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文檔簡介
1、<p><b> 本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b> 開題報告</b></p><p><b> 水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p> 條石鯛發(fā)育早期脂肪酸組成研究</p><p> 一、選題的背景與意義</p><p>
2、; 條石鯛(Oplegnathus fasciatus,T.&S.),俗稱日本鸚鵡魚,隸屬于鱸型目(Perciformes),石鯛科(Oplegnathidae),石鯛屬,主要分布于我國的黃海、東海,日本的北海道以南等海[1]。條石鯛體態(tài)優(yōu)美、色澤艷麗、肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)價值高,是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價值的海產(chǎn)魚類[2]。條石鯛皮下含有豐富的膠質(zhì),口感獨特,深受消費者的青睞;其幼魚體態(tài)優(yōu)美、色澤鮮艷、條紋美麗,具有較高的觀賞價值。在北
3、方,可采用海上網(wǎng)箱、池塘與室內(nèi)相結(jié)合的養(yǎng)殖模式,南方可以在海上進(jìn)行網(wǎng)箱養(yǎng)殖[3]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,條石鯛在營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)價值上的重要性也日益凸顯。</p><p> 人體不能自身合成多不飽和脂肪酸,合理的脂肪酸攝入對身體健康極為重要。n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA) 中,有代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等[4]。EPA和DHA主要來源于海洋生物或深海魚類,是
4、生理作用最重要的n-3族脂肪酸[5],對人體而言,具有降血壓、抗血栓、預(yù)防心血管疾病及抗腫瘤等多種重要的生理功能,在降低血脂、降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[6]。研究證實DHA能直接影響人大腦功能,同時對多種疾病如動脈粥樣化具有預(yù)防和治療功能[7]。同樣,EPA對體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用[8]。</p><p> 在能夠提供脂肪酸的營養(yǎng)源中,海洋生物和深海魚類富含多不飽和脂肪酸,尤其是
5、EPA和DHA含量比淡水魚高出許多[9]。通過研究比較海水魚類各發(fā)育階段的脂肪酸組成與變化,可以闡明該魚在不同生長時期的脂肪酸需求,也可為人工飼料的科學(xué)配方提供理論支持。</p><p> 目前對各種海淡水魚類的脂肪酸研究眾多,但對條石鯛的脂肪酸組成研究方面少有人涉及。本課題擬通過分析條石鯛卵巢、受精卵、稚魚、幼魚以及成魚體內(nèi)的脂肪酸種類、組成以及含量變化規(guī)律,來探明條石鯛生長過程中脂肪酸的積累、轉(zhuǎn)化和利用情況
6、。這對評價條石鯛不同發(fā)育階段的營養(yǎng)狀況有重要參考價值,也可為養(yǎng)殖條石鯛仔魚開口餌料的配制提供理論指導(dǎo)。</p><p> 二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題:</p><p><b> ?。ㄒ唬┗緝?nèi)容:</b></p><p> 1. 條石鯛不同發(fā)育階段總脂的測定;</p><p> 2. 條石鯛生長周期中各階
7、段脂肪酸組成特色和規(guī)律分析;</p><p> 3. 綜合分析不同發(fā)育階段脂肪酸的組成以及變化規(guī)律與生長環(huán)境和營養(yǎng)需求的關(guān)系。</p><p> (二)擬解決的主要問題:</p><p> 1. 關(guān)注條石鯛的特定脂肪酸,是否有某類脂肪酸在每個階段皆出現(xiàn);</p><p> 2. 鑒別先天擁有和后天獲得的脂肪酸種類。</p>
8、<p> 3. 早期發(fā)育時缺少的脂肪酸類型,幼魚階段缺少的種類及其與餌料的關(guān)系;</p><p> 三、研究的方法與技術(shù)路線:</p><p><b> ?。ㄒ唬┭芯糠椒ǎ?lt;/b></p><p> 1.Bligh-Dyer法:</p><p> 取1g魚粉樣品(干樣),加氯仿和甲醇各2mL,研磨后
9、加入離心管(10mL)。用2mL氯仿沖洗研缽兩次,沖洗液一并加入離心管。再加入3 5mL蒸餾水,搖動離心管使之充分混合,以2000r/min離心5min,</p><p> 分層后取氯仿層轉(zhuǎn)入30mL帶蓋試管中,用氮氣吹干。</p><p> 2.GC/MS分析:</p><p> GC條件:進(jìn)樣口溫度250℃,載氣為純度為99.999%的高純氦,柱流速0.8
10、1 ml/min,柱前壓73.0 KPa,柱起始溫度150 ℃,保持3.5 min,以20 ℃/min升至200 ℃,再以5 ℃/min升至280 ℃,保持37 min。分流進(jìn)樣1μl,分流比50:1;</p><p> MS條件:離子源選用電子轟擊(electron impact, EI)源,電子能量為70 eV,離子源溫度200 ℃,接口溫度250 ℃,選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式,質(zhì)量掃描范圍為4
11、0~600,溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離(Chemical Ionization,CI)源分析時,反應(yīng)氣為甲烷。</p><p><b> (二)技術(shù)路線:</b></p><p> 研究的總體安排與進(jìn)度:</p><p> 2010.1-2010.2 畢業(yè)論文選題</p><p> 2010.2-2010
12、.3 進(jìn)行文獻(xiàn)查閱和資料收集,制定具體研究計劃和試驗方案</p><p> 2010.1-2010.4完成開題報告,修訂實驗方案</p><p> 2010.4-2010.5 文獻(xiàn)綜述與開題答辯</p><p> 2010.6-2010.10 進(jìn)行實驗,數(shù)據(jù)整理、結(jié)果分析</p><p> 2010.12-2011.2 完成2篇外文翻
13、譯,論文初稿撰寫</p><p> 2011.3-2011.4 按指導(dǎo)教師的意見,反復(fù)修改論文,提交并答辯</p><p><b> 五、主要參考文獻(xiàn):</b></p><p> [1] 朱元鼎,福建魚類志(下卷)[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社,1985,254-255</p><p> [2] 武云飛,門強(qiáng)
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15、; [5] 劉洪祥.食品保健精致魚油開發(fā)[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1993,5(3):71-78.</p><p> [6] 陳麗花,肖作兵,周培根.中國對蝦的脂肪酸分析及其營養(yǎng)價值評價[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報,2010,19(1): 125-129</p><p> [7] Yzebe D,Lievre.Fish oils in the care of coronary hear
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19、t;<p> [12] 謝小軍,鄧?yán)?饑餓對魚類生理生態(tài)學(xué)影響的研究進(jìn)展[J].水生生物學(xué)報,1998,22(2):181-188.</p><p> [13] 劉鏡恪,陳曉琳.海水仔稚魚的必需脂肪酸——n-3系列高度不飽和脂肪酸研究概況[J]. 青島海洋大學(xué)學(xué)報, 2002,32(6):897-902</p><p> [14] 劉鏡恪,周利,雷霽霖.海水仔稚魚脂類營
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21、siol, 1994,107A:693—698</p><p> [16] 劉鏡恪.海魚早期階段必需脂肪酸和磷脂的研究現(xiàn)狀與展望[J].海洋水產(chǎn)研究,2002,23(2):58-63[17] Rainuzzo J R,Reitan K I,Olsen Y. The significance of lipids at early stages of marine fish:a review[J]. Aquacu
22、lture,1997,155:103-115</p><p> [18] 黃磊,詹勇,許梓榮.餌料中高不飽和脂肪酸在海水魚苗培育中的作用[J].齊魯漁業(yè),2003,20(12):10-13</p><p> [19] 童圣英,姜宏,陳煒.不同培養(yǎng)條件下蒙古裸腹脂肪酸組成比較[J].中國水產(chǎn)科學(xué),1998,5(3):58-63.</p><p> [20] 徐秀
23、蘭,蔣企洲,胡磊軍,伊靜.鹵蟲中蛋白質(zhì)和脂肪酸組成的研究[J].中國生化藥物雜志,1997, 18(6): 289-291</p><p> [21] 王勝,劉永堅,田麗霞,等.斜帶石斑仔魚不同餌料的營養(yǎng)分析及其對生長和魚體脂肪酸組成的影響[J].中山大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2003,42(2):210-213)</p><p> [22] 王大志,彭興躍,李少菁,程兆第.海水小球藻
24、脂肪酸組成研究[J].海洋科學(xué),1999,4:68-70</p><p> [23] 張利民,常建波,等.n-3多價不飽和脂肪酸營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲技術(shù)研究[J].水產(chǎn)學(xué)報,1997,21(4):415-421</p><p> [24] 鄭樂云.不同餌料對點帶石斑魚幼魚生長、存活的影響[J].臺灣海峽,2004,23(3):341-346</p><p> [25]
25、 龔小玲,蘇錦祥,段曉英,姜秀鳳.不同餌料培養(yǎng)的輪蟲對假睛東方仔魚脂肪酸的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué), 1999, 6(3):119-122</p><p> [26] 周光正. 餌料對培養(yǎng)輪蟲(Brachionus plicatilis)脂肪酸組成的影響[J]. 海洋科學(xué),1996,5,27-28</p><p> [27] 邱小琮, 等. 營養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲、鹵蟲對牙鲆仔魚的成活、生長及
26、體脂肪酸組成的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2004,23(2):4-8</p><p> [28] 王丹麗,徐善良,嚴(yán)小軍,等.大黃魚仔、稚、幼魚發(fā)育階段的脂肪酸組成及其變化[J].水產(chǎn)學(xué)報,2006,30(2): 241-245.</p><p> [29] 薄海波,王霞.堿催化法衍生化氣相色譜/質(zhì)譜法分析青海湖裸鯉魚油中脂肪酸[J].色譜,2006, 21(2):181- 184.&
27、lt;/p><p> [30] Tocher D R,Sargent J R.Analyses of lipids and fatty acids in ripe roes of some Northwest European fish[J].Lipids, 1984,19:492—499</p><p> [31] 周光正,王遠(yuǎn)隆,王淑君.海水仔稚魚對于n-3高度不飽和脂肪酸需求量的研究
28、現(xiàn)狀[J].海洋湖沼通報,1996(3):72~75.</p><p> [32] 馬愛軍,雷霽霖,陳四清,張秀梅,陳大剛.大菱鲆產(chǎn)卵季節(jié)對卵子的生物學(xué)及生化特征的影響[J].海洋與湖沼, 2002,33(1),75-80</p><p> [33] 楊文鴿.馬面鲀卵巢中磷脂成分與脂肪酸的分析[J].寧波大學(xué)學(xué)報理工版,2000,13(1):53-56</p><p
29、> [34] 王維群.營養(yǎng)學(xué)[M].北京:高等教育出版社, 2005: 76-258.</p><p><b> 畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b> 水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p> 海水魚類早期發(fā)育階段脂肪酸組成及需求概述</p><p> 摘要:海水魚類中富含人
30、體必須氨基酸、多聚不飽和脂肪酸以及其他礦物元素,研究海水魚類早期發(fā)育階段脂肪酸組成的變化,對評價其營養(yǎng)狀況有重要的參考價值,也可為養(yǎng)殖魚類仔魚開口餌料的配制提供參考。</p><p> 關(guān)鍵詞:海水魚;脂肪酸;餌料;早期發(fā)育</p><p> 1、研究脂肪酸的意義</p><p> 脂肪酸在生物體生命過程中具有重要的作用,它們是構(gòu)成人體脂肪和類脂的基本物質(zhì)[1
31、]。根據(jù)飽和度的不同,可分為飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)、多不飽和脂肪酸(PUFA),它們能夠滿足人體對亞油酸和亞麻酸等必需脂肪酸的需要、促進(jìn)脂溶性維生素的吸收與利用。其中,PUFA主要包括了n-3,n-6和n-9系列脂肪酸,有重要生物學(xué)意義的是n-3和n-9PUFA,尤其是n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA),其代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA) [2],二者是生理作用最重要的n
32、-3族不飽和脂肪酸[3],對人體而言,它們有助于降低血壓、血脂,預(yù)防心血管疾病,具有多種重要的生理功能,在抗血栓、抗腫瘤和降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[4]。人體不能自身合成多不飽和脂肪酸,這就使得對n-3族多不飽和脂肪酸的研究變得非常重要[5]。而在能夠提供脂肪酸的營養(yǎng)源中,海洋生物和深海魚類富含多不飽和脂肪酸,尤其是EPA和DHA含量比淡水魚高出許多[6]。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,海水魚類仔稚魚的攝食和營養(yǎng)研究已經(jīng)成為國內(nèi)外研
33、究的重點之一,研究其早期發(fā)育中脂肪酸的組成</p><p> 2、海水魚類脂肪酸研究概述</p><p> 2.1 海水魚類卵子脂肪酸成分概述</p><p> 眾多研究表明,海水魚類卵子的脂肪酸,尤其是n-3長鏈高度不飽和脂肪酸的含量至關(guān)重要。海水魚類必需的長鏈多不飽和脂肪酸(HUFA)有以下三種: n- 3 系列的二十二碳六烯酸( 22∶6 n- 3; D
34、HA) 和二十碳五烯酸( 20∶5 n- 3; EPA) , n-6 系列的花生四烯酸( 20∶4 n- 6; AA) 。已經(jīng)確定卵子及仔魚中高含量的n-3不飽和脂肪酸是成功發(fā)育所必需的,20∶4 (n-6)也被認(rèn)為有重要的作用,因為它在海水魚類生活史的早期組成了磷脂酰肌醇[7]。在海洋經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類大菱鲆中,n-3系列不飽和脂肪酸和20∶4 (n-6)在卵子成熟過程中含量顯著增高,可知其對于仔稚魚早期發(fā)育的重要性[8];而在對另一種養(yǎng)殖
35、魚類馬面鲀的研究中,可以看出其卵巢中含有豐富的長鏈多不飽和脂肪酸,尤其是EPA與DHA之和較高,在總脂達(dá)到14.50%,在磷酸脂肪酸中達(dá)到了20.48%[9]。</p><p> 海水魚類仔稚魚必需脂肪酸研究概述</p><p> 海水魚類的仔稚魚需要3種必需脂肪酸,即二十二碳六烯酸22∶6n-3 (DHA),二十碳五烯酸20∶5n-3 (EPA)和二十碳四烯酸20∶4n-6(AA).
36、已有的研究表明,正如哺乳動物一樣,海水魚類的神經(jīng)細(xì)胞膜和視覺細(xì)胞膜中含有豐富的DHA。缺乏DHA的鯡魚(Coregonus hoyi)幼魚,由于視力減弱,在光強(qiáng)較弱的條件下,捕捉食物的能力則會下降,神經(jīng)和視覺的發(fā)育不良[10]。相應(yīng)的,EPA也對海水魚類仔稚魚神經(jīng)系統(tǒng)的形成有一定影響。AA則是形成魚類磷脂酰肌醇(PI)的重要脂肪酸,雖然含量低,但也有促進(jìn)魚類生長的作用。AA在刺激蛋白酶過程中為第二信使,是合成類二十烷酸(如前列腺素、白細(xì)
37、胞三烯、血栓烷等)的前體,這些生物活性物質(zhì)具有重要的生理功能,影響生殖、消化和呼吸系統(tǒng),影響膜對離子的通透性及抑制脂質(zhì)分解等[11].</p><p> 研究表明,海水魚類對其體內(nèi)不同種類脂肪酸的利用存在先后次序,飽和脂肪酸最先被利用,然后是低不飽和脂肪酸,最后是高不飽和脂肪酸[12]。而海水魚類的仔稚魚比起成魚而言,需要更多的n-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)以滿足其生長和存活的需求。在相關(guān)的饑餓實驗中,
38、大菱鲆(Scophthalmus maximus)和金頭鯛(Sparus aurata)等魚類,體內(nèi)的飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸是首先被利用的重要能源,其余脂肪酸則按照其飽和度,也就是n-9系列,n-6系列,n-3系列的順序被先后利用。n-3系列中的DHA(22:6n-3)是最后被利用的[13]。</p><p> 在前人對處于發(fā)育期的仔魚進(jìn)行的饑餓實驗中,結(jié)果顯示,DHA是各極性脂中最優(yōu)先被保存下來的。被保存
39、下來的DHA在仔魚攝取外源營養(yǎng)后,又被重新吸收形成甘油磷脂中,從而參與生物膜構(gòu)建。除此之外,饑餓的海水魚類仔稚魚體內(nèi)的廿碳四烯酸,也會如DHA一般被優(yōu)先保存,這一點說明了n-6系列的高不飽和脂肪酸在仔稚魚發(fā)育中的重要作用[14]。</p><p> DHA和EPA對海水仔稚魚的生理作用不盡相同,作為必需脂肪酸的營養(yǎng)價值也有一定差異。研究表明,比起DHA和EPA在總脂中的含量,DHA與EPA的比值對于仔稚魚的生長
40、發(fā)育有著更為重要的意義。當(dāng)海水比目魚仔稚魚飼料中DHA∶EPA的比例約為2∶1時,仔稚魚的生長和成活率令人滿意[15];EPA與DHA比例從3.6∶1降低到0.8∶1時,金鯛仔魚的生長速度會進(jìn)一步提高[16]。多方面的研究表明,DHA作為仔稚魚的必需脂肪酸,比EPA更為重要。高含量的EPA會導(dǎo)致磷脂結(jié)構(gòu)組成不平衡,影響仔稚魚的正常生長[17].由于海水魚類仔稚魚自身無法合成DHA與EPA等多種脂肪酸,因此,通過飼喂餌料生物作為外源營養(yǎng)對
41、其體內(nèi)DHA與EPA的比例進(jìn)行調(diào)控,對于海水魚類的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖有著重要意義。</p><p> 餌料生物的選擇及強(qiáng)化</p><p> 輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體作為海水魚類仔稚魚的餌料,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于苗種生產(chǎn)。研究已證明,隨著餌料中高不飽和脂肪酸含量的提高,海水魚類仔稚魚體內(nèi)的脂肪酸組成會產(chǎn)生相應(yīng)變化,生長速度、存活率、抗逆能力和應(yīng)激抵抗能力會隨之提高,從而有利于提高幼體的存活率。因此,使餌料
42、中的高不飽和脂肪酸含量和比例適宜,在海水魚苗培育中具有重要作用[18]。</p><p> 但是,由于輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)缺乏DHA,EPA、AA和n-3族多不飽和脂肪酸含量又較低,因此投喂未經(jīng)營養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體不利于苗種的成活、生長以及抗病抗逆能力。生物的脂肪酸組成在很大程度上取決于生物本身的吸收和合成能力,裸腹溞和鹵蟲的幼體等其他甲殼類合成EPA的能力遠(yuǎn)高于輪蟲[19]。鹵蟲成體中不飽和脂肪酸較
43、飽和脂肪酸比例大得多,且長鏈多烯酸含量較高,其中較有價值的不飽和脂肪酸就包括EPA[20]。海水小球藻的脂肪中也含有較豐富的EPA約占總脂的20%~30%,但缺乏DHA[21-22]。因此,利用含有豐富DHA,EPA,AA,n-3族多不飽和脂肪酸等不飽和脂肪酸的強(qiáng)化劑對輪蟲等餌料生物進(jìn)行強(qiáng)化,是現(xiàn)今海水魚類餌料生物養(yǎng)殖方面的一個主要方向。</p><p> 在強(qiáng)化劑的選擇與餌料生物培育方面,前人已做過多項研究[
44、23-26]。其中,在邱小琮[27]等的實驗中,投喂以不同強(qiáng)化劑強(qiáng)化的輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體,顯著地提高了牙鲆仔魚的成活率,其中又以V強(qiáng)化酵母強(qiáng)化劑的效果最好。海水魚類仔稚魚攝食強(qiáng)化過的輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體后,體內(nèi)多不飽和脂肪酸含量隨著餌料中含量升高而升高,這正是牙鲆仔魚生長速度和成活率提高的重要因素之一。</p><p> 在海水魚類育苗中的應(yīng)用價值</p><p> 目前,我國養(yǎng)殖的重要
45、經(jīng)濟(jì)魚類,如真鯛(Pagrus major)、黑鯛(Sparus macrocephalus)和牙鲆(Paralichthys o-livaceus)等,在人工育苗過程中,常有仔稚魚大量死亡的情況出現(xiàn),成活率一般低于20%。王丹麗[28]等在對重要經(jīng)濟(jì)魚類大黃魚(Pseudosciaena crocea)的研究中,分析了大黃魚早期發(fā)育階段體內(nèi)脂肪酸的種類和相對含量,并重點比較了發(fā)病稚魚與正常稚魚的脂肪酸變化特點。通過對其變化規(guī)律的研究得
46、出結(jié)論:導(dǎo)致大黃魚稚魚階段經(jīng)常出現(xiàn)的“脹鰾病”發(fā)生的內(nèi)在原因,可能是DHA和EPA的缺乏以及AA偏高。研究結(jié)果為預(yù)防“脹鰾”魚苗的發(fā)生提供了理論依據(jù)。</p><p> 仔稚魚從吸收卵黃內(nèi)源營養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)閿z取外源營養(yǎng)后,營養(yǎng)物質(zhì)的缺乏和組成不平衡是導(dǎo)致其大量死亡的一個重要原因。因此,開展仔稚魚營養(yǎng)方面的分析,對其脂肪酸的組成和餌料攝入進(jìn)行研究,不僅有重要的科學(xué)意義,也有廣闊的應(yīng)用前景。</p><
47、;p><b> 3、研究及展望</b></p><p> 研究證實, DHA 能直接影響人類大腦功能, 促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力; 同時對多種疾病( 如動脈粥樣硬化和某些腫瘤) 具有預(yù)防和治療功效。EPA 對體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用, 這類激素直接參與體內(nèi)滲透壓調(diào)節(jié), 心血管功能和神經(jīng)發(fā)育等[29]。鑒于人體不能自身合成多不飽和脂肪酸,合理的脂肪酸攝入對身體健康極為重要。
48、</p><p> 條石鯛(Oplegnathus fasciatus,T.&S.)是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價值的海產(chǎn)魚類,主要分布于我國的黃海、東海,日本的北海道以南等海[30]。成魚體態(tài)優(yōu)美,色澤艷麗,具有較高的觀賞價值;兼之肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)價值高,口感獨特,深受消費者的青睞[31]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,條石鯛在營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)價值上的重要性也日益凸顯,對其進(jìn)行基礎(chǔ)研究顯得尤為重要。</p>
49、<p> 本課題主要是分析條石鯛未受精卵、受精卵、未開口仔魚、飼喂輪蟲后的仔魚、飼喂鹵蟲后的仔魚、幼魚以及成魚體內(nèi)的脂肪酸組成種類以及含量變化規(guī)律。這對于條石鯛養(yǎng)殖的健康可持續(xù)發(fā)展,提高生產(chǎn)者的積極性,以及提高條石鯛養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益有重大的意義。</p><p><b> 參考文獻(xiàn)</b></p><p> [1] 周光正,王遠(yuǎn)隆,王淑君.海水仔稚
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61、t;/p><p> [26] 周光正. 餌料對培養(yǎng)輪蟲(Brachionus plicatilis)脂肪酸組成的影響[J]. 海洋科學(xué),1996,5,27-28</p><p> [27] 邱小琮. 營養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲、鹵蟲對牙鲆仔魚的成活、生長及體脂肪酸組成的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2004,23(2):4-8</p><p> [28] 王丹麗,徐善良,嚴(yán)小軍,
62、等.大黃魚仔、稚、幼魚發(fā)育階段的脂肪酸組成及其變化[J].水產(chǎn)學(xué)報,2006,30(2): 241-245.</p><p> [29] 薄海波,王霞.堿催化法衍生化氣相色譜/質(zhì)譜法分析青海湖裸鯉魚油中脂肪酸[J].色譜,2006, 21(2):181- 184.</p><p> [30] 朱元鼎.福建魚類志(下卷) [M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社,1985,254-255<
63、/p><p> [31] 武云飛,門強(qiáng),康斌.兩種珍稀魚類的形態(tài)學(xué)和生態(tài)學(xué)的補(bǔ)充研究[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報,1999, 29(4): 581-585</p><p><b> 本科畢業(yè)設(shè)計</b></p><p><b> ?。?0_ _屆)</b></p><p> 條石鯛發(fā)育早期脂肪酸組成研
64、究 </p><p><b> 目 錄</b></p><p><b> 引言16</b></p><p><b> 1材料與方法17</b></p><p> 1.1 樣品采集17</p><p> 1.2 儀器與試劑17&
65、lt;/p><p> 1.3 GC/MS分析條件17</p><p> 1.4 實驗方法17</p><p> 1.4.1 總脂的提取—Bligh-Dyer法17</p><p> 1.4.2 皂化18</p><p> 1.4.3 脂肪酸甲脂化18</p><p> 1.4.
66、4 GC/MS分析18</p><p> 1.4.5 脂肪酸的定性測定19</p><p> 1.5數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計與檢驗19</p><p><b> 2 結(jié)果19</b></p><p> 2.1 各樣品的總脂含量變化19</p><p> 2.2 脂肪酸的種類組成特點2
67、1</p><p> 2.2.1 未受精卵的脂肪酸組成特點21</p><p> 2.2.2 胚胎期脂肪酸組成特點22</p><p> 2.2.3 前仔魚期脂肪酸組成特點22</p><p> 2.2.4 后仔魚期脂肪酸組成特點22</p><p> 2.2.5 稚魚期體內(nèi)脂肪酸組成特點22<
68、;/p><p> 2.2.6 幼魚期脂肪酸組成特點22</p><p> 2.3 幾種重要脂肪酸的實際含量比較22</p><p><b> 3 討論24</b></p><p> 3.1 條石鯛發(fā)育早期各階段SFA、MUFA和PUFA的含量變化24</p><p> 3.2 條石鯛
69、發(fā)育早期各階段主要脂肪酸組成的變化24</p><p> 3.3 稚魚期的特點與“脹鰾病”的發(fā)生24</p><p> 3.4 條石鯛魚苗脂肪酸組成與其他魚類比較25</p><p> 3.5 條石鯛魚苗攝食餌料對其脂肪酸的影響25</p><p><b> 4 小結(jié)25</b></p>
70、<p> 致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b> 參考文獻(xiàn)26</b></p><p> 摘 要:用GC/MS法對條石鯛發(fā)育早期不同發(fā)育階段(未受精卵、胚胎、前仔魚期、后仔魚期-鹵蟲、后仔魚期-輪蟲、稚魚、幼魚)的脂肪酸組成及含量進(jìn)行了分析研究。共檢測到28種脂肪酸,其中飽和脂肪酸(SFA)13種,單不飽和脂肪酸(MUFA)7種,多不飽和
71、脂肪酸(PUFA)8種。結(jié)果表明:SFA、MUFA和PUFA的含量在開口之前均呈逐漸下降,開口之后迅速回升;必需脂肪酸中的∑EPA+DHA含量,在攝食鹵蟲階段的稚魚期最低,但C18:1(油酸)、C18:2(n-6)(亞油酸)和 C18:3(n-3)(亞麻酸)含量則顯著高于其他各階段。此外,還將條石鯛魚苗脂肪酸組成與其他魚類進(jìn)行了比較分析,并探討了稚魚期的特點與“脹鰾病”的發(fā)生與預(yù)防。</p><p> 關(guān)鍵詞:
72、條石鯛;發(fā)育早期;胚胎;仔稚幼魚;脂肪酸</p><p> Abstract: The fatty acid composition and content at different developmental stages (unfertilized stage, embryo stage, prelarval stage, postlarva-rotifer stage, postlarva-artemia
73、 stage, juvenile and fingerling) of the Oplegnathus fasciatus were analyzed by the means of GC/MS. Twenty-eight fatty acids were found, in which there were 13 saturated fatty acids(SFA), 7 monounsaturated fatty acids(MUF
74、A), and 18 polyunsaturated fatty acids(PUFA). The result indicates that the content of SFA, MUFA and PU</p><p> Keywords: Oplegnathus fasciatus, developmental stages, embryo, young fish, fatty acid</p>
75、;<p><b> 引言</b></p><p> 條石鯛(Oplegnathus fasciatus,T.&S.),俗稱日本鸚鵡魚,隸屬于鱸形目(Perciformes),石鯛科(Oplegnathidae),石鯛屬(Oplegnathus),主要分布于我國的黃海、東海,日本的北海道以南等海域[1]。肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)價值高,是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價值的海產(chǎn)魚類[2]。條
76、石鯛皮下含有豐富的膠質(zhì),口感獨特,深受消費者的青睞;其幼魚體態(tài)優(yōu)美、色澤鮮艷、條紋美麗,具有較高的觀賞價值。在北方,可采用海上網(wǎng)箱、池塘與室內(nèi)相結(jié)合的養(yǎng)殖模式,南方可以在海上進(jìn)行網(wǎng)箱養(yǎng)殖[3]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,條石鯛在營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)價值上的重要性也日益凸顯,因此對其進(jìn)行基礎(chǔ)研究顯得尤為重要。</p><p> 脂肪酸在生物體生命過程中具有重要的作用。它們是構(gòu)成機(jī)體脂肪和類脂的基本物質(zhì),是細(xì)胞膜磷脂的重
77、要成分,能夠直接調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的組成及蛋白質(zhì)與膜內(nèi)受體,調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與酶作用,影響酶活性;與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子作用,修飾基因表達(dá);影響mRNA穩(wěn)定性,調(diào)節(jié)酶的表達(dá)[4]。</p><p> 各種脂肪酸可根據(jù)飽和度的不同分為飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)、多不飽和脂肪酸(PUFA)[5]。MUFA可降低血漿總膽固醇、血壓的作用,也可防止記憶下降。動物體內(nèi)能夠合成SFA和MUFA,但不能合成亞油酸(C18
78、:2)和亞麻酸(C18:3)等,因此將動物維持正常生長發(fā)育需要而體內(nèi)又不能合成的脂肪酸稱為必需脂肪酸,如亞油酸、亞麻酸、AA、EPA及DHA等[6-7]。人體同樣不能自身合成多不飽和脂肪酸,合理的脂肪酸攝入對身體健康極為重要。n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA) 中,有代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等[8]。EPA和DHA主要來源于海洋生物或深海魚類,是生理作用最重要的n-3族脂肪酸[9],對人體
79、而言,具有降血壓、抗血栓、預(yù)防心血管疾病及抗腫瘤等多種重要的生理功能,在降低血脂、降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[10]。研究證實DHA能直接影響人大腦功能,同時對多種疾病如動脈粥樣化具有預(yù)防和治療功能[11]。同樣,EPA對體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用[12]。</p><p> 正因為魚類富含人體必須氨基酸、多聚不飽和脂肪酸以及其他礦物元素,一直以來作為人類重要食物和營養(yǎng)源。近年來,隨著
80、人們對健康與營養(yǎng)水平要求提高,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,國內(nèi)外對魚類脂肪酸的研究也越來越廣泛,從魚類中攝取脂肪酸的重要性已日益受到關(guān)注[13]。</p><p> 海洋生物和深海魚類中富含多不飽和脂肪酸,尤其是EPA和DHA含量比淡水魚高出許多[14]。國內(nèi)外有關(guān)魚類脂肪酸營養(yǎng)的研究表明,海水硬骨魚類需要高度不飽和脂肪酸,尤其是n-3HUFA是海水仔稚魚的必需脂肪酸[15],海水魚類必需的長鏈多不飽和脂肪酸(HUF
81、A)有以下三種:n-3系列的C 22:6(n-3)DHA(二十二碳六烯酸) 和C20:5 (n-3)EPA(二十碳五烯酸),n-6系列的C20:4(n- 6) (花生四烯酸,AA) [16-18]。海水魚體組織中DHA和EPA的含量遠(yuǎn)高于AA,因此魚類對n-3系列不飽和脂肪酸,尤其是DHA、EPA有更高的需求[19]。同時,研究還表明幼魚和成魚對必需脂肪酸的需求和轉(zhuǎn)化途徑不同,脂肪酸在魚苗期起著十分重要的作用,特別是高度不飽和脂肪酸中的
82、n-3系列(如DHA、EPA和AA)是海水仔、稚、幼魚的必需脂肪酸,對維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和機(jī)能的完整性極為重要,而且是構(gòu)成統(tǒng)稱為類二十烷酸的高生物活性旁分泌素的前體[20]。通過研究比較海水魚類各發(fā)育階段的脂肪酸組成與變化,可以闡明該魚在不同生長發(fā)育階段的脂肪酸需求,也可為科學(xué)調(diào)配人工配合飼料、配制魚苗開口餌</p><p> 目前對各種海淡水魚類的脂肪酸研究眾多,但對條石鯛的脂肪酸組成研究方面少有人涉及。本課題擬
83、通過分析條石鯛未受精卵、胚胎、仔魚前期、仔魚后期、稚魚及幼魚體內(nèi)的脂肪酸種類、組成以及含量變化規(guī)律,來探明條石鯛生長過程中脂肪酸的積累、轉(zhuǎn)化和利用情況。這對評價條石鯛不同發(fā)育階段的營養(yǎng)狀況有重要參考價值,也可為條石鯛育苗工藝的完善提供技術(shù)支撐。</p><p><b> 1材料與方法</b></p><p><b> 1.1 樣品采集</b>
84、</p><p> 實驗所用材料于2009年5月,取自寧波市海洋與漁業(yè)研究院橫碼基地。按不同的發(fā)育階段分別采樣,共獲取未受精卵、胚胎、前仔魚期、后仔魚期(攝食輪蟲,以下簡稱“后仔魚期-輪蟲”)、仔魚后期(攝食輪蟲和鹵蟲,以下簡稱“后仔魚期-鹵蟲”)、稚魚、幼魚等7個樣品。取樣后立即冷凍,用冰瓶帶回,置于實驗室-76℃的冰箱中保存。</p><p><b> 1.2 儀器與試劑
85、</b></p><p> QP2010氣相色譜-質(zhì)譜分析儀,帶AOC-20自動進(jìn)樣器(日本SHIMADZU公司),30 m×0.25 mm×0.25 μmSPB-50色譜柱(美國SUPELCO公司);半自動測序系統(tǒng)(美國BIO-RAD公司)等;14%BF3-CH3OH溶液和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯(美國ALLTECH公司),色譜純正己烷(美國TEDIA公司),其他試劑為國產(chǎn)分析純。<
86、;/p><p> 1.3 GC/MS分析條件</p><p> GC條件: 進(jìn)樣口溫度250℃,載氣為純度為99.999%的高純氦,柱流速0.81 mL/min,柱前壓73.0KPa,柱起始溫度150℃,保持3.5 min,以20 ℃/min升至200℃,再以5℃/min升至280℃,保持37 min。分流進(jìn)樣1 L,分流比50:1。</p><p> MS條件:
87、 離子源選用電子轟擊(electron impact, EI)源,電子能量為70 eV,離子源溫度200℃,接口溫度250℃,選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式,質(zhì)量掃描范圍為40~600,溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離(Chemical Ionization, CI)源分析時,反應(yīng)氣為甲烷。</p><p><b> 1.4 實驗方法</b></p><p>
88、; 1.4.1 總脂的提取—Bligh-Dyer法</p><p> 步驟一:把取來的樣品勻漿以后,放在冷凍干燥機(jī)上徹底干燥;</p><p> 步驟二:在電子天平上準(zhǔn)確稱量0.1-0.2g左右干樣,把稱來的干樣放入15mL離心管中,往離心管中加入7.6mL CHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8的混合液,在超聲波清洗機(jī)中超聲提取2min,然后在旋渦混合器上劇烈振蕩5min;
89、</p><p> 步驟三:把離心管放入臺式離心機(jī)中離心,在三千轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速下離心15min,離心完畢后取上層清液,滴入125mL的分液漏斗中;</p><p> 步驟四:往離心管中的下層樣品再加入7.6mL CHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8的混合液,在渦旋混合器上劇烈振蕩5mL,然后在超聲清洗機(jī)中超聲提取2mL;</p><p> 步驟五:重復(fù)步驟
90、三;</p><p> 步驟六:重復(fù)步驟四-步驟五;</p><p> 步驟七:向裝有全部上層清液的分液漏斗中加入6mL CHCl3,從而使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:0.8,然后用雙手振蕩分液漏斗中的混合液30s;</p><p> 步驟八:振蕩完畢后,再向分液漏斗中加入6mL飽和食鹽水,從而使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:2.8,然后
91、用雙手振蕩分液漏斗中的混合液30s;</p><p> 步驟九:把分液漏斗放到分液漏斗架上,使里面的樣品靜置分層,過夜,以上下層的液體清晰分開即分界面徹底清晰為效果最佳;</p><p> 步驟十:待分層完畢后,把下層液體轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在30℃左右加熱蒸發(fā)蒸發(fā)瓶中的樣品,在蒸發(fā)時注意不要使瓶中的樣品噴出來,待蒸發(fā)到一定量時,把樣品瓶從旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上取下,用少量氯仿把蒸發(fā)瓶中
92、的樣品洗到已知重量的4mL樣品瓶中,用氮氣吹到樣品瓶的重量的不再變化即恒重為止,然后往4mL樣品瓶中充氮氣冷凍保存;</p><p><b> 1.4.2 皂化</b></p><p> 步驟一:往4mL樣品瓶中加入2mL 5-6%的KOH甲醇水(V/V=4:1),然后在4mL樣品里吹一分鐘氮氣,把樣品瓶放入60℃的水中皂化2h;</p><p
93、> 步驟二:皂化完成后,把皂化液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中,往離心管中加入1mL的飽和NaCl溶液,用鹽酸(V/V=1:1)調(diào)PH使小于1;</p><p> 步驟三:用2mL的氯仿:正己烷(V/V=1:4)洗樣品瓶并合并到離心管中,在渦旋混合器上渦旋振蕩數(shù)分鐘,把離心管放入離心機(jī)中以4000r/min離心,離心10min,用吸管把上層液吸到另一個離心管中;</p><p> 步驟
94、四:重復(fù)步驟三;</p><p> 步驟五:再重復(fù)步驟三,得到上層提取液即為脂肪酸;</p><p> 1.4.3 脂肪酸甲脂化</p><p> 步驟一:提取液用2mL重蒸水洗一次,然后把離心管放入渦旋振蕩器上振蕩,以4000r/min離心,離心十分鐘,把上層液準(zhǔn)確移入干凈并干燥的4mL樣品瓶中,把樣品瓶放到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干,在4mL樣品瓶中加入0.5mL
95、BF3甲醇液,往樣品瓶中吹氮氣1min,然后放入60℃的水中甲脂化1h;</p><p> 步驟二:一小時后把4mL樣品瓶從水中取出,待冷卻后移到干凈并干燥的15mL離心管中,在離心管中加入1mL飽和NaCl溶液;</p><p> 步驟三:原來的樣品瓶用2mL正己烷洗到離心管中,在渦旋混合器上渦旋振蕩數(shù)分鐘,把離心管放入離心機(jī)中以4000r/min離心,大約離心十幾分鐘,用吸管把上層
96、液吸到另一個尖頭離心管中; </p><p> 步驟四:重復(fù)步驟三;</p><p> 步驟五:再用3mL氯仿:正己烷(V/V=1:4)抽提一次,合并提取液;</p><p> 步驟六:往提取液中加入1g無水硫酸鈉,用滴管準(zhǔn)確移取上層液移入4mL樣品瓶中氮氣吹干,用1mL正己烷定容到潔凈并干燥的1.5mL樣品瓶中,最后把樣品上GC/MS進(jìn)行分析測定。</
97、p><p> 1.4.4 GC/MS分析</p><p> GC條件:進(jìn)樣口溫度250℃,載氣為純度為99.999%的高純氦,柱流速0.81 mL/min,柱前壓73.0 KPa,柱起始溫度150℃,保持3.5 min,以20℃/min升至200℃,再以5℃/min升至280℃,保持37 min。分流進(jìn)樣1L,分流比50:1;</p><p> MS條件:離子源
98、選用電子轟擊(electron impact, EI)源,電子能量為70 eV,離子源溫度200℃,接口溫度250℃,選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式,質(zhì)量掃描范圍為40~600,溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離(Chemical Ionization, CI)源分析時,反應(yīng)氣為甲烷。</p><p> 1.4.5 脂肪酸的定性測定</p><p> 在上述分析條件下,每一脂肪
99、酸組分都有各自保留時間,此保留時間即為定性依據(jù)之一。從GC-CIMS-TIC圖中各組分的質(zhì)譜,可以初步確定出各組分的分子量;再根據(jù)GC-EIMS-TIC中各組分的離子碎片質(zhì)量譜圖,通過NIST庫并參考脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)譜圖可以定性出所有的脂肪酸。</p><p> 1.5數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計與檢驗</p><p> 首先使用Excel,對收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理和分析,計算均值與方差;其后,使用SPS
100、S 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步分析,即進(jìn)行均值的多重比較。比較時首先選定因變量和分組變量,再使用LSD法(最小顯著差數(shù)法)和Duncan法(新復(fù)極差法)對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較,最后輸出統(tǒng)計量,分析其差異。</p><p><b> 2 結(jié)果</b></p><p> 2.1 各樣品的總脂含量變化</p><p> 條石鯛各階段樣品的
101、總脂含量測定結(jié)果見表1。由表1可見,7個樣品的總脂含量為92.78±6.45 ~389.91±9.24(mg/g),飼喂輪蟲的仔魚后期總脂含量最高,約占總量(干樣)的39%。條石鯛在胚胎及仔魚前期發(fā)育期間,脂肪作為其能量的主要來源,總脂的絕對含量由未受精卵的306.00mg/g急劇跌至92.78mg/g。仔魚后期期攝食輪蟲后又迅速回升至389.91mg/g,此后其總脂含量呈逐步遞減趨勢,至幼魚期,總脂含量降為292.
102、69 mg/g,相較于仔魚后期-輪蟲期,下跌達(dá)24.93%。</p><p> 表1 條石鯛各發(fā)育階段總脂含量(mg/g)</p><p> Tab.1 Total lipid content in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (mg/g)</p><p> 注:采用Dun
103、can氏新復(fù)極差檢驗法。n=3,表中上標(biāo)字母不同(a、b、c、d、e)表示有顯著差異(P<0.05)。</p><p> Notes: Duncan’s multiple range test. Within a row, means with the same superscript are not significantly different at P<0.05.</p><p&
104、gt; 表2 條石鯛各發(fā)育階段脂肪酸組成(%)</p><p> Tab.2 Fatty acid composition in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (%)</p><p> 注:采用Duncan氏新復(fù)極差檢驗法。n=3,表中上標(biāo)不同字母(a、b、c、d、e、f)表示有顯著性差異(P<0
105、.05)。</p><p> Notes: Duncan’s multiple range test. Within a row, means with the same superscript are not significantly different at P<0.05.</p><p> 圖1 條石鯛各發(fā)育階段∑SFA、∑MUFA和∑PUFA的百分比含量</p&g
106、t;<p> Fig.1 ∑SFA, ∑MUFA and ∑PUFA content in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (%)</p><p> 2.2 脂肪酸的種類組成特點</p><p> 條石鯛發(fā)育早期各階段脂肪酸組成及百分比含量測定結(jié)果見表2。從未受精卵開始至幼魚共檢測出28種脂
107、肪酸,起始碳鏈長度在14碳~24碳之間。其中飽和脂肪酸(SFA)13種,單不飽和脂肪酸(MUFA)7種,多不飽和脂肪酸(PUFA)8種。SFA、MUFA、PUFA三者百分含量在各階段的變化見圖1。</p><p> 2.2.1 未受精卵的脂肪酸組成特點</p><p> 從未受精卵中檢測出28種脂肪酸,此時以PUFA為主,占41.23%,在各階段中含量最高;SFA次之,為33.25%;
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