象山港不同營養(yǎng)層次魚類攝食的脂肪酸生物標(biāo)志物分析【開題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報(bào)告</b></p><p><b>　　海洋生物資源與環(huán)境</b></p><p>　　象山港不同營養(yǎng)層次魚類攝食的脂肪酸生物標(biāo)志物分析</p><p>　　一、選題的背景與意義</

2、p><p>　　象山港是浙江東部沿海的一個(gè)半封閉型狹長海灣(長61 km，寬3-20 km)，有關(guān)象山港海洋生態(tài)系統(tǒng)自然保護(hù)和持續(xù)利用示范區(qū)建設(shè)，已被國家列為中國海岸帶濕地保護(hù)行動(dòng)計(jì)劃的優(yōu)先計(jì)劃項(xiàng)目之一。目前,象山港魚類資源家底不清。因此，為更好地了解象山港生態(tài)系統(tǒng)和今后基于生態(tài)系統(tǒng)的漁業(yè)管理，有必要對(duì)不同層次魚類營養(yǎng)攝食情況開展研究。</p><p>　　由于生物體內(nèi)三羧酸甘油酯中的脂肪酸主

3、要來自于所攝入的食物，同時(shí)脂肪酸在生物體內(nèi)的代謝過程中比較穩(wěn)定，經(jīng)生物消化吸收后基本結(jié)果不變。因此它連接的脂肪酸是標(biāo)志其食物來源的重要標(biāo)志。這些脂肪酸從生態(tài)系統(tǒng)的低營養(yǎng)級(jí)向高營養(yǎng)級(jí)的傳遞過程中，結(jié)果基本保持不變，使其成為標(biāo)志生態(tài)系統(tǒng)不同營養(yǎng)級(jí)之間營養(yǎng)關(guān)系的良好標(biāo)志物。通過對(duì)比生物之間脂肪酸的組成，可追蹤物質(zhì)在食物網(wǎng)中的傳遞過程，有助于生物之間營養(yǎng)關(guān)系的確定。</p><p>　　因此，本實(shí)驗(yàn)擬從魚類著手，通過分析

4、脂肪酸標(biāo)志物，了解不同營養(yǎng)層次魚類攝食特點(diǎn)。不僅可為象山港生態(tài)系統(tǒng)研究提供基礎(chǔ)資料，而且可為今后基于生態(tài)系統(tǒng)的漁業(yè)管理和漁業(yè)資源可持續(xù)開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　研究的基本內(nèi)容:</b></p><p>　　1、不同營養(yǎng)層次魚類的收集及背肌獲得；</p&g

5、t;<p><b>　　2、脂肪酸分析；</b></p><p><b>　　3、成份比較。</b></p><p><b>　　解決的主要問題：</b></p><p>　　使用脂肪酸生物標(biāo)記方法，分析不同種魚類背肌脂肪酸組成，從而了解不同營養(yǎng)層次魚類在象山港攝食不同餌料的情況。<

6、;/p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p>　　研究的方法與技術(shù)路線：</p><p>　　1、樣品獲得：收集象山港各種魚類，解剖取背部白肌。</p><p><b>　　2、脂肪酸分析：</b></p><p>　　抽提---------Bligh-Dyer法</p>

7、<p>　　樣品勻漿，冷凍干燥。</p><p>　　0.1-0.2克左右干樣放入20ml離心管,加7.6mlCHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8混合液后超聲波提取2分鐘,劇烈震蕩5分鐘。</p><p>　　3000rmp離心，取上層放入125ml分液漏斗，下層加7.6mlCHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8混合液，劇烈震蕩5分鐘，超聲波提取2分鐘。&l

8、t;/p><p><b>　　重復(fù)兩遍3的操作。</b></p><p>　　向分液漏斗中加6mlCHCl3，使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:0.8之后震蕩30秒。</p><p>　　再向分液漏斗中加6ml飽和食鹽水，使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:1.8,震蕩30秒</p><p>　　分層后，取下層

9、氯仿層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至恒重，充氮?dú)獯蹈珊罄鋬霰４妗?lt;/p><p>　　皂化（取一定量總脂，皂化2小時(shí)。）</p><p>　　準(zhǔn)備材料：配制2ml5-6%KOH甲醇水（V/V4：1） 60℃；N2放入4ml樣品瓶1min。</p><p>　　皂化液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，用鹽酸調(diào)PH<1，加飽和氯化鈉溶液1ml，用2ml氯仿：正己烷（V/V1：4）洗樣品瓶合并到

10、離心管中，旋渦震蕩，4000轉(zhuǎn)/分離心，用吸管把上層液吸到另一個(gè)離心管中，再重復(fù)兩次，合并提取液，得脂肪酸。</p><p><b>　　脂肪酸甲脂化</b></p><p>　　提取液2ml重蒸水洗一次，準(zhǔn)確移取上層液蒸干，加入0.5mlBF3甲醇液,用氮?dú)獯?分鐘, 60℃水浴甲脂化1小時(shí),冷卻，移到15ml離心管中，加1ml飽和NaCl。原樣品瓶用2ml正己烷洗

11、到離心管中，旋渦震蕩，4000轉(zhuǎn)/分離心，用吸管把上層液吸到另一個(gè)尖頭離心管中，再重復(fù)兩次，合并提取液，加入1g無水Na2SO4,準(zhǔn)確移取上層液，蒸干，1ml正己烷定容到1.5ml樣品瓶,上GC-MS。</p><p><b>　　3、魚類攝食分析：</b></p><p>　　海洋中脂肪酸主要來源于浮游植物、細(xì)菌、原生動(dòng)物和海洋動(dòng)物自身合成等幾個(gè)方面。浮游植物的脂肪

12、酸豐富多樣，主要包括C14-C22 飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多元不飽和脂肪酸；細(xì)菌能合成C10-C20 大部分飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸，只有一些少數(shù)深海的和從魚類腸道分離出來的細(xì)菌可以合成多元不飽和脂肪酸；原生動(dòng)物如纖毛蟲除了本身具有一些常見的飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多元不飽和脂肪酸外，還能將餌料中的一些前體脂肪酸轉(zhuǎn)化合成為二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸等必需脂肪酸；海洋動(dòng)物也能通過延長碳鏈和去飽和作用合成一部分脂肪酸，一些橈足

13、類能合成C18、C20和C22單不飽和脂肪酸和某些飽和脂肪酸，一些海洋魚類能合成20: 4n26、EPA和DHA。</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2011年2月下旬—2011年3月下旬：</p><p>　　實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備，輔助材料的制備。</p><p>　　2011年4月上旬—201

14、1年4月中旬：</p><p>　　獲得不同營養(yǎng)層次魚類的背肌樣品。</p><p>　　2011年4月下旬：</p><p>　　對(duì)各營養(yǎng)層次魚類脂肪酸的分析</p><p>　　2011年5月上旬：</p><p>　　利用脂肪酸生物標(biāo)志物分析魚類攝食情況</p><p>　　2011年5月

15、中旬：</p><p>　　論文寫作 </p><p>　　五、主要參考文獻(xiàn)：（要翻譯的2篇文章列入）</p><p>　　[1] 唐啟升. 海洋食物網(wǎng)與高營養(yǎng)層次營養(yǎng)動(dòng)力學(xué)研究策略[J]. 海洋水產(chǎn)研究, 1999, 20(2): 1-11.</p><p>　　[2] 唐啟升. 海洋食物網(wǎng)及其在生態(tài)系統(tǒng)整合中的意義[C].

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30、43;se Lino Costa, et al. Modelling the effects of extreme events on the dynamics of the amphipod Corophium orientale [J]. Ecological Modelling, 221(2010) 495-466.</p><p>　　[22]Daniel P Faith, Susana Magallon

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32、;b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　海洋生物資源與環(huán)境</b></p><p>　　利用脂肪酸生物標(biāo)志物分析魚類攝食</p><p>　　摘要：利用脂肪酸生物標(biāo)志法分析魚類攝食的原理及特點(diǎn)。與傳統(tǒng)方法相比，脂肪酸生物標(biāo)志法具有省時(shí)、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但是仍然具有一定的局限性：（1）前處理過程長；（2）在食

33、物網(wǎng)研究中尚沒有發(fā)現(xiàn)某種脂肪酸具有特征的指示作用。隨著分析技術(shù)的發(fā)展，并輔助以統(tǒng)計(jì)方法，脂肪酸生物標(biāo)志法分析在生物營養(yǎng)級(jí)上的應(yīng)用將有更大的發(fā)展空間。</p><p>　　關(guān)鍵詞：脂肪酸；生物標(biāo)志物；魚類；攝食</p><p>　　食物聯(lián)系是海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能的基本表達(dá)形式，物質(zhì)能量通過攝食轉(zhuǎn)化為各營養(yǎng)層次的生物生產(chǎn)力。對(duì)食物網(wǎng)結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行系統(tǒng)性研究，成為漁業(yè)經(jīng)濟(jì)、漁業(yè)生態(tài)以及漁業(yè)資

34、源管理的重要內(nèi)容[1]。從生物學(xué)的角度看，面對(duì)物理化學(xué)過程，海洋生態(tài)系統(tǒng)的響應(yīng)常常表現(xiàn)為食物網(wǎng)的變化，而且海洋食物網(wǎng)又直接與生態(tài)系統(tǒng)的多樣性、脆弱性和生產(chǎn)力相聯(lián)系，因此食物網(wǎng)研究在海洋生態(tài)系統(tǒng)研究中無可代替[2]。同時(shí)，海洋生態(tài)系統(tǒng)的食物網(wǎng)營養(yǎng)級(jí)與評(píng)估海洋中物質(zhì)和能量的流動(dòng)過程、海洋生物資源現(xiàn)狀密切相關(guān)[3,4]。</p><p>　　脂類不僅是生物的能量儲(chǔ)存庫，而且是構(gòu)成生物膜的重要物質(zhì)，與細(xì)胞識(shí)別和組織免疫有

35、密切關(guān)系；此外，脂類物質(zhì)參與激素和維生素的代謝，在機(jī)體內(nèi)具有重要的生物學(xué)作用和生理學(xué)調(diào)控功能。因此，對(duì)生物的脂肪酸組成及應(yīng)用已有大量研究[5-7]。脂類中的必需脂肪酸( Essential fatty acids，EFA)，是指異養(yǎng)型生物體內(nèi)不能合成，或者即使能合成也不能滿足自身需要，因此必須通過食物獲取的多元不飽和脂肪酸[8]。海洋中必需脂肪酸主要包括n3和n6系列的多元不飽和脂肪酸。由于海洋動(dòng)物的脂肪酸主要來自于所攝入的食物，同時(shí)脂

36、肪酸在生物體內(nèi)的代謝過程中比較穩(wěn)定，經(jīng)生物消化吸收后基本結(jié)構(gòu)不變。因此它連接的脂肪酸是標(biāo)志其食物來源的重要標(biāo)志[9]，這些脂肪酸從生態(tài)系統(tǒng)的低營養(yǎng)級(jí)向高營養(yǎng)級(jí)的傳遞過程中，結(jié)構(gòu)基本保持不變，使其成為標(biāo)志生態(tài)系統(tǒng)不同營養(yǎng)級(jí)之間營養(yǎng)關(guān)系的良好標(biāo)志物。通過對(duì)比生物之間脂肪酸的組成，可追蹤物質(zhì)在食物網(wǎng)中的傳遞過程，有助于生物之間營養(yǎng)關(guān)系的確定。用脂肪酸標(biāo)志生態(tài)系統(tǒng)營養(yǎng)關(guān)系的研究，近幾十年得到了迅猛的發(fā)展[10-12]。</p>&

37、lt;p>　　目前，國內(nèi)研究人員對(duì)魚類脂肪酸組成特點(diǎn)等方面做了相關(guān)工作[13-15]。但是這些報(bào)道主要集中于魚類的脂肪酸組成與需要，卻很少從整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)各個(gè)營養(yǎng)級(jí)的角度來探討脂肪酸組成的變化。</p><p>　　1 脂肪酸作為生物標(biāo)志物的原理</p><p>　　脂肪酸、氨基酸、單糖等一類特殊的化合物被稱為生物標(biāo)志物，可用于辨別生物餌料的來源，是由于其在生物的攝食活動(dòng)過程中相對(duì)穩(wěn)

38、定。其中脂肪酸較其他物質(zhì)更適合作為生物標(biāo)志物，它是迄今所知的細(xì)菌體、微藻類、陸地高等植物、海洋動(dòng)物區(qū)系中含量最高的脂類物質(zhì)。作為生物標(biāo)志物，脂肪酸的優(yōu)點(diǎn)有：第一，生物體脂肪酸的組成和累積是長期攝食活動(dòng)的結(jié)果，以脂肪酸生物標(biāo)志判斷生物攝食準(zhǔn)確性較高；第二，脂肪酸在生物體新陳代謝過程中比較穩(wěn)定，經(jīng)生物消化吸收后可能發(fā)生碳鏈延長和去飽和作用，除肝臟外，其他組織中脂肪酸結(jié)構(gòu)基本保持不變；第三，脂肪酸是水生生物的重要組成部分，一般占干重的2%-1

39、5%[16]，魚類饑餓時(shí)體內(nèi)總脂、中性脂和極性脂中不同脂肪酸減少量由多到少依次為n-6>n-9>n-3，而攝食魚體內(nèi)滯留的脂肪酸量由多到少則為n-3>n-9>n-6[17]。C20:5(n-3)(EPA)和C22:6(n-3)(DHA)等n-3系列多不飽和脂肪酸是海水魚類的必須脂肪酸。脂肪酸標(biāo)志物已經(jīng)得到國內(nèi)外的普遍認(rèn)同，并在30年時(shí)間內(nèi)得到迅速發(fā)展。</p><p>　　海洋中脂肪酸主要

40、來源于浮游植物、細(xì)菌、原生動(dòng)物和海洋動(dòng)物自身合成等幾個(gè)方面。含豐富脂肪酸的浮游植物是海洋食物鏈的主要生產(chǎn)者，決定了它們是整個(gè)食物鏈脂肪酸的主要來源。同一綱的浮游植物具有相近的脂肪酸特性，不同種類之間的浮游植物脂肪酸組成有較大差異（表1）。細(xì)菌脂肪酸的碳原子數(shù)目和高等動(dòng)、植物脂肪酸的碳原子數(shù)目相似，也在12-18個(gè)碳原子之間，但是細(xì)菌中絕大多數(shù)的脂肪酸為飽和脂肪酸，且部分脂肪酸還帶有分支的甲基。原生動(dòng)物除了本身具有一些常見的飽和脂肪酸、單

41、不飽和脂肪酸和多元不飽和脂肪酸外[18]，還能將餌料中的一些前體脂肪酸轉(zhuǎn)化合成為二十碳五烯酸(EPA；20: 5(n-23)) 和二十二碳六烯酸(DHA；22: 6(n-23)) [19]等必需脂肪酸。海洋動(dòng)物也能通過延長碳鏈和去飽和作用合成一部分脂肪酸。</p><p>　　表1 海洋藻類的主要脂肪酸組成特征</p><p>　　除了肝臟所含有的脂肪酸可能是由脂肪酸碳鏈增長或者脫氫產(chǎn)生

42、的外[22]，其他主要來自所攝入的食物，因此脂肪酸被認(rèn)為是一種有效的生物標(biāo)志物。</p><p>　　2 脂肪酸組成作為魚類攝食生物標(biāo)志物的特點(diǎn)</p><p>　　生物體中正脂肪酸的碳原子數(shù)從C4到C36，以C14、C16和C18的脂肪酸種類含量最高。一般生物體中的高分子量的正脂肪酸具有偶奇優(yōu)勢(shì)，在沉積物中，其脂肪酸多半保存了生物體中的某些分布特征。以細(xì)菌來源為主的脂肪酸其分布特征為碳

43、數(shù)范圍在C8:0-C11:0飽和脂肪酸，主峰碳數(shù)為C9，在色譜圖上以獨(dú)立的峰群出現(xiàn)；浮游生物和細(xì)菌有機(jī)質(zhì)來源為主的脂肪酸有高含量的C12:0-C20:0短鏈飽和脂肪酸[23] C22:0-C34:0來自高等植物。因此脂肪酸的組成可以作為很好的物源輸入指示物。表3列舉了主要用于食物網(wǎng)研究的脂肪酸標(biāo)志物及脂肪酸比值。通過比對(duì)某種魚類的脂肪酸含量組成差異，可以追蹤物質(zhì)在食物網(wǎng)中的傳遞路徑，從而確定其攝食情況，了解其在海洋食物網(wǎng)中的位置。<

44、;/p><p>　　表2 用于表征不同食物來源的生物標(biāo)志物脂肪酸及脂肪酸比值</p><p>　　3 與傳統(tǒng)鑒定方法的比較</p><p>　　傳統(tǒng)鑒定水生生物間的營養(yǎng)關(guān)系有兩種方法：消化道內(nèi)含物進(jìn)行分析、穩(wěn)定同位素分析。</p><p>　　食性分析方法是目前我國漁業(yè)資源考察中的常用方法，主要通過分析生物被捕撈前所攝食物，即消化道內(nèi)未被消化

45、的食物，從而確定該生物在食物網(wǎng)的地位。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是直觀，成本低；缺點(diǎn)是：第一，生物在捕撈前所攝取的食物是短期現(xiàn)象，具有偶然性，不能代表長期規(guī)律，因此往往需要進(jìn)行大量的統(tǒng)計(jì)觀察才能消除誤差；第二，研究結(jié)果受食物消化吸收能力影響，難消化的食物保留時(shí)間長，所以結(jié)果往往偏向于較難消化的食物；第三，消化道內(nèi)殘余物觀察對(duì)實(shí)驗(yàn)人員素質(zhì)要求高，大量的經(jīng)驗(yàn)才能做出準(zhǔn)確判斷，且存在不確定性[35]。</p><p>　　穩(wěn)定同位

46、素分析法的原理是生物的新陳代謝會(huì)引起同位素的分餾，使得穩(wěn)定較重同位素(如13C和15N)在生物體內(nèi)富集，從而實(shí)現(xiàn)不同營養(yǎng)級(jí)之間同位素的富集過程[36]。該方法能夠反映生物長期生命活動(dòng)的結(jié)果，還能分析得到低營養(yǎng)級(jí)或者個(gè)體較小生物的營養(yǎng)來源，從而確定生物之間的相互關(guān)系及整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)中的能量流動(dòng)。但是，穩(wěn)定同位素的結(jié)果只反映捕食者在一個(gè)較長的生命階段中所攝取的食物經(jīng)新陳代謝消化吸收積累的結(jié)果[37]，必須校正消化吸收的影響。除此之外，某些同位

47、素?cái)?shù)據(jù)有時(shí)候不能直接解釋食物網(wǎng)，還有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)論[36]。國內(nèi)用穩(wěn)定同位素方法對(duì)水域生態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行研究還較少，且方法上和國外存在較大差距：局限于只采用一種穩(wěn)定同位素，進(jìn)行生物同位素比值的測(cè)定和食物網(wǎng)結(jié)構(gòu)的初步研究[38]。生物的穩(wěn)定同位素的組成受食物源和生物的新陳代謝兩方面的影響。</p><p><b>　　4 研究展望</b></p><p>　　對(duì)各營養(yǎng)層次

48、魚類體內(nèi)脂肪的研究有利于了解脂肪酸在食物鏈傳遞過程中的作用，及各營養(yǎng)層次魚類的攝食情況，并具有省時(shí)、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。選擇脂肪酸作為生物指示物具有廣泛的應(yīng)用前景，但是也存在一定局限性：</p><p>　　第一，到目前為止，選用脂肪酸作為指示劑還無法定量評(píng)估營養(yǎng)級(jí)之間能量轉(zhuǎn)化水平，這也是目前研究的重點(diǎn)。</p><p>　　第二，脂肪酸檢測(cè)前處理和測(cè)定過程中流程繁多、操作要求高，而且在分析脂肪酸

49、組成時(shí)，脂肪酸之間的相似性影響評(píng)估，為分析的主要障礙。這就要求實(shí)驗(yàn)人員操作熟練、經(jīng)驗(yàn)豐富。</p><p>　　第三，性別、體長是影響魚類脂肪酸組成的重要因素，在利用脂肪酸特征研究食物網(wǎng)時(shí)應(yīng)充分考慮不同個(gè)體對(duì)分析結(jié)果的影響。在不同季節(jié)比較時(shí)，尤其要注意水溫的影響[39]。</p><p>　　第四，由于脂肪酸種類繁多，尤其是一些痕量的脂肪酸，往往具有特殊的意義，分析和鑒定這些物質(zhì)需要分析技

50、術(shù)、統(tǒng)計(jì)方法的進(jìn)一步提高。因此，我們應(yīng)該結(jié)合其他數(shù)據(jù)如穩(wěn)定同位素、脂肪酸單體同位素、過往營養(yǎng)分析資料，輔助研究[40]，才能夠在使用脂肪酸分析法時(shí)更清楚了解魚類脂肪酸組成與攝食情況的關(guān)系。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 唐啟升. 海洋食物網(wǎng)與高營養(yǎng)層次營養(yǎng)動(dòng)力學(xué)研究策略 [J]. 海洋水產(chǎn)研究, 1999, 20(2): 1

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81、_屆）</b></p><p>　　象山港不同營養(yǎng)層次魚類攝食的脂肪酸生物標(biāo)志物分析</p><p>　　摘要：采用改進(jìn)Bligh-Dyer法，提取鱸魚、半滑舌鰨、龍頭魚、帶魚、黃鯽、海鰻、黑鰓梅童魚、鯔魚、斑尾復(fù)鰕虎魚、棘頭梅童魚10種象山港不同營養(yǎng)層魚類總脂，并進(jìn)行脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜定性定量分析。結(jié)果表明，象山港魚類含有豐富EPA和DHA，EPA含量最高的是鯔魚 （11

82、.05%），最低的是帶魚 （4.40%）； DHA含量最高的為棘頭梅童魚 （28.90%），最低的為鯔魚（6.05%）。通過脂肪酸組成和脂肪酸生物標(biāo)志物的食物鏈溯源分析，基本確定這些魚類的源頭食物鏈。半滑舌鰨、龍頭魚、黃鯽、海鰻、黑鰓梅童魚、鯔魚、斑尾復(fù)鰕虎魚食用細(xì)菌，10種魚類均食用藍(lán)細(xì)菌、鞭毛藻屬，黃鯽、鯔魚、斑尾復(fù)鰕虎魚食用陸源高等植物，龍頭魚、帶魚、黃鯽、黑鰓梅童魚食用浮游動(dòng)物；10種魚樣基本上不食用硅藻、綠藻、褐藻，鱸魚、半滑

83、舌鰨、龍頭魚、帶魚、海鰻、黑鰓梅童魚、棘頭梅童魚不食用陸源高等植物，鱸魚、半滑舌鰨、海鰻、鯔魚、斑尾復(fù)鰕虎魚、棘頭梅童魚不食用浮游動(dòng)物。根據(jù)脂肪酸組成判斷鱸魚、半滑舌鰨、龍頭魚、黑鰓梅童魚、棘頭梅童魚具肉食性；黃鯽、鯔魚、斑尾復(fù)鰕虎魚具雜食性；帶魚、海鰻具肉食-腐食性。</p><p>　　關(guān)鍵詞：象山港；脂肪酸；生物標(biāo)志；營養(yǎng)層 </p><p>　　Abstract: The fatt

84、y acid composition of ten different trophic position fishes in Xiangshan Harbor (Lateolabrax japonicas, Cynoglossus semilaevis, Harpodon nehereus, Trichiurus japonicus, Setipinnataty, Muraenesox cinereus, Collichthys niv

85、eatu, Mugil cephalus, Synechogobius omunaturus and Collichthys lucidus) were analyzed by means of GC/MS. The result shows that the fishes in Xiangshan Harbor is abundant in EPA and DHA. Mugil cephalus has the highest con

86、tent of EPA (11.05%), while Trichiurus jap</p><p>　　Key Words: Xiangshan Harbor; Fatty Acid; Biomarker; Trophic Position</p><p><b>　　目　錄</b></p><p><b>　　1引言1<

87、/b></p><p><b>　　2材料與方法2</b></p><p>　　2.1藥品與儀器2</p><p>　　2.2試驗(yàn)樣品2</p><p>　　2.3樣品分析2</p><p>　　2.4色譜質(zhì)譜條件2</p><p>　　2.5數(shù)

88、據(jù)處理3</p><p>　　2.6脂肪酸生物標(biāo)志物判斷依據(jù)3</p><p><b>　　3結(jié)果4</b></p><p><b>　　4討論6</b></p><p>　　4.1必需脂肪酸6</p><p>　　4.2脂肪酸標(biāo)志物判斷魚類攝食種類6&

89、lt;/p><p>　　4.3以脂肪酸標(biāo)志物判斷魚類攝食食性9</p><p>　　5 展望10</p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)10</b></p><p><b>　　附錄</b></p><

90、p><b>　　引言</b></p><p>　　食物聯(lián)系是海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能的基本表達(dá)形式。因此，對(duì)海洋生態(tài)系統(tǒng)的食物網(wǎng)營養(yǎng)級(jí)的了解，有助于評(píng)估海洋中物質(zhì)和能量的流動(dòng)過程、海洋生物資源現(xiàn)狀。作為捕食者，魚類在生態(tài)環(huán)境中發(fā)揮重要作用，因此我們需要研究其食性，以此了解其營養(yǎng)層次分布關(guān)系[]。</p><p>　　對(duì)象山港魚類食性的研究主要依賴傳統(tǒng)胃含物分析方

91、法[]。但是這種方法存在一定的偶然性，因此往往需要大量的統(tǒng)計(jì)觀察才能消除這種偶然性；而且，它不能區(qū)分對(duì)所攝取食物消化吸收的難易程度，結(jié)果往往偏向于較難消化的食物；此外，對(duì)消化道內(nèi)殘余物的觀察不確切，使得生物在食性確定上存在較大的困難[]。</p><p>　　在過去的二十年中，研究人員已經(jīng)建立利用脂肪酸作為生物標(biāo)志物調(diào)查海洋動(dòng)物營養(yǎng)關(guān)系與海洋生物分布模式[、、]的科學(xué)方法。由于海洋動(dòng)物的脂肪酸主要來自于所攝入的食

92、物，同時(shí)脂肪酸在生物體內(nèi)的代謝過程中比較穩(wěn)定，經(jīng)生物消化吸收后基本結(jié)構(gòu)不變。因此它連接的脂肪酸是標(biāo)志其食物來源的重要標(biāo)志[]，這些脂肪酸從生態(tài)系統(tǒng)的低營養(yǎng)級(jí)向高營養(yǎng)級(jí)的傳遞過程中，結(jié)構(gòu)基本保持不變，使其成為標(biāo)志生態(tài)系統(tǒng)不同營養(yǎng)級(jí)之間營養(yǎng)關(guān)系的良好標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)擬通過研究20種魚類的白肌脂肪酸組成狀況，探討其營養(yǎng)層次關(guān)系。</p><p><b>　　材料與方法</b></p>

93、<p><b>　　藥品與儀器</b></p><p>　　QP2010氣相色譜-質(zhì)譜分析儀，AOC-20自動(dòng)進(jìn)樣器（日本SHIMADZU公司），30mm×0.25×0.25μmSPB-50色譜柱（美國SUPELCO公司）；冷凍干燥機(jī)（美國LABCONCO公司）；國產(chǎn)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲清洗機(jī)、漩渦混合儀、低速離心機(jī)、高速分散器、電子天平等。C19:0脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

94、和14%BF3-CH3OH溶液（美國ALLTECH公司），色譜純正己烷（美國TEDIA公司），氯仿、甲醇、氫氧化鉀、鹽酸、正己烷、無水硫酸鈉均為國產(chǎn)分析純。</p><p><b>　　試驗(yàn)樣品</b></p><p>　　魚樣2010年12月30日采自象山港海域，共20尾，10種，作兩個(gè)平行。分別如下：鱸魚（Lateolabrax japonicus）、半滑舌鰨（C

95、ynoglossus semilaevis）、龍頭魚（Harpodon nehereus）、帶魚（Trichiurus japonicus）、黃鯽（Setipinnataty）、海鰻（Muraenesox cinereus）、黑鰓梅童魚（Collichthys niveatus）、鯔魚（Mugil cephalus）、斑尾復(fù)鰕虎魚（Synechogobius omunaturus）、棘頭梅童魚（Collichthys lucidus）。

96、取一定量白肌勻漿后，放在冷凍干燥機(jī)上徹底干燥后，-20℃溫度下冷凍保存。</p><p><b>　　樣品分析</b></p><p>　　稱取1.0-2.0g左右的魚樣干品，參考改進(jìn)后的Bligh-Dyer法[]提取總脂，按文獻(xiàn)[]中方法將總脂皂化后進(jìn)行脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜定性定量分析。</p><p><b>　　色譜質(zhì)譜條件&

97、lt;/b></p><p>　　GC條件： 進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為純度為99.999%的高純氦，柱流速0.81 mL/min,柱前壓73.0 KPa,柱起始溫度150 ℃，保持3.5 min，以20 ℃/min升至200 ℃，再以5 ℃/min升至280 ℃，保持37 min。分流進(jìn)樣1L，分流比50:1；</p><p>　　MS條件： 離子源選用電子轟擊（electron

98、impact, EI）源，電子能量為70 eV，離子源溫度200 ℃，接口溫度250 ℃，選取全程離子碎片掃描（SCAN）模式，質(zhì)量掃描范圍為40~600，溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離（Chemical Ionization, CI）源分析時(shí)，反應(yīng)氣為甲烷。</p><p><b>　　數(shù)據(jù)處理</b></p><p>　　在上述分析條件下，每一脂肪酸組分都有各

99、自保留時(shí)間，此保留時(shí)間即為定性依據(jù)之一。從GC-CIMS-TIC圖中各組分的質(zhì)譜，可以初步確定出各組分的分子量；再根據(jù)GC-EIMS-TIC中各組分的離子碎片質(zhì)量譜圖，通過NIST庫并參考脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)譜圖可以定性出所有的脂肪酸。取同種魚樣的兩個(gè)樣品均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。</p><p>　　脂肪酸生物標(biāo)志物判斷依據(jù)</p><p>　　得到魚樣的脂肪酸組成成分后，本文根據(jù)表1來判斷各脂肪酸所指示

100、的食物來源進(jìn)行分析。</p><p>　　表1 用于表征不同食物來源的生物標(biāo)志物脂肪酸及脂肪酸比值</p><p>　　Tab. 1 Fatty acid biomarkers to indicate the food resources in marine system</p><p><b>　　結(jié)果</b></p><

101、;p>　　根據(jù)氣相色譜質(zhì)譜總離子圖中各組分的例子碎片質(zhì)量譜圖，通過Nist和Wiley庫檢索并參考脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)，從10種魚中共鑒定出41種脂肪酸（表2）。其中，飽和脂肪酸（SFA）有17種，單不飽和脂肪酸（MUFA）9種，多不飽和脂肪酸（PUFA）15種。十種魚的綜合結(jié)果是：SFA占總脂肪酸的35.22-44.12%，MUFA占15.22-36.19%，PUFA占22.74-41.28%，EPA占4.40-8.06%，DHA占5.1

102、6-11.05%。SFA中，含量最多的均為C16:0，占總量的20%以上，C18:0占第二位，其次是C14:0，其他飽和脂肪酸的含量都很低；MUFA中含量最高的是C18:1(n-7)，占總量的8.38-25.32%，其次是C16:1(n-7)和C18:1(n-8)；PUFA中含量最高的是DHA，其次是EPA，C20:4(n-6)等。十種魚類EPA含量均低于DHA。EPA含量最高的是鯔魚（11.05%），最低的是帶魚（4.40%）；DHA

103、含量最高的為棘頭梅童魚（28.90%），最低的為鯔魚（6.05%）。</p><p>　　從表2中可以看出，UFA%均大于SFA%，與舟山漁場(chǎng)、長江口毗鄰海域所采集的魚類樣本脂肪酸定性定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[4、]。鱸魚、半滑舌鰨、黃鯽、斑尾復(fù)鰕虎魚和棘頭梅童魚的PUFA大于MUFA，而剩余五種魚的PUFA小于MUFA。10種魚脂肪酸∑n-3/∑n-6的比值均大于3，帶魚與棘頭梅童魚的∑n-3/∑n-6的比值達(dá)到7-9

104、，說明其高活動(dòng)性[]。</p><p>　　表2 象山港主要魚種類的脂肪酸組成</p><p>　　Tab. 2 Fatty acid composition of ten different trophic level fishes from Xiangshan Harbor</p><p><b>　　續(xù)表2</b></p>

105、<p>　　注：a 在本文中，脂肪酸命名采用類似12-M-C15:0格式，其中“12”代表在遠(yuǎn)離羧基的甲基算起的第12個(gè)碳原子上帶有一個(gè)甲基；</p><p>　　b 在本文中脂肪酸命名采取類似2-hexyl-C17:0格式，其中“2”代表在遠(yuǎn)離羧基的甲基算起的第2個(gè)碳原子上帶有一個(gè)己基；</p><p>　　c 在本文中脂肪酸命名采取類似3,7,11,15-tetramethy