定差距，可能與提取條件或操作過(guò)程中的誤差有關(guān)，因此接下來(lái)通過(guò)提取工藝優(yōu)化提高穿破石中黃酮的提取得率。</p><p><b>　　4.3 單因素試驗(yàn)</b></p><p>　　4.3.1 提取溶劑濃度對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　如圖（4-2）可見(jiàn)，在乙醇濃度50%到70%之間，隨著乙醇濃度的增加，提取得

47、率呈上升趨勢(shì)，且在70%時(shí)達(dá)到最大提取得率，隨后隨著乙醇濃度的升高，穿破石黃酮提取得率逐漸降低，原因可能是高濃度乙醇難以將水溶性黃酮提取出來(lái)。綜合考慮選擇70%乙醇作為較優(yōu)提取溶液濃度作為接下來(lái)實(shí)驗(yàn)的提取條件。</p><p>　　圖4-2 提取溶劑濃度對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　4.3.2 料液比對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　如圖（4-3

48、）所示，可以看出在料液比1:5至1:15之間隨著料液比的增加，黃酮提取得率也隨著提高，基本呈正相關(guān)變化，但是料液比到1:20的過(guò)程中，提取得率反而降低，可見(jiàn)繼續(xù)加大溶劑量并不能明顯產(chǎn)生更好的提取效率，其中原因可能為穿破石中黃酮成分的溶出率在料液比為1:15時(shí)已達(dá)到最高，即使增加溶劑，黃酮的溶出量較少?gòu)亩档忘S酮在溶液中的總體濃度，綜合考慮選擇1:15作為較優(yōu)料液比進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)條件。</p><p>　　圖4-

49、3 料液比對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　4.3.3 提取時(shí)間對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　從圖（4-4）可以看出，提取時(shí)間從10min增加到30min的過(guò)程中，穿破石黃酮的提取得率呈增高的趨勢(shì)，增高趨勢(shì)較為平緩，且在30min時(shí)達(dá)到最大提取得率。繼續(xù)延長(zhǎng)提取時(shí)間至50min的過(guò)程中，穿破石黃酮提取得率呈緩慢下降趨勢(shì)，其下降原因可能為黃酮類(lèi)物質(zhì)易被氧化，生成其他物質(zhì)。

50、綜上所述，提取時(shí)間為30min較佳，選擇其作為實(shí)驗(yàn)的提取時(shí)間。</p><p>　　圖4-4 提取時(shí)間對(duì)黃酮提取得率的影響</p><p>　　4.4 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝</p><p>　　4.4.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)利用Design-Expert8.0.6軟件進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)并分析，Box-Behnken設(shè)計(jì)方案及結(jié)

51、果如表(4-5)。</p><p>　　表4-5 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案</p><p>　　4.4.2 響應(yīng)面結(jié)果分析</p><p>　　利用響應(yīng)面軟件對(duì)表（4-5）試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到穿破石黃酮提取得率對(duì)乙醇濃度（A）料液比（B）提取時(shí)間（C）的二次多項(xiàng)回歸模型，結(jié)果如表（4-6）所示，模型P<0.01(顯著)，失擬性=0.8682>0.05

52、(不顯著)，失擬項(xiàng)差異不顯著，表明該方程對(duì)試驗(yàn)擬合情況好，試驗(yàn)誤差小，可以用該模型對(duì)不同反應(yīng)條件下的黃酮提取得率進(jìn)行預(yù)測(cè)。分析結(jié)果可知對(duì)穿破石黃酮提取得率影響程度大小順序?yàn)镃（提取時(shí)間）>B（料液比）>A（乙醇濃度），其中B（料液比）<0.05(顯著)，C（提取時(shí)間）=0.0409<0.05(顯著)，BC（料液比和提取時(shí)間的交互作用）=0.0215<0.05（顯著），A2、C2均達(dá)到顯著，B2達(dá)到極顯著。&

53、lt;/p><p>　　表4-6 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)</p><p>　　圖4-7 乙醇濃度、料液比及其交互作用對(duì)提取得率的影響的響應(yīng)面圖</p><p>　　圖4-8 乙醇濃度、料液比及其交互作用對(duì)提取得率的影響的等高線</p><p>　　圖4-9 乙醇濃度、提取時(shí)間及其交互作用對(duì)提取得率影響的響應(yīng)面圖</p><p>　

54、　圖4-10 乙醇濃度、提取時(shí)間及其交互作用對(duì)提取得率影響的等高線</p><p>　　圖4-11 料液比、提取時(shí)間及其交互作用對(duì)提取得率影響的響應(yīng)面圖</p><p>　　圖4-12 料液比、提取時(shí)間及其交互作用對(duì)提取得率影響的等高線</p><p>　　從三組響應(yīng)面圖可以看出，黃酮提取得率在各個(gè)交互的影響因素的中心點(diǎn)均達(dá)到最大值，且達(dá)到最大值時(shí)所對(duì)應(yīng)的各因素值在

55、最優(yōu)提取條件附近。</p><p>　　其中，AB（乙醇濃度和料液比的交互作用）曲面坡度較陡，說(shuō)明響應(yīng)面值即黃酮提取得率對(duì)AB的交互作用的變化比較敏感，其次是AC（乙醇濃度和提取時(shí)間的交互作用），而B(niǎo)C（料液比和提取時(shí)間的交互作用）曲面較平坦，說(shuō)明BC交互作用對(duì)黃酮提取得率影響較小。</p><p>　　此外，由三組等高線可以看出AB（乙醇濃度和料液比的交互作用）、AC（乙醇濃度和提取時(shí)間

56、的交互作用）、BC（料液比和提取時(shí)間的交互作用）等高線均為橢圓形，其中AB等高線中橢圓排列較AC密集，可以判斷AB、AC、BC對(duì)提取得率的影響具有顯著性，且AB的交互作用對(duì)提取得率的影響最大。綜合對(duì)響應(yīng)面圖和等高線對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，所得結(jié)論基本與其方差分析結(jié)果一致。</p><p>　　由Design-Expert8.0.6.1軟件進(jìn)行響應(yīng)面分析，得到結(jié)果（見(jiàn)表4-13）：在乙醇濃度為70.83%，料液比1:15.

57、35，提取時(shí)間為28.61min條件下進(jìn)行提取，所得的穿破石黃酮提取得率可以達(dá)到最大值：2.63796%。</p><p>　　表4-13 最佳條件選擇結(jié)果</p><p>　　4.4.3 驗(yàn)證性試驗(yàn)</p><p>　　由Design-Expert8.0.6.1軟件進(jìn)行響應(yīng)面分析，得到結(jié)果（見(jiàn)表4-13）。為方便實(shí)驗(yàn)操作，將最優(yōu)提取條件改為：乙醇濃度為70%，料液

58、比1:15，提取時(shí)間為29min。在此提取條件下進(jìn)行驗(yàn)證，得到結(jié)果（見(jiàn)表4-14）。以最優(yōu)條件提取條件所得穿破石黃酮平均提取得率為2.56%，比預(yù)測(cè)結(jié)果低，可能原因是所用提取原料粉末細(xì)粉分布不均，而兩者的黃酮含量有所不同，或?qū)嶒?yàn)過(guò)程中操作誤差造成提取得率有所不同。但所得實(shí)際提取得率與預(yù)測(cè)值相差不大，因此可以看出通過(guò)響應(yīng)面方法優(yōu)化的提取條件符合實(shí)際，具有實(shí)用價(jià)值。</p><p>　　表4-7 最優(yōu)提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

59、結(jié)果</p><p><b>　　4.5 純化結(jié)果</b></p><p>　　4.5.1 靜態(tài)吸附</p><p>　　從圖（4-14）可以看出，含有型號(hào)為DA201和NKA-9的大孔樹(shù)脂的樣品液吸光值最低，表明該兩種大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附效果較好。</p><p>　　圖4-14 各型號(hào)樹(shù)脂靜態(tài)吸附概況</p>

60、;<p>　　4.5.2 靜態(tài)解析</p><p>　　圖（4-15）表明，靜態(tài)解析中附著在型號(hào)為DA201和NKA-9大孔樹(shù)脂上的黃酮成分較多，綜合靜態(tài)吸附與解析的數(shù)據(jù)，可以看出型號(hào)為DA201和NKA-9的大孔樹(shù)脂較適合穿破石中黃酮成分的純化。</p><p>　　圖4-15 各型號(hào)樹(shù)脂靜態(tài)解析概況</p><p>　　4.5.3 動(dòng)態(tài)吸附與解析&

61、lt;/p><p>　　由表（4-16）可得，在動(dòng)態(tài)吸附中，用型號(hào)為NKA-9的大孔樹(shù)脂，所得的濾液吸光值小，濾液中黃酮成分少，說(shuō)明該型號(hào)樹(shù)脂的吸附效果較佳。</p><p>　　表4-16 各型號(hào)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附數(shù)據(jù)</p><p>　　由表（4-17）可得，NKA-9大孔樹(shù)脂的解析效果更好，綜合所述，型號(hào)NKA-9的大孔樹(shù)脂對(duì)穿破石中黃酮的純化效果更佳。</p&g

62、t;<p>　　表4-17 各型號(hào)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)解析數(shù)據(jù)</p><p>　　4.6 抗氧化性研究</p><p>　　4.6.1 羥基自由基清除率的測(cè)定</p><p>　　由圖(4-18)可以看出，隨著穿破石黃酮溶液濃度由0.1mg﹒mL-1增加到0.4mg﹒mL-1的過(guò)程中，清除率也在逐漸升高，且隨著其濃度越濃，清除效果增加得緩慢，最高時(shí)達(dá)到88.64

63、%，略低于相同濃度的Vc（98.87%）。表明穿破石黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化能力。</p><p>　　圖4-18 Vc與黃酮清除率對(duì)比</p><p>　　4.6.2 DPPH自由基的抑制</p><p>　　由圖(4-19)可以看出，隨著穿破石黃酮溶液濃度由0.1mg﹒mL-1增加到0.5mg﹒mL-1的過(guò)程中，DPPH自由基抑制率也在逐漸升高，且隨著其濃度越濃，抑

64、制效果增加得緩慢，最高時(shí)達(dá)到98.41%。表明穿破石黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化能力。</p><p>　　圖4-19 DPPH自由基的抑制率</p><p><b>　　5 討論</b></p><p>　　本次試驗(yàn)所采用材料穿破石在預(yù)處理時(shí)做過(guò)除去了脂肪及色素等雜質(zhì)的試驗(yàn)，有文獻(xiàn)做法是將樣品用石油醚進(jìn)行脫脂[26-27]，該方法雖然也達(dá)到脫脂目的，

65、但操作繁瑣，且有所損失，在實(shí)驗(yàn)前已通過(guò)比較脫脂后與沒(méi)經(jīng)脫脂的穿破石，發(fā)現(xiàn)其提取得率沒(méi)有顯著變化。因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)所有材料直接提取，操作簡(jiǎn)便,避免損失。</p><p>　　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線是實(shí)驗(yàn)中關(guān)鍵的一步，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定樣品液在510nm波長(zhǎng)下的吸光度，代入由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的回歸方程：y=11.409x-0.001，測(cè)其黃酮含量，其相關(guān)系數(shù)R2值達(dá)到0.9997，說(shuō)明其吸光度呈良好的線性關(guān)系。實(shí)驗(yàn)中所采用的標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁，在

66、光的作用下漸變暗，長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，含量會(huì)有所降低，因此在操作過(guò)程中盡量避光，減少暴露在空氣中的時(shí)間，把配制好的標(biāo)準(zhǔn)液置于棕色容量瓶中密封保存[28]。</p><p>　　在提取工藝優(yōu)化部分，采用了響應(yīng)面法(Response Surface Methodology,簡(jiǎn)稱(chēng):RSM)。響應(yīng)面法的基本思想是通過(guò)近似構(gòu)造一個(gè)具有明確表達(dá)形式的多項(xiàng)式來(lái)表達(dá)隱式功能函數(shù)。本質(zhì)上來(lái)說(shuō)，響應(yīng)面法是一套統(tǒng)計(jì)方法，用這種方法來(lái)尋

67、找考慮了輸入變量值的變異或不確定性之后的最佳響應(yīng)值[29-30]。因此，本實(shí)驗(yàn)以單因素試驗(yàn)作為基礎(chǔ)，使建立模型更容易適用于分析與預(yù)測(cè)提取工藝研究。影響穿破石黃酮提取得率的因素很多，本實(shí)驗(yàn)選擇提取時(shí)間，提取液濃度，料液比做研究，擴(kuò)大每個(gè)因素的各級(jí)水平，得到接近最優(yōu)提取條件的水平因子——提取時(shí)間：30min；提取溶劑乙醇濃度：70%；料液比：1∶15。</p><p>　　由響應(yīng)面分析結(jié)果可以看出，以上三個(gè)因素各梯級(jí)

68、分化較為明顯，最終得到的最佳條件的提取結(jié)果較為突出。</p><p>　　提高穿破石黃酮的純度，利于研究其生理活性，本實(shí)驗(yàn)采用大孔樹(shù)脂純化的方法進(jìn)行穿破石黃酮純化。吸附率和解析率是判斷大孔樹(shù)脂純化效果的兩個(gè)重要指標(biāo)，需綜合考慮，而選擇適宜純化穿破石黃酮的樹(shù)脂類(lèi)型是純化的關(guān)鍵[31-32]。靜態(tài)選型實(shí)驗(yàn)是利用少量大孔樹(shù)脂通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的浸泡和攪拌充分吸附樣品液中黃酮成分，再進(jìn)行解析，大孔樹(shù)脂及樣品液用量少，操作方便，可

69、以說(shuō)是一個(gè)小型的純化模型，由靜態(tài)選型實(shí)驗(yàn)計(jì)算出來(lái)的吸附率和解析率來(lái)進(jìn)行選型。但靜態(tài)選型實(shí)驗(yàn)由于需要對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間攪拌，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或轉(zhuǎn)速過(guò)快可能造成部分樹(shù)脂破碎而減少吸附量，造成較大誤差，因此造成解析率均較低。為進(jìn)一步驗(yàn)證靜態(tài)選型結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)又進(jìn)行了動(dòng)態(tài)選型實(shí)驗(yàn)，動(dòng)態(tài)選型是將適量大孔樹(shù)脂裝柱，以純化的方法進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附和解析，既減少了損失，又更加直觀的看出大孔樹(shù)脂型號(hào)是否適合穿破石黃酮的純化，還能初步預(yù)計(jì)純化效果。通過(guò)動(dòng)態(tài)選型結(jié)果可以

70、看出，NKA-9型樹(shù)脂的吸附率和解析率相對(duì)其他型號(hào)樹(shù)脂都偏高，這個(gè)結(jié)果與靜態(tài)選型結(jié)果基本一致，因此可以選擇NKA-9樹(shù)脂為最適型號(hào)。</p><p>　　抗氧化能力是黃酮生物活性研究的重點(diǎn)，研究黃酮抗氧化能力的方法有還原能力考察實(shí)驗(yàn)、清除超氧自由基試驗(yàn)、清除DPPH自由基試驗(yàn)、豬油抗氧化能力實(shí)驗(yàn)等[33]。本文主要通過(guò)清除羥自由基和清除DPPH自由基試驗(yàn)研究其生物活性。由考察結(jié)果可以看出，穿破石黃酮具有較好的抗氧

71、化性，對(duì)其以后的運(yùn)用提供科學(xué)依據(jù)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 楊增艷,滕紅麗.穿破石總黃酮對(duì)兩種肝纖維化模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J].四川中醫(yī),2009,27(7):30-31.</p><p>　　[2] 黃燮才.實(shí)用中草藥原色圖譜[M].南寧.廣西科學(xué)技術(shù)出版社,1999.</p>

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83、佳敏等.響應(yīng)面法和正交試驗(yàn)對(duì)骨素酶解工藝優(yōu)化的比較[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā):分離提取,2012,33(7):53-56.</p><p>　　[31] 嚴(yán)志慧,陳亮,羅軍武,等.聚酰胺樹(shù)脂分離純化芹菜黃酮的工藝研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,(1):85-88.</p><p>　　[32] 于智峰,王敏.大孔吸附樹(shù)脂在黃酮類(lèi)化合物分離中的應(yīng)用[J].中藥材.2006. 29(12):

84、1380-1382.</p><p>　　[33] 趙麗戀,劉韶,羅杰英.大孔吸附樹(shù)脂-超聲波輔助解吸附法純化淫羊藿中的總黃酮[J].China Journal of Cinese Material Medica.2009.34.(06):702-704.</p><p><b>　　綜述</b></p><p>　　中藥黃酮的研究與發(fā)展<

85、;/p><p>　　近年來(lái)，隨著氧自由基與疾病關(guān)系深入研究，人們對(duì)抗氧化劑關(guān)注也不斷增加。在大部分的中藥的藥效成分中，黃酮類(lèi)物質(zhì)占有重要地位。黃酮作為一類(lèi)天然大分子化合物廣泛存在于中藥植物體內(nèi),并在制革、化工、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品、材料等領(lǐng)域得到了很好的應(yīng)用。在崇尚環(huán)保、提倡綠色科學(xué)的今天,植物黃酮的研究取得了許大進(jìn)展。隨著對(duì)天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)利用的重新興起,黃酮再次成為研究的熱點(diǎn)[1]。黃酮化學(xué)的發(fā)展拓寬了這類(lèi)天然產(chǎn)物的應(yīng)用

86、領(lǐng)域,加深了利用深度。在今后的藥物研發(fā)與利用方面，黃酮類(lèi)物質(zhì)備受關(guān)注[2-3]。本文將針對(duì)中藥中黃酮的研究現(xiàn)狀作包括其簡(jiǎn)單介紹、生物活性、提取方法、分離純化和發(fā)展方向方法等進(jìn)行描述和思考，展望其發(fā)展和利用，為今后相關(guān)研究提供參考。</p><p><b>　　1 中藥黃酮類(lèi)簡(jiǎn)介</b></p><p>　　黃酮類(lèi)化合物是自然界中存在的多元酚類(lèi)物質(zhì),也是自然界藥用植物中

87、的主要活性成分之一。它是指具有15個(gè)碳原子并以C6-C3-C6的方式構(gòu)成的三環(huán)天然有機(jī)物，是植物在長(zhǎng)期自然選擇中產(chǎn)生的二級(jí)代謝產(chǎn)物,現(xiàn)在已分離鑒定的有四千多種[4]。它廣泛存在于果蔬、中草藥中,無(wú)毒副作用,它具有顯著的清除人體內(nèi)自由基、抗老化、抗突變、調(diào)血脂、降血壓等藥理保健功能,是一類(lèi)極具開(kāi)發(fā)前景的天然有機(jī)抗氧化劑[5]。這些抗氧化活性物質(zhì)可以減少和清除人體中的自由基,具有延緩人體衰老、預(yù)防疾病的作用[6]。1.1 黃酮類(lèi)結(jié)構(gòu)與分類(lèi)

88、</p><p>　　黃酮類(lèi)化合物廣泛存在于自然界,大部分以結(jié)合態(tài)形式存在,也有以游離態(tài)的形式存在。酮類(lèi)化合物的分子結(jié)構(gòu)主要是以C6-C3-C6為基本母核的天然化合物,其中兩個(gè)苯環(huán)中間由3個(gè)碳原子相連接,在這個(gè)碳架的母核上可以有許多種不同的結(jié)合方式,如可含有輕基、甲氧基、烴氧基、異戊稀氧基等取代基[7]。黃酮類(lèi)化合物是大部分植物都含有的一類(lèi)化合物,它可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)以及開(kāi)花結(jié)果,能夠幫助植物預(yù)防外界各種病菌的侵

89、染,因此在絕大多數(shù)的植物體中都能發(fā)現(xiàn)黃酮類(lèi)化合物的存在。其中，黃酮的各種功效更被人們合理運(yùn)用，如中草藥中大部分起藥用作用的成分為黃酮類(lèi)化合物。</p><p>　　根據(jù)黃酮類(lèi)化合物分子結(jié)構(gòu)中中央母核三碳鏈(C3)結(jié)構(gòu)的氧化程度、2-或者3-位的連接位置、其中的三碳鏈?zhǔn)欠裥纬森h(huán)狀等特點(diǎn),天然的黃酮類(lèi)化合物的種類(lèi)也有各種各樣,主要可分為下列幾類(lèi):黃酮類(lèi)；黃酮醇；二氧黃酮類(lèi)(又稱(chēng)黃烷酮)；黃烷酮醇(又稱(chēng)二氫黃酮醇類(lèi))；

90、異黃酮；二氫異黃酮(又稱(chēng)異黃烷酮)；查耳酮；二氫查耳酮；橙酮類(lèi)；雙苯吡酮類(lèi)；白花色苷元；花色素類(lèi)等15種[8]。黃酮類(lèi)化合物的分類(lèi)主要取決于其自身A、B兩個(gè)苯環(huán)上取代基的種類(lèi)和結(jié)構(gòu),常見(jiàn)的取代基有羥基、甲氧基、異戊稀基和烷氧基等。</p><p>　　1.2 中藥黃酮功效</p><p>　　到目前為止，在黃酮類(lèi)化合物的眾多生理活性中，研究比較多的是其抗氧化性質(zhì),它可以減少自由基形成和清除

91、自由基，可作為抗氧化劑、抗菌劑、感光器、外觀引誘劑等存在，阻止細(xì)胞的退化、衰老以及癌癥的發(fā)生[9]，可改善血液循環(huán)，降低膽固醇，大大降低心腦血管疾病的發(fā)病率[10]。</p><p>　　1.2.1 心血管系統(tǒng)的生物活性作用</p><p>　　自然界中的黃酮類(lèi)化合物能夠?qū)π难芟到y(tǒng)產(chǎn)生多種多樣的作用，近年來(lái)大量研究報(bào)道表明從植物中提取的黃酮類(lèi)化合物能夠抑制二磷酸腺苷、花生四稀酸、血小板活

92、化因子等血小板聚集誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的血小板聚集，調(diào)節(jié)毛細(xì)血管的脆性和滲透率，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈的血流量進(jìn)而改善血液循環(huán)，從而起到調(diào)節(jié)心腦血管的作用[11-14]。</p><p>　　1.2.2 抗菌及抗病毒的作用</p><p>　　黃酮類(lèi)化合物如木犀草素、二氫槲皮素、黃軍素、槲皮素、桑色素、黃芩苷、山柰酚等，會(huì)破壞微生物的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性，從而妨礙細(xì)胞內(nèi)成分的釋放而引起膜的電子

93、傳遞、營(yíng)養(yǎng)吸收、核苷酸合成及酶的活性,進(jìn)而破壞微生物的生長(zhǎng)和繁殖[15]。研究證明黃酮類(lèi)化合物能夠?qū)Σ【筒《酒鸬揭欢ǖ囊种谱饔茫@些病菌有枯草桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌等,有些黃酮類(lèi)還對(duì)黑曲霉、青霉也有一些抑制作用[16-17]。</p><p>　　1.2.3 增強(qiáng)免疫力以及消炎作用</p><p>　　自然界中的黃酮類(lèi)化合物還能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，并有一定的消炎作用。劉

94、爽等[18]對(duì)廣事中的總黃酮進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)廣零的總黃酮可以有效抑制CVB3病毒引起的細(xì)胞病變數(shù)，對(duì)病毒繁殖及細(xì)胞調(diào)亡有抑制作用。郭姍姍等[19]對(duì)半枝蓮總黃酮進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其可以通過(guò)改善細(xì)胞膜流動(dòng)性來(lái)維持細(xì)胞膜的正常功能，抵抗流感病毒的感染。有一些研究表明，黃酮類(lèi)化合物有比較好的抑制各類(lèi)炎癥的作用，從而起到化痰消熱的醫(yī)療功效[20]。</p><p>　　1.2.4 抗腫瘤活性</p><p&

95、gt;　　大量實(shí)驗(yàn)研究表明，攝取適量的黃酮類(lèi)物質(zhì)可以降低癌癥的發(fā)病率。它主要是通過(guò)阻滯癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡，抑制蛋白激酶活性，抑制信號(hào)傳導(dǎo)等途徑發(fā)揮抗癌效應(yīng)。許多黃酮類(lèi)物質(zhì)都具有一定的抗腫瘤活性的功效，只是不同種類(lèi)的黃酮類(lèi)化合物因其自身分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，它所表現(xiàn)的抗腫瘤活性的途徑也有所差異。且它的抗腫瘤機(jī)制也是比較復(fù)雜多樣的，包括干擾細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)繁殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡等[21]。</p>&l

96、t;p>　　1.2.5 抗氧化的作用</p><p>　　在健康的個(gè)體內(nèi)存在著自然地抗氧化防御系統(tǒng)和活性氧的平衡，它們產(chǎn)生于活著的生物體。當(dāng)這種平衡被破壞時(shí)活性氧會(huì)對(duì)各種各樣的生物分子包括人體中的蛋白質(zhì)、脂肪、DNA和RNA等產(chǎn)生抗氧化損傷[22]，細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷、組織損傷或基因突變等[23]。其中引發(fā)這種氧化損傷被認(rèn)為在衰老和幾種退化性疾病如心臟病、高血壓、認(rèn)知功能障礙和癌癥等起了很關(guān)鍵的作用。Jun Li

97、u等[24]對(duì)玉米絲中黃酮及其衍生物進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化的作用。</p><p>　　1.2.6 雌激素樣與抗雌激素樣作用 </p><p>　　更年期婦女雌激素缺乏會(huì)導(dǎo)致許多不適癥狀，如面部赤紅，骨密度降低，心血管疾病增多等。黃酮類(lèi)化合物作為弱植物雌激素，可與雌激素受體結(jié)合，雙向調(diào)節(jié)。現(xiàn)在的保健品市場(chǎng)已經(jīng)開(kāi)始涌現(xiàn)出一大批異黃酮類(lèi)的保健品，用于婦女更年期的調(diào)節(jié)。</p>

98、<p><b>　　2 中藥黃酮提取</b></p><p><b>　　2.1 溶劑提取法</b></p><p><b>　　2.1.1 水提法</b></p><p>　　熱水僅限于提取甙，如蘆丁的提取。由于熱水浸提時(shí)易溶于水的雜質(zhì)多，消耗時(shí)間長(zhǎng)，后處理較復(fù)雜，提取效率也不高，故不常使

99、用[25]。</p><p>　　2.1.2 有機(jī)溶劑提取法</p><p>　　黃酮類(lèi)化合物的提取，主要是根據(jù)被提取物的性質(zhì)及伴隨的雜質(zhì)來(lái)選擇適合的提取溶劑，甙類(lèi)和極性較大的甙元，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些極性較大的混合溶劑進(jìn)行提取。大多的甙元宜用極性較小的溶劑，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等來(lái)提取，多甲氧基黃酮類(lèi)甙元，甚至可用苯來(lái)提取[26]。乙醇和甲醇是最常用的黃酮類(lèi)化合

100、物提取溶劑，高濃度的醇(如90%～95%)宜于提取甙元，60%左右濃度的乙醇或甲醇水溶液適宜于提取甙類(lèi)物質(zhì)[27]。提取過(guò)程中常用冷浸法或回流法，提取次數(shù)一般為2～4次。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。前者無(wú)需加熱,有利于保持提取物的成分，但提取時(shí)間長(zhǎng)，效率低；后者效率高，但需加熱,因此成分不穩(wěn)定的原料(如含易揮發(fā)、加熱變性等成分)不宜用此法[28]。一般來(lái)說(shuō)，醇提法的對(duì)總黃酮的提取效果要好于水提法。本實(shí)驗(yàn)用乙醇提取，效果比熱水提取的效果要好，乙醇

101、提取率比熱水的相對(duì)要高。</p><p>　　2.1.3 堿溶酸沉法</p><p>　　由于黃酮類(lèi)成分大多具有酚輕基,具有易溶于堿性水而難溶于酸性水的性質(zhì),可用堿性水(如碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣水溶液)或堿性稀醇(如50%乙醇)浸出,在提取液中,加酸酸化,黃酮類(lèi)化合物即可沉淀析出[29]。常用飽和石灰水溶液、稀氫氧化鈉溶液或5%碳酸鈉水溶液提取。氫氧化鈉水溶液的浸出能力高,但雜質(zhì)較多不

102、利于純化；石灰水可以使一些鞣質(zhì)或水溶性雜質(zhì)沉淀生成鈣鹽沉淀,有利于浸液純化,但是浸出效果不如氫氧化鈉水溶液效果好,同時(shí)有些黃酮類(lèi)化合物能與鈣結(jié)合成不溶性物質(zhì),不被溶出[30]。堿溶酸沉法在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用較廣泛,具有經(jīng)濟(jì)、安全、方便等優(yōu)點(diǎn)。</p><p><b>　　2.2 微波提取法</b></p><p>　　微波輔助萃取法是在傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑提取法基礎(chǔ)上發(fā)展的一種

103、新型提取方法，其原理是利用高頻電磁波穿透萃取物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂，細(xì)胞內(nèi)有效成分溢出。微波輔助萃取法是提取中草藥有效成分和去除農(nóng)藥殘留的有效手段之一，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益[31-32]。微波提取技術(shù)的研究表明，微波技術(shù)應(yīng)用與天然產(chǎn)物的提取具有選擇性高、操作時(shí)間短、溶劑耗量少、有效成分得率高的特點(diǎn)[33]。浸出過(guò)程中材料細(xì)粉不凝聚、不糊化，克服了熱水提取法易凝聚、易糊化的缺點(diǎn)。</p><p>　　2.3 超聲波提取

104、法</p><p>　　超聲波提取黃酮類(lèi)物質(zhì),是目前比較新的方法。超聲提取原理是利用超聲波在液體中產(chǎn)生“空穴作用”,破壞植物細(xì)胞和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而增加細(xì)胞內(nèi)容物通過(guò)細(xì)胞膜的穿透能力，有助于黃酮類(lèi)化合物的釋放與溶出。超聲波使提取液不斷震蕩，有助于溶質(zhì)擴(kuò)散，同時(shí)超聲波的熱效應(yīng)使水溫基本在70℃以下，對(duì)原料有水浴作用，縮短了提取時(shí)間，提高了有效成分的提出率和原料的利用率[34-35]。超聲波提取操作簡(jiǎn)便快捷、無(wú)需加熱、

105、提出率高、速度快、提取物的結(jié)構(gòu)未被破壞、效果好，顯示出明顯的優(yōu)勢(shì)。</p><p><b>　　2.4 酶解法</b></p><p>　　對(duì)于一些黃酮類(lèi)化合物被細(xì)胞壁包圍不易提取的原料，傳統(tǒng)的熱水、堿、有機(jī)溶劑提取法，受細(xì)胞壁主要成分纖維素的阻礙，往往提取效率較低。恰當(dāng)?shù)乩妹柑幚磉@些植物材料，可改變細(xì)胞壁的通透性，提高有效成分的提取率[36]。根據(jù)傳質(zhì)理論,溶劑向

106、固體表面擴(kuò)散，滲透固體表面，進(jìn)入固體內(nèi)部及固體內(nèi)部微孔隙內(nèi)，溶解黃酮類(lèi)化合物，通過(guò)固體微孔隙向固體表面擴(kuò)散,在表面與溶劑主體間，由于濃度差作用力，黃酮類(lèi)化合物向溶劑主體擴(kuò)散，完成提取傳質(zhì)過(guò)程[37]。采用酶解法卻能使細(xì)胞壁疏松、破裂,減小傳質(zhì)阻力，從而提高提取效率，與傳統(tǒng)的乙醇提取工藝相比，提取物得率提高。</p><p>　　2.5 超臨界流體萃取法</p><p>　　超臨界流體萃取是

107、指利用超臨界流體作為萃取劑，從液體和固體中萃取出特定成分，以達(dá)到分離的目的。它具有傳質(zhì)速度快、溶解能力強(qiáng)、低溫操作、節(jié)能等優(yōu)點(diǎn)，引起國(guó)內(nèi)外有關(guān)專(zhuān)家及學(xué)者的普遍關(guān)注，特別是用該技術(shù)提取天然產(chǎn)物有效成分成為人們研究的熱點(diǎn)[38]。超臨界流體有近液體的溶解力，有氣體那樣向固體和高粘度物質(zhì)較強(qiáng)的滲透性，且超臨界流體的密度當(dāng)溫度或壓力有微小變化時(shí)，它能有較大的變化，這樣超臨界流體提取，就是依據(jù)它的這個(gè)特性，利用密度的變化對(duì)物質(zhì)溶解力的差異，實(shí)現(xiàn)分

108、離混合物的[39]。一般多采用CO2為超臨界溶劑，CO2具有性質(zhì)穩(wěn)定、無(wú)毒、且不燃不爆、臨界壓力不高、操作溫度低、價(jià)廉易得等特點(diǎn)[40]。超臨界CO2是非極性溶劑，對(duì)非極性和分子量很低的極性物質(zhì)表現(xiàn)出很好的溶解性，但對(duì)極性較強(qiáng)的物質(zhì)溶解能力不足，雖然增大密度能使其溶解能力提高，但增大密度需提高萃取壓力，這將使萃取設(shè)備的費(fèi)用顯著增加，不適于大規(guī)模生產(chǎn)[41]。因此在實(shí)際操作中，常常在超臨界CO2中加入另一種物質(zhì)以改變其極性。如對(duì)桑葚籽中總

109、黃酮物質(zhì)進(jìn)行CO2超臨界流體萃取，夾帶劑料液比為1:4，萃取壓力30MPa，萃取溫度50℃，CO2流量2</p><p>　　2.6 半仿生提取法</p><p>　　半仿生提取法是近幾年提出的新方法。它是從生物藥劑學(xué)的角度,將整體藥物研究法與分子藥物研究法相結(jié)合，模擬口服藥物經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)吸收的環(huán)境，采用活性指導(dǎo)下的導(dǎo)向分離方法，具有有效成分損失少、成本低、生產(chǎn)周期短的特點(diǎn)[43]。如對(duì)香