福壽螺卵中類胡蘿卜素的研究【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　福壽螺卵中類胡蘿卜素的研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><p&

2、gt;　　福壽螺原生于南美洲亞馬遜河流域。上世紀七十年代末以來，因福壽螺蛋白質(zhì)豐富，營養(yǎng)成分高，可供食用，且易飼養(yǎng)，而被中國、菲律賓、印尼、馬來西亞、日本、泰國、越南等國家引進。但是，人們對福壽螺危害性缺乏認識，盲目引進飼養(yǎng)，且因福壽螺作為食用，適口性差，市場銷路不暢，并且是廣州管圓線蟲的寄主，失去了食用價值。加之管理不嚴， 致使其大量丟棄野外，但福壽螺適應環(huán)境的生存能力很強，繁殖速度驚人，迅速擴散到河湖田野。不但造成農(nóng)作物的巨大損失，

3、并在內(nèi)河，湖泊大量繁殖，造成生態(tài)災害。在2003年被國家列為首批外來生物之一。福壽螺80 年代末引進寧波市，因同樣原因，擴散在到田間，內(nèi)河，近幾年寧波市各地都已有不同程度災害，并且擴展蔓延迅速，發(fā)生逐年加重，并且浙江省內(nèi)的福壽螺是大多是變異品種，具有較強抗寒能力。</p><p>　　福壽螺造成農(nóng)業(yè)、生態(tài)危害的原因，一方面是福壽螺食性廣，適應能力強，繁殖快，另外一方面主要原因是其失去食用價值后，沒找到可利用途徑，

4、加之對外來物種管理不力，導致其擴散到環(huán)境中?，F(xiàn)在對于福壽螺的防治沒有很好的方法，農(nóng)田有采用化學防治，生物防治等方法，但是化學防治會帶來新的環(huán)境問題，生物防治也有很大局限。且對于內(nèi)河湖泊中的福壽螺，這些方法都無法使用。只是采用人工除卵等方法。</p><p>　　福壽螺本身是一個豐富的蛋白質(zhì)來源，同時與生活習性和繁殖方式相聯(lián)系，其體內(nèi)和卵中具有豐富的強抗氧化和防入侵的活性成分。為此，本項目主要針對福壽螺卵中的抗氧化

5、成分加以研究，明確其分布、活性大小，含量等特征，以期將福壽螺作為新的天然食品抗氧化劑的來源，為將來結(jié)合蛋白質(zhì)加工技術對福壽螺進行綜合利用打下基礎。項目的進行對于充分利用福壽螺這一生物資源，開發(fā)其經(jīng)濟價值，同時通過恰當?shù)墓芾砜刂破溥M一步的擴展、蔓延，降低甚至消除其對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)帶來的災害，具有重要的社會，經(jīng)濟和生態(tài)效益。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p

6、>　　基本內(nèi)容：福壽螺卵中類胡蘿卜素提取方法的優(yōu)化</p><p>　　主要問題：1.分析類胡蘿卜素的抗氧化能力</p><p><b>　　2.確定提取溶劑</b></p><p><b>　　3.優(yōu)化提取方法</b></p><p>　　三、研究的方法與技術路線：</p>&

7、lt;p><b>　　研究方法：</b></p><p>　　卵內(nèi)活性成分提取及分離純化</p><p>　　卵內(nèi)活性物質(zhì)的定性定量</p><p>　　活性物質(zhì)提取方法的優(yōu)化</p><p><b>　　技術路線：</b></p><p>　　四、研究的總體安排與進度

8、：</p><p>　　1.2010年12月14日-12月21日 福壽螺卵組分成分分析</p><p>　　2.2010年12月22日-12月31日 福壽螺卵中抗氧化活性分析</p><p>　　3.2011年2月15日-3月15日 優(yōu)化提取方法</p><p><b>　　五、主要參考文獻：</b></p>

9、;<p>　　[1] Marcos S.Dreon, Guillermo Schinella, Horacio Heras et.al..Antioxidant defense system in the apple snails eggs, the role of ovorubin [J]. Archices of Biochemistry and Biophysics, 2004, Vol.422: 1-8.</

10、p><p>　　[2] 王敏，祝淵靜，趙國良等．天然胡蘿卜素的提取與分離[J]．重慶理工大學學報(自然科學)，2010，24(3)：28-32．</p><p>　　[3] 羅璇，石慧，郭城等．產(chǎn)類胡蘿卜素紅酵母細胞壁成分分離及含量檢測方法的研究[J]．農(nóng)產(chǎn)品加工，2010，(3)：72-75．</p><p>　　[4] 趙永彬，尹明安．不同溶劑對胡蘿卜中類胡蘿卜素提

11、取的影響[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學，2005,33(4)：671-673．</p><p>　　[5] 朱秀靈，車振明．B一胡蘿卜素生理功能及提取技術的研究進展[J]．西華大學學報(自然科學版)，2005，(1)：71-76．</p><p>　　[6] 沈國鵬，徐貴敏，劉芳．脂溶性類胡蘿卜素的提取及其穩(wěn)定性研究[J]．河南農(nóng)業(yè)科學，2003，(8)：30-32．</p><

12、p>　　[7] 趙豐麗，李秋臨，湛玉芬．柿子皮類胡蘿卜素的超聲提取及抗氧化活性的研究[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2008,34(8)：183-187．</p><p>　　[8] 李洋，徐雅琴．微波法提取沙棘中類胡蘿卜素最佳工藝的研究[J]．食品工業(yè)科技，2008,29(5)：193-195．</p><p>　　[9] 張衛(wèi)強，鄧宇．微波輻射萃取番茄紅素的研究[J]．食品工業(yè)科技，20

13、02，23(5)：36-37．</p><p>　　[10] 張海霞，楊云裳，張應鵬等．胡蘿卜中天然β-胡蘿卜素超聲提取工藝的研究[J]．食品研究與開發(fā)，2007，28(7)：29-31．</p><p>　　[11] 姬小明，邵惠芳，劉金霞等．類胡蘿卜素的提取及分離方法研究研究[J]．河南科學，2008，26(11)：1337-1339．</p><p><

14、b>　　畢業(yè)論文文獻綜述</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　福壽螺及類胡蘿卜素的研究進展</p><p>　　摘 要：詳細介紹了福壽螺，類胡蘿卜素的常見提取及分離方法的最新研究進展。從福壽螺卵中提取類胡蘿卜素將會是福壽螺和食用天然色素開發(fā)研究的最好交點。</p>&

15、lt;p>　　關鍵詞：福壽螺 類胡蘿卜素 提取 </p><p><b>　　0、引言</b></p><p>　　福壽螺和類胡蘿卜素看似兩個沒有交集的研究對象，卻因為食用天然色素的開發(fā)連接在了一起。接下去將會介紹他們各自的研究現(xiàn)狀，以及共同開發(fā)的意義。</p><p>　　1、福壽螺的研究現(xiàn)狀</p><p>　

16、　關于福壽螺的研究最初大多集中在其生長規(guī)律和特性方面，后來慢慢向農(nóng)田的生物化學防治方法過渡，最后福壽螺及其卵也都有不同的研究者從不同側(cè)面的展開了零星的研究。</p><p>　　福壽螺生物特性的研究</p><p>　　福壽螺（Apple snail）又稱蘋果螺、大瓶螺，分類上屬軟體動物門、腹足綱、中腹足目、瓶螺科、瓶螺屬，原產(chǎn)于南美洲亞馬遜河流域[1]。1981年作為食用螺引入中國，因其

17、生長繁殖迅速，適應性強而成為中國危害巨大的外來入侵物種。福壽螺食性廣，以植物性餌料為主[2]，主食各種水生植物、陸生草類和瓜果蔬菜，如各種浮萍、水花生、水葫蘆、青菜、青草、瓜皮、水果等。也食人工投喂的糠麩、餅粕類飼料及下腳料等，在食物缺乏的時候也攝食一些殘渣剩餌和腐殖質(zhì)及浮游動植物等。</p><p>　　福壽螺具有較長產(chǎn)卵期限，每年平均有3個星期的產(chǎn)卵期[2]，分別在4月份、6月份、10月份，每次產(chǎn)卵期為10-

18、16天，通常1-3天交配1次，產(chǎn)1次卵，每次1塊。福壽螺均在夜晚產(chǎn)卵，白天不產(chǎn)卵，并且產(chǎn)卵于離水面20-30cm的溝渠壁、河塘、河邊樹桿、竹籬笆及停泊在河中的船殼、稻苗及雜草莖稈上。</p><p>　　除此之外，黃鵬、林兆里等發(fā)現(xiàn)降雨量和氣溫的變化對福壽螺產(chǎn)卵量有極大影響。雨量對福壽螺田間產(chǎn)卵有明顯的影響：雨量越大產(chǎn)卵量越少；當降雨量大于70mm時，福壽螺的產(chǎn)卵量明顯降低，但在降雨結(jié)束后的1-2天，福壽螺產(chǎn)卵量

19、逐漸恢復上升，并達到一個新的高峰。福壽螺產(chǎn)卵量也隨溫度的起伏而波動：在較短的周期內(nèi)，溫度的變化與福壽螺產(chǎn)卵量呈正相關；但從長期看溫度的高低變化與福壽螺的產(chǎn)卵量并沒有明顯的相關。為此，在生產(chǎn)上降雨量和氣溫可作為福壽螺發(fā)生情況分析的重要依據(jù)[3]。</p><p><b>　　福壽螺防治的研究</b></p><p>　　在研究了福壽螺的生物特性之后，針對福壽螺的危害，研

20、究出了農(nóng)業(yè)防治、生物防治、化學防治等技術方法[4]，目前化學防治仍然是應用最普遍的一種。</p><p>　　農(nóng)業(yè)防治主要是人工捕捉成螺和消滅螺卵兩種方法，安全無污染，但費工大。生物防治是通過養(yǎng)家禽取食福壽螺的方法減少螺源，降低成本，具有先進性，意義較大，應用前景廣闊。化學防治中防治福壽螺主要藥劑有70%百螺殺可濕性粉劑、6%密達殺螺顆粒劑、80%五氯酚鈉粉劑。</p><p>　　由于福

21、壽螺適應性強，分布范圍廣，難以根除，往往是短期見效，治標不治本。在實際防治過程中，應該采取農(nóng)業(yè)防治、生物防治、化學防治等配套綜合防治技術措施，多種防治方法并舉，這樣才能達到較好防治效果。</p><p>　　福壽螺內(nèi)消化酶的研究</p><p>　　福壽螺以植物性餌料為食，具有食量大、生長迅速的特點，因此體內(nèi)必然含有高活性的消化酶，特別是分解細胞壁的纖維素酶和果膠酶。眾多研究者對此進行了研

22、究。</p><p>　　徐建榮、程東成等[5]對福壽螺消化酶進行了分析研究，用pH值為5.8的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液分別從研磨后的福壽螺內(nèi)臟中反復提?。s2s）后，再用雙層紗布過濾，收集濾液然后離心30min（4000rpm）收集上清液，用纖維素、果膠和淀粉測酶活性，發(fā)現(xiàn)不同來源的消化酶活性不同，消化道中含有的纖維素酶和果膠酶活性較高，而肝臟中含的淀粉酶活性較高。</p><p>　　毛孫

23、忠、雷康福等[6]從福壽螺體內(nèi)分離純化得到一種均一的纖溶酶（ACFE）成分，其分子量為32kD：pI為3.6，最適pH在9.5-11.0之間，該酶熱穩(wěn)定性強，能抗4mol/L脈處理：其具有水解合成底物S-2288和Chromozym P的活性，活性受Zu2+、Cu2+等抑制，受對氨基磺酸氟（PMSF）抑制，但不受對羚甲基苯磺酸（PHMB）影響。</p><p>　　張喆，趙紅[7]等則分離出了獲得經(jīng)SDS-聚丙烯

24、酰胺凝膠電泳鑒定為單一純的β-葡萄糖苷酶制劑.測定該酶的最適反應溫度為43℃，最適反應pH為5.1；在pH5.1，45℃下，該酶催化水楊素水解的Km值為3.40mmol/L，活化能為50.63kJ/mol。研究幾種效應物對酶活力的影響，結(jié)果表明：Mn2+、Co2+對酶有激活作用，而Cu2+、Hg2+、Pb2+、SDS及脲對酶有不同程度的抑制作用，其中Cu2+和Hg2+對該酶的抑制作用最強。</p><p>　　莊

25、總來、周興旺[8]等測得福壽螺內(nèi)纖維素酶各組分的酶活力分別為：內(nèi)切葡聚糖酶20.65萬U/g；（β-葡萄糖苷酶4.24萬U/g；外切葡聚糖酶0.48萬U/g；酶粉的蛋白質(zhì)含量為37.69%、水分為7.96%、灰分為1.78%。以花生殼作為纖維素酶作用對象，測定酶促反應的最適pH為5.26，最適溫度為52℃。在pH5.2、40℃下，纖維素酶作用于花生殼生成葡萄糖，在2h內(nèi)葡萄糖的生成量與反應時間成正比關系，然后逐漸緩慢；隨著酶濃度的增大，

26、葡萄糖的量也呈直線上升，說明從福壽螺分離得到的纖維素酶能有效地水解花生殼轉(zhuǎn)化為可被利用的葡萄糖。特別是李燕紅從福壽螺胃液中分離出了具有高EG，CBH以及木聚糖酶等多種酶的活力的EGX，其相對分子量為最適pH也在pH4.4-4.8。</p><p><b>　　對福壽螺的其他研究</b></p><p>　　張剛生和郝玉蘭[9]使用了激光拉曼光譜分析福壽螺卵殼，證實里面

27、出來六防碳鈣石外，還含有類胡蘿卜素。</p><p>　　Heras等（2008）首次報道了福壽螺卵中具有防止入侵的活性成分，該成分能對卵提供化學防護，對小鼠具有神經(jīng)毒性作用的活性成分。</p><p>　　Marcos[10]等研究了卵紅蛋白在福壽螺卵抗氧化損傷保護系統(tǒng)中的作用。</p><p>　　總得來說，對于福壽螺而言這些研究不系統(tǒng)，也不夠全面深入。<

28、/p><p>　　2、類胡蘿卜素的研究現(xiàn)狀</p><p>　　關于類胡蘿卜素的研究主要包括類胡蘿卜素的種類及其生化特性、生理功效、提取方式等方面。</p><p>　　2.1 類胡蘿卜素生化特性的研究</p><p>　　類胡蘿卜素（Carotenoid）是一類廣泛存在于自然界中的天然有色物質(zhì)，通常是指40碳的碳氫化合物（胡蘿卜素）和它們的氧化

29、衍生物（葉黃素）兩大類色素的總稱，其顏色通常為黃色到紅色，屬于脂溶性四萜烯類化合物[11]。到目前為止，已知的類胡蘿卜素約600多種，很多天然類胡蘿卜素來自高等植物橙黃色的花朵（如：向日葵、金盞花等）、橙紅色的果實（如：番茄、柑橘等）以及胡蘿卜的根。但是類胡蘿卜素含量最高的是微生物、植物和藻類的光合組織。類胡蘿卜素一般可分為兩類：胡蘿卜素和葉黃素[12]。前者以β-胡蘿卜素為代表，僅含碳、氫兩種元素，后者則是前者的含氧衍生物，如蝦青素。

30、另一種分類系統(tǒng)是將類胡蘿卜素分為鏈狀、單環(huán)和雙環(huán)衍生物，它們的母體代表化合物分別為：γ-胡蘿卜素、番茄紅素和β-胡蘿卜素。類胡蘿卜素的性質(zhì)由它的分子結(jié)構(gòu)決定，共軛多烯鏈是類胡蘿卜素分子的結(jié)構(gòu)特征，這一結(jié)構(gòu)使類胡蘿卜素具有獨特的色澤。</p><p>　　類胡蘿卜素在生物體中表現(xiàn)出許多生物學功能[13]，是一種良好的自由基淬滅劑，具有顯著的抗氧化性，可以有效地阻斷細胞內(nèi)的自由基鏈式反應，具有解毒作用，是維護人體健康

31、不可缺少的營養(yǎng)素，在抗癌、防癌方面和預防心血管疾病、白內(nèi)障方面有顯著作用，并能防止老化和衰老引起的多種退化性疾病，因而被認為是治療和預防這些頑疾的理想藥物[14]。</p><p>　　2.2 類胡蘿卜素提取的研究</p><p>　　提取是天然色素生產(chǎn)中較為關鍵的工序[15]之一，其中的影響因素也較多，例如提取工藝的流程，提取溶劑的選擇。一般常見的提取方法有：有機溶劑提取法[16]、酶反

32、應法[17]、微波輔助提取法[18]、超聲波輔助提取法[19]、超臨界流體萃取法[20]等。</p><p>　　不同的浸提溶劑對類胡蘿卜素成分的溶解性不同，提取效果也不一樣[21]。王歲樓[22]、金國英[23]研究表明，用丙酮:石油醚=1:1混合溶劑對紅酵母浸提效果最好；單一溶劑浸提效果以丙酮最好，丙酮浸提效果要明顯高于其他單一溶劑的浸提結(jié)果。從色素提取后的細胞碎片顏色也可以證實上述的結(jié)果[24]。用丙酮:石

33、油醚=1:1混合溶劑和丙酮浸提后的細胞碎片基本呈白色。從理論上講，胡蘿卜素分子結(jié)構(gòu)為非極性，按照“相似相溶”原理，應該選用非極性有機溶劑來浸提色素，然而實驗結(jié)果卻完全相反。這可能與類胡蘿卜素分子結(jié)構(gòu)的空間變化有關。極性有機溶劑的浸提效果明顯好于非極性有機溶劑[25]，與楊文報道的紅酵母實驗結(jié)果有所不同，這可能與菌株不同或操作方法不同有關。一般，采用非極性有機溶劑浸提細胞碎片，需將細胞碎片[26]烘干，這無疑將引起熱對類胡蘿卜素的降解作用

34、而改變了空間結(jié)構(gòu)。</p><p>　　趙豐麗、李秋臨等[27]采用不同極性的溶劑，以柿子皮中類胡蘿卜素的含量為指標，分別用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、及丙酮:石油醚（體積比3:7）等作提取溶劑。通過單因素和正交試驗得出以丙酮為提取溶劑，在柿子皮粉碎度為40目、超聲頻率40kHz、提取兩次條件下，柿子皮中類胡蘿素的最佳提取工藝為：料液比1:25（g:mL）、超聲功率400W、超聲時間20 min。</p&

35、gt;<p>　　李洋、徐雅琴[28]則探討了利用微波輻射提取沙棘中類胡蘿卜素的影響因素，結(jié)果表明：類胡蘿卜素的最大吸收波長為449nm，各因素對類胡蘿卜素提取的影響從高到低為：功率>時間>料液比。最佳工藝條件為：用丙酮作提取劑，微波功率為300W，提取時間為40s，料液比（g/mL）為1:15，提取級數(shù)為三級時，提取效果最好。并由正交實驗確定了微波條件提取沙棘中類胡蘿b素的最佳工藝條件為：提取溶劑丙酮，功率3

36、00W，萃取時問40s，料液比（g/mL）為1:15，提取次數(shù)為三次，能夠比較完全地提取沙棘中類胡蘿卜素。</p><p>　　3、從福壽螺卵內(nèi)提取類胡蘿卜素</p><p>　　根據(jù)目前的研究現(xiàn)狀和我國的具體實際，對于福壽螺研究主要有2個趨勢，一是利用福壽螺獲得高產(chǎn)酶基因，進行克隆表達，從而獲得高效的酶制劑。另外一個趨勢是將集中在對福壽螺及其卵中的各種生物活性物質(zhì)進行研究。特別是后一個趨

37、勢，將大大促進對福壽螺的綜合利用進程，從而為充分利用該資源，并控制其對農(nóng)業(yè)、生態(tài)造成災害發(fā)揮重大作用。本項目切合現(xiàn)今形式，對第二個趨勢所涉及的方面進行研究，以期進一步科學利用治理福壽螺。</p><p>　　而由于β-胡蘿卜素[29]具有營養(yǎng)增補劑和食品著色劑的雙重功效，被廣泛用作飲料、食品及飼料添加劑。β-胡蘿卜素是FAO/WHO食品添加劑聯(lián)合專家委員會確定的A類優(yōu)秀食品添加劑。β-胡蘿卜素已取代焦油系食用色素

38、作為黃-橙色色素用于飲料、人造奶油和冰淇淋等。美國已確認其可安全使用，于1987年批準β-胡蘿卜素可作為食品添加劑用于嬰幼兒食品。它也被廣泛地應用于功能食品中，并有良好的商業(yè)前景。</p><p>　　因此，我們可以在福壽螺卵內(nèi)提取類胡蘿卜素，不僅能夠減少福壽螺的危害，增加附加值，也為食品的天然著色劑的提取對象提供了一個新的選擇。</p><p><b>　　參考文獻：</

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48、39.</p><p>　　[22] 王歲樓, 張平之. 從紅酵母生產(chǎn)β-胡蘿卜素的研究[J]. 山西食品工業(yè), 2000, (2): 13-18. </p><p>　　[23] 金國英. 酵母類胡蘿卜素產(chǎn)生菌的篩選及其發(fā)酵條件的研究[D]. 浙江, 浙江大學, 2001, (6): 1.</p><p>　　[24] 羅璇, 石慧, 郭城等. 產(chǎn)類胡蘿卜素紅酵

49、母細胞壁成分分離及含量檢測方法的研究[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工, 2010, (3): 72-75.</p><p>　　[25] 徐海錢, 錢衛(wèi), 高東等. 紅酵母生產(chǎn)類胡蘿卜素的研究[J]. 工業(yè)微生物, 1997, 27(3): 21-26.</p><p>　　[26] TAKASHI W. Strategiesfor controllingthe apple snail Pomacea

50、 canaliculata(Lamarck)(Gastropoda: Ampullariidae) in Japanese direct-sown paddy fields[J]. JARQ, 2004, 38(2): 75.</p><p>　　[27] 趙豐麗, 李秋臨, 湛玉芬. 柿子皮類胡蘿卜素的超聲提取及抗氧化活性的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2008, 34(8): 183-187.</p&

51、gt;<p>　　[28] 李洋, 徐雅琴. 微波法提取沙棘中類胡蘿卜素最佳工藝的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2008, 29(5): 193-195.</p><p>　　[29] 王海英, 杜為民, 李雯等. 螺旋藻干粉中β-胡蘿卜素提取工藝研究[J]. 中國食物與營養(yǎng), 2010, (6): 64-66.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設計</b

52、></p><p><b>　　（20_ _屆）</b></p><p>　　福壽螺卵中類胡蘿卜素的研究</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 引言1</b></p><p><b>　　2 材料

53、與方法2</b></p><p>　　2.1 主要試劑與設備2</p><p>　　2.1.1 主要試劑2</p><p>　　2.1.2主要設備2</p><p>　　2.2 福壽螺卵的基本理化性質(zhì)2</p><p>　　2.2.1 卵的采集及卵研磨液的制備3</p><p

54、>　　2.2.2 水分含量的測定3</p><p>　　2.2.3 灰分含量的測定3</p><p>　　2.2.4 脂肪含量的測定3</p><p>　　2.2.5 蛋白質(zhì)含量的測定3</p><p>　　2.3 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的選擇3</p><p>　　2.3.1福壽螺卵標準液的配制

55、3</p><p>　　2.3.2 提取溶劑的選擇3</p><p>　　2.3.3 測定方法3</p><p>　　2.4 福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素的比較3</p><p>　　2.4.1 胡蘿卜素的提取3</p><p>　　2.4.2福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素薄層色譜比較4</p>

56、<p>　　2.5 福壽螺卵類胡蘿卜素的抗氧化評價4</p><p>　　2.5.1 FRAP法測定總抗氧化活性4</p><p>　　2.5.2 FeSO4標準曲線的繪制4</p><p>　　2.5.3 抗氧化總值與抗壞血酸對比4</p><p>　　2.6 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的優(yōu)化4</p>

57、<p>　　2.6.1 優(yōu)化工藝條件4</p><p>　　2.6.2 提取液濃度的計算4</p><p><b>　　3 結(jié)果與討論5</b></p><p>　　3.1 福壽螺卵的基本理化特性5</p><p>　　3.2 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的確定5</p><p>

58、;　　3.3 福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素的比較分析6</p><p>　　3.4 抗氧化活性測定結(jié)果8</p><p>　　3.5 單因素試驗結(jié)果與分析9</p><p>　　3.6 部分因子試驗結(jié)果與分析10</p><p>　　3.7 提取條件的優(yōu)化結(jié)果11</p><p><b>　　4 小

59、結(jié)13</b></p><p>　　致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻15</b></p><p>　　摘 要：本文以福壽螺卵為原料，測定了福壽螺卵的水分、灰分、脂肪、蛋白質(zhì)的含量，并采用不同溶劑進行類胡蘿卜素的初步提取，比較了不同提取方法的效果，從而確定氯仿-甲醇體系適宜提取福壽螺卵中類胡蘿卜素。

60、通過改變?nèi)軇w積比、提取溫度、提取時間、超聲波等因素，進行提取方法的優(yōu)化。實驗結(jié)果表明當氯仿:甲醇的溶劑體積比為0.37，提取溫度為39℃，并進行超聲波處理時，對福壽螺卵中類胡蘿卜素的提取效果最好。</p><p>　　關鍵詞：福壽螺卵；類胡蘿卜素；提取 </p><p>　　Abstract：Based on the apple snail eggs as materials in th

61、is page, we determined its content of moisture, ash, fat and protein. Then we extracted the carotenoids in apple snail eggs preliminary with different kinds of solvent, and compared the performance of different extractio

62、n methods, so that we determine the best extraction system is CHCl3-CH3OH system. We optimized the extraction methods by changing the factors like solvent volume ratio, temperature, time, ultrasonic wave. The optimum con

63、dit</p><p>　　Keywords：Apple snail eggs; Carotenoids; Extraction</p><p><b>　　1 引言</b></p><p>　　福壽螺（Apple Snail）又稱大瓶螺，原產(chǎn)于南美洲亞馬遜河流域[1]，因其頭部肉質(zhì)細嫩鮮美，富含蛋白質(zhì)、胡蘿卜素、多種維生素和礦物質(zhì)，在1981

64、年作為食用螺引入中國[2]。福壽螺以植物性飼料[3]為主，主食各種水生植物、陸生草類和瓜果蔬菜，如各種浮萍、水花生、水葫蘆、青菜、青草、瓜皮、水果等，也食人工投喂的糠麩、餅粕類飼料及下腳料等，在食物缺乏的時候也攝食一些殘渣剩餌和腐殖質(zhì)及浮游動植物。但由于人們對福壽螺的危害性[4]缺乏認識，盲目引進，管理不當，同時該物種有生活適應性強、生長迅速、繁殖快等特點[5]，很快成為危害巨大的外來入侵物種，現(xiàn)已對農(nóng)業(yè)以及生態(tài)造成巨大危害[6]。因此

65、圍繞該物種各行業(yè)展開了一系列研究。</p><p>　　對于福壽螺及其卵，不同的研究者就不同的方面進行了少量的研究，比如，張剛生[7]研究了福壽螺卵殼的化學組成；毛孫忠[8]等對福壽螺纖溶酶的進行分離純化并研究了其性質(zhì)。Hears等[9]首次報道了福壽螺卵中具有防止入侵的活性成分，該成分能對卵提供化學防護，對小鼠具有神經(jīng)毒性作用的活性成分?？偟脕碚f，對于福壽螺的研究還不夠系統(tǒng)，也不夠深入。事實上福壽螺體內(nèi)和卵中具

66、有豐富的生物活性物質(zhì)，包括消化系統(tǒng)內(nèi)的消化酶類[10,11,12]，體內(nèi)的抗菌活性的多肽、免疫功能的酶類，以及卵中的強抗氧化和防入侵等活性成分。</p><p>　　Marcos等[13]研究發(fā)現(xiàn)卵紅蛋白在福壽螺卵抗氧化損傷保護系統(tǒng)中具有重要作用，且這種胡蘿卜素糖脂蛋白中類胡蘿卜素成分與其抗氧化能力息息相關。人們普遍接受，類胡蘿卜素可以作為抗氧化劑，特別是在胞膜形式[14]下蝦青素是一種有力的抗氧化的模型。<

67、;/p><p>　　類胡蘿卜素（Carotenoid）是一類廣泛存在于自然界中的天然有色物質(zhì)，通常是指40碳的碳氫化合物（胡蘿卜素）和它們的氧化衍生物（葉黃素）兩大類色素的總稱，其顏色通常為黃色到紅色，屬于脂溶性四萜烯類化合物[15]。類胡蘿卜素一般可分為兩類：胡蘿卜素和葉黃素[16]。前者以β-胡蘿卜素為代表，僅含碳、氫兩種元素，后者則是前者的含氧衍生物，如蝦青素。而我們研究的福壽螺卵中類胡蘿卜素就是蝦青素的一種。

68、</p><p>　　類胡蘿卜素在生物體中能夠表現(xiàn)出許多生物學功能[17]，是一種良好的自由基淬滅劑，具有顯著的抗氧化性，可以有效地阻斷細胞內(nèi)的自由基鏈式反應[18]，具有解毒作用，是維護人體健康不可缺少的營養(yǎng)素，在抗癌、防癌方面和預防心血管疾病、白內(nèi)障方面有顯著作用，并能防止老化和衰老引起的多種退化性疾病，因而被認為是治療和預防這些頑疾的理想藥物[19]。</p><p>　　類胡蘿卜素

69、化合物以其獨特的生物活性引起了國內(nèi)外功能性食品和藥品的開發(fā)熱[20]。其中β-胡蘿卜素[21]具有營養(yǎng)增補劑和食品著色劑的雙重功效，被廣泛用作飲料、食品及飼料添加劑。β-胡蘿卜素的生產(chǎn)方法有化學合成法和天然β-胡蘿卜素生產(chǎn)法兩種。而提取是天然色素生產(chǎn)中較為關鍵的工序[22]之一，其中的影響因素也較多，例如提取工藝的流程，提取溶劑的選擇。一般常見的提取方法有：有機溶劑提取法[23]、酶反應法[24]、微波輔助提取法[25]、超聲波輔助提取

70、法[26]、超臨界流體萃取法[27]等。</p><p>　　本研究先對福壽螺卵的基本理化性質(zhì)進行檢測，預估其提取特點，再對其中的類胡蘿卜素進行初步提取，確定合適的提取溶劑體系。接著對福壽螺卵中提取的類胡蘿卜素進行薄層色譜和分光光度法分析，比較從福壽螺卵提取類胡蘿卜素的經(jīng)濟性。最后結(jié)合眾多文獻的經(jīng)驗，對溶劑體積比、提取溫度、提取時間、和是否進行超聲波這些因素進行單因素、部分因子和響應面分析試驗，進行提取條件的優(yōu)化

71、。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p>　　2.1 主要試劑與設備</p><p>　　2.1.1 主要試劑</p><p><b>　　2.1.2主要設備</b></p><p>　　2.2 福壽螺卵的基本理化性質(zhì)</p>&l

72、t;p>　　不同樣品因為其中水分、脂肪、蛋白質(zhì)的含量不同，直接影響對其中物質(zhì)的提取方式和提取效果，因此實驗最初對樣品福壽螺卵進行了基本理化性質(zhì)的分析，測定了其水分、灰分、脂肪和蛋白質(zhì)的百分含量。</p><p>　　2.2.1 卵的采集及卵研磨液的制備</p><p>　　在水塘、蘆葦蕩[1]等福壽螺卵高產(chǎn)地中，選擇顏色鮮艷、產(chǎn)期靠近的新鮮福壽螺卵進行采集。利用剪刀等工具剪下一段卵塊

73、依附的枝干以避免卵的破裂，從而保持卵塊的完整性。將采集的卵塊放入保鮮袋中，置于冰箱冷藏室中進行保藏待用。需要時稱取適量的福壽螺卵塊，在室溫中靜置片刻，待卵塊略解凍后放入研缽中進行研磨，至研磨液均勻，沒有明顯的卵?；蛘呗褮?。研磨液現(xiàn)配現(xiàn)用，注意避免與空氣的長時間接觸而造成類胡蘿卜素的損失。</p><p>　　2.2.2 水分含量的測定</p><p>　　取5g福壽螺卵研磨液用干燥法測定其

74、水分含量[28]。</p><p>　　2.2.3 灰分含量的測定</p><p>　　取5g福壽螺卵研磨液測定其灰分含量[28]。</p><p>　　2.2.4 脂肪含量的測定</p><p>　　取5g福壽螺卵研磨液用索氏抽提法測定其脂肪含量[28]。</p><p>　　2.2.5 蛋白質(zhì)含量的測定</p

75、><p>　　取5g福壽螺卵研磨液用凱氏定氮法測定其蛋白質(zhì)含量[28]。</p><p>　　2.3 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的選擇</p><p>　　2.3.1福壽螺卵標準液的配制</p><p>　　精確稱取100g均勻的福壽螺卵研磨液，分別裝入50mL離心管中，配平后，在高速冷凍離心機中以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，取中間的澄清

76、液，倒入100mL的容量瓶中，注意避免上層泡沫進入容量瓶。向離心管中加入少量的蒸餾水，蓋好蓋后，搖勻，繼續(xù)用5000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，將中間的澄清液倒入容量瓶中。重復上述步驟至離心管的泡沫和沉淀不為鮮紅色為止，再用蒸餾水定容至100mL，標準液配制完成。標準液如不立即使用，必須放入冰箱保藏室，防止類胡蘿卜素的氧化。</p><p>　　2.3.2 提取溶劑的選擇</p><p>

77、　　類胡蘿卜素為多烯類的脂溶色素，一般不溶于水，而易溶于脂溶性有機溶劑，然而不同的浸提溶劑對類胡蘿卜素成分的溶解性不同，提取效果也不一樣[29]。為充分將原料中的色素提出，本實驗采用一系列不同極性的溶劑，如丙酮、乙酸乙酯、石油醚、正己烷-丙酮混合液及氯仿-甲醇混合液等，以提取物中類胡蘿卜素的含量為指標，篩選出提取效果最好的溶劑體系。</p><p>　　吸取2mL福壽螺卵標準液，分別加入編號離心管中，再加入6mL

78、對應的不同溶劑，充分振蕩0.5h，放入離心機中以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min。</p><p>　　2.3.3 測定方法</p><p>　　由于類胡蘿卜素的分子結(jié)構(gòu)中存在類異戊二烯共軛雙鍵，故吸光性能強，在400-500nm內(nèi)有強的吸收，對類胡蘿卜素進行紫外-可見光光譜掃描在486nm處有最大吸收值。因此，采用分光光度法對提取結(jié)果進行測定。</p><p>

79、　　由于標準胡蘿卜素不穩(wěn)定性，給標準曲線的制備帶來困難，而采用0.2g/LK2Cr207標準溶液制備的標準曲線，與胡蘿卜素標準曲線完全吻合，并操作簡便，重現(xiàn)性好。因此，本試驗以K2Cr207為標樣，在486nm波長處測定吸光度，繪制標準曲線。</p><p>　　2.4 福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素的比較</p><p>　　2.4.1 胡蘿卜素的提取</p><p&

80、gt;　　經(jīng)上述實驗可確定，提取福壽螺卵類胡蘿卜素的最佳提取劑為氯仿:甲醇（體積比為1:3）。稱取2mL胡蘿卜研磨液，加入離心管中，加入6mL氯仿:甲醇（體積比為1:3），充分振蕩半小時，放入離心機中以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，測胡蘿卜素提取液紫外吸收光譜。</p><p>　　2.4.2福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素薄層色譜比較</p><p>　　向由氯仿:甲醇（體積比為1:3

81、）提取的福壽螺卵類胡蘿卜素和胡蘿卜素提取液中分別加入足量無水硫酸鈉脫水。以石油醚:丙酮（體積比為100:3.5）試劑作展開劑，對兩者做薄層色譜分析比較。</p><p>　　2.5 福壽螺卵類胡蘿卜素的抗氧化評價</p><p>　　將標準液稀釋5個梯度，然后進行抗氧化總值的測定，并與抗壞血酸的抗氧化能力進行比對，判定福壽螺卵中的類胡蘿卜素是否具有作為食品添加劑廣泛應用的潛質(zhì)。</p

82、><p>　　2.5.1 FRAP法測定總抗氧化活性</p><p>　　采用FRAP法評價被測樣品的總抗氧化能力，因為抗氧化活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+，F(xiàn)e2+與TPTZ（三吡啶三吖嗪）結(jié)合生成明顯的藍色絡合物，在593nm處有最大吸收光，根據(jù)吸光度的大小來計算樣品的總抗氧化能力。</p><p>　　FRAP工作液的配制：0.3mol/LPH為3.6的醋酸鹽緩

83、沖液，100mmol/LTPTZ溶液，20mmol/LFeCl3溶液，按10:1:1的比例混合，現(xiàn)配現(xiàn)用。</p><p>　　操作步驟：FRAP工作液使用前在37℃水浴預熱，取3mL，加150μL不同濃度樣液，300μL去離子水，在37℃水浴鍋中反應10min，以去離子水代替樣液調(diào)零，在593nm測吸光度。根據(jù)還原力標準曲線，將達到相同吸光度所需的FeSO4濃度記為FRAP值，表示總抗氧化能力的大小。</

84、p><p>　　2.5.2 FeSO4標準曲線的繪制</p><p>　　濃度梯度為50，100，200，400，800，1000μmol/L的FeSO4溶液，以FeSO4溶液濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制。</p><p>　　2.5.3 抗氧化總值與抗壞血酸對比</p><p>　　測定濃度梯度為0，4，8，12，16，20μg/mL的抗壞

85、血酸測定抗氧化總值，測定濃度梯度為0，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10（設標準液濃度為1）的福壽螺卵溶液，繪制趨勢圖，比較兩者的抗氧化能力。</p><p>　　2.6 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的優(yōu)化</p><p>　　提取是天然色素生產(chǎn)中比較重要的工序，提取工藝是否合理，溶劑選擇是否恰當，直接關系到產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，也影響后面工序的進行[29]。對福壽螺卵中類胡蘿卜素

86、的提取，根據(jù)提取物得率，提取液的濃度，對各種提取方法的優(yōu)劣進行評價，從而篩選出合適的提取工藝。</p><p>　　2.6.1 優(yōu)化工藝條件 </p><p>　　在溶劑選擇的基礎上，對所選定的溶劑體系的溶劑體積比進行調(diào)節(jié)，并結(jié)合提取溫度、提取時間、是否微波等因素進行單因素、部分因子和中心組合設計試驗。通過測定提取劑不同層的比色值，推斷出提取劑中提取的類胡蘿卜素的含量，換算出提取率，從而對

87、福壽螺卵中的類胡蘿卜素的提取條件進行評價，進一步優(yōu)化工藝條件。</p><p>　　2.6.2 提取液濃度的計算</p><p>　　將提取液取出，置于1cm比色皿中，同標準曲線制備方法，在486nm處測定吸光度，通過之前得到的重鉻酸鉀標準曲線及其公式，算出提取液濃度。</p><p><b>　　3 結(jié)果與討論</b></p>

88、<p>　　3.1 福壽螺卵的基本理化特性</p><p>　　福壽螺卵的基本理化性質(zhì)測定結(jié)果見下表3-1-1至表3-1-4，即福壽螺卵的水分含量為76.05%，灰分含量為13.97%，脂肪含量為0.69%，蛋白質(zhì)含量為1.22%。</p><p>　　表 3-1-1 福壽螺卵的水分含量</p><p>　　Table 3-1-1 The moistu

89、re content of apple snail eggs</p><p>　　表 3-1-2 福壽螺卵的灰分含量</p><p>　　表 3-1-3 福壽螺卵的脂肪含量</p><p>　　表 3-1-4 福壽螺卵的蛋白質(zhì)含量</p><p>　　Table 3-1-4 The protein content of apple s

90、nail eggs</p><p>　　3.2 福壽螺卵類胡蘿卜素提取方法的確定</p><p>　　重鉻酸鉀標準曲線見圖3-2-1，線性方程：y=0.2626x+0.0036，R2=0.9874，在0.1g-0.8μg/mL范圍內(nèi)有良好線性關系。采用分光光度法對不同試劑的提取結(jié)果進行測定，根據(jù)吸光值在標準曲線中得出福壽螺卵類胡蘿卜素的提取量。最終確定氯仿:甲醇（體積比為1:3）提取效果最

91、佳。</p><p>　　圖 3-2-1 重鉻酸鉀標準曲線</p><p>　　Figure 3-2-1 The standard curve of K2Cr207</p><p>　　表3-2-1 不同提取劑提取液的吸光值</p><p>　　Table 3-2-1 The absorbance of extract in diff

92、erent extraction agents</p><p>　　3.3 福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素的比較分析</p><p>　　圖3-3-1 福壽螺卵類胡蘿卜素提取液光譜圖</p><p>　　Figure 3-3-1 The spectrogram of carotenoids extract in apple snail eggs</p>

93、<p>　　圖3-3-2 胡蘿卜胡蘿卜素提取液光譜圖</p><p>　　Figure 3-3-2 The spectrogram of carotene extract in carrots</p><p>　　圖3-3-1和圖3-3-2分別為福壽螺卵類胡蘿卜素和胡蘿卜中胡蘿卜素在氯仿-甲醇（體積比1:3）體系中提取液的光譜圖，可以看到福壽螺卵類胡蘿卜素的兩個波峰分別為

94、：在486nm時，吸光值為4.752，以及241nm時，吸光值為5.938；而胡蘿卜中胡蘿卜素的兩個波峰分別為：在472nm時，吸光值為0.288，以及在209nm時，吸光值為2.484。</p><p>　　通過比較，我們可以明顯知道福壽螺卵中類胡蘿卜素與胡蘿卜中胡蘿卜素的最大吸收峰波長不同，并且兩者最大吸光值差距很大。就此數(shù)值進行比較，可初步確定福壽螺卵中類胡蘿卜素的含量較胡蘿卜中胡蘿卜素中高。</p&

95、gt;<p>　　因為眾所周知類胡蘿卜素是脂溶性色素，不易溶于水，所以用同一溶劑在不同樣品進行中進行類胡蘿卜素的提取，其提取效果受到樣品中水分、脂肪、蛋白質(zhì)的含量和比例等的影響較大。我們也可以初步判斷福壽螺卵的脂肪應該高于胡蘿卜，而水分含量可能低于胡蘿卜。當然類胡蘿卜素種類繁多，不同樣品中類胡蘿卜素的極性也可能不同，還需要通過進一步實驗進行分析。</p><p>　　表 3-3-1 福壽螺卵和胡蘿

96、卜的成分比較</p><p>　　Table 3-3-1 The ingredients comparison between apple snail eggs and carrots</p><p>　　表3-3-1進一步證實了之前的猜測，福壽螺卵中水分的含量低于胡蘿卜，但是其脂肪、蛋白質(zhì)和類胡蘿卜素的含量都高于胡蘿卜，也證實假如從福壽螺卵中提取類胡蘿卜素，產(chǎn)量應該較胡蘿卜高。<

97、/p><p>　　采用薄層色譜分析胡蘿卜素和福壽螺卵類胡蘿卜素提取液，展開后（石油醚:丙酮=100:3.5）能清晰的分出兩個斑點。根據(jù)斑點的顏色、形狀，可初步判定福壽螺卵類胡蘿卜素與胡蘿卜素的極性不同，它們的組成成分可能不同。</p><p>　　3.4 抗氧化活性測定結(jié)果</p><p>　　硫酸亞鐵標準曲線見圖3-4-1，線性方程：y=0.0006x+0.0001，

98、R2=0.9972，在0-1000μmol/mL范圍內(nèi)有良好線性關系。看圖3-4-2可知，達到同一吸光值所需福壽螺卵類胡蘿卜素的濃度小于抗壞血酸濃度，同等濃度下福壽螺卵類胡蘿卜素的FRAP值大于抗壞血酸，證明福壽螺卵類胡蘿卜素的總抗氧化能力高于抗壞血酸，從福壽螺卵中提取類胡蘿卜素具有可行性。</p><p>　　圖 3-4-1 硫酸亞鐵標準曲線</p><p>　　Figure 3-4-

99、1 The standard curve of FeSO4</p><p>　　圖 3-4-2 硫酸亞鐵標準曲線</p><p>　　Figure 3-4-2 The standard curve of FeSO4</p><p>　　3.5 單因素試驗結(jié)果與分析</p><p>　　以氯仿-甲醇為提取溶劑，在其他條件一致的情況下，分別

100、針對溶劑體積比、提取溫度、提取時間以及是否超聲波等提取條件按表3-5-1進行單因素試驗，結(jié)果見圖3-5-1。</p><p>　　表 3-5-1 單因素試驗設計</p><p>　　Table 3-5-1 The design of single factor experiment</p><p>　　圖 3-5-1 單因素試驗結(jié)果</p>&l

101、t;p>　　Figure 3-5-1 The result of single factor experiment</p><p>　　圖3-5-1所示的吸光值為提取液氯仿層的吸光值，直接代表了提取液的提取率。結(jié)果顯示，在本試驗范圍內(nèi)，不同因素的結(jié)果呈現(xiàn)不同的趨勢。</p><p>　　溶劑體積比：即氯仿:甲醇的體積比，比例越小，提取效果越明顯。提取時間：隨著提取時間的增加，提取效

102、果也逐漸變好，但是時間越久，提取效果增強越不明顯。提取溫度：提取時溫度越高，提取效果越好，但是超過一定限度，可能會對類胡蘿卜素的活性造成破壞。超聲波：使用超聲波的提取效果遠高于未使用超聲波，對類胡蘿卜素的提取有明顯的促進作用。但這些因素的具體影響力，需要進一步分析。</p><p>　　3.6 部分因子試驗結(jié)果與分析</p><p>　　了解溶劑體積比，提取時間，提取溫度和超聲波這些單因素

103、的大概影響之后，需要對這些因素的影響力大小以及他們之間的相互影響程度進行一個量化的測定，于是設計了一個部分因子試驗，研究這些因素中哪些對提取效果有顯著性影響。</p><p>　　試驗測定的是提取液甲醇層的比色值，因為類胡蘿卜素總量統(tǒng)一，甲醇層的比色值越高，說明未提取的類胡蘿卜素越多，提取效果越差。</p><p>　　表 3-6-1 部分因子試驗設計及試驗結(jié)果</p>&

104、lt;p>　　Table 3-6-1 The design and results of FFD</p><p>　　表 3-6-2 部分因子試驗回歸分析結(jié)果</p><p>　　Table 3-6-2 The results of the FFD regression analysis for alginate lyase production</p><

105、p>　　Std. Dev. 0.071 R-Squared 0.9523 Mean 2.46 Adj R-Squared 0.9332 C.V. % 2.88 Pred R-Squared 0.8636 PRESS 0.23 Adeq Precision 20.724</p><p>　　方程系數(shù)R2為0.9523表明此方程有較好的擬合度, 方程與實際情況比較相符, 并能作出相對準確的預測。A

106、dj R2=0.9332校正決定系數(shù)表明僅有約7%的甲醇比色值不能由此模型進行解釋。Curvature F value 為10.39表示響應面中有顯著的彎曲（這是通過中心點和因子點的平均值不同的測量而得知的）。Lack of fit 反映的是實驗數(shù)據(jù)與模型不相符的情況, 它的值等于2.11, 差異不顯著，與整個模型的40.9比起來是很小的, 這表示不符合的數(shù)據(jù)相對于純誤差是不顯著的，也就是說這個模型擬合的較好，能較好的反映實驗結(jié)果。&l

107、t;/p><p>　　由部分因子實驗回歸分析結(jié)果可以看出：對于類胡蘿卜素的提取，溶劑體積比（A）、提取溫度（C）、超聲波（D）是最主要的影響因素，在大于99%的概率水平上影響甲醇比色值的大小。而提取時間（B）在84%的概率水平上對提取效果影響不顯著。溶劑體積比（A）與提取時間（B）、提取溫度（C）分別存在顯著的交互作用。由回歸分析結(jié)果可得一次擬合回歸方程為：</p><p>　　R1 =2.4

108、8+0.23×A+0.026×B+0.16×C-0.043×D+0.067×A×B+0.049×A×C</p><p>　　對該方程的方差分析表明，該模型在99%概率水平上足夠擬合了實驗數(shù)據(jù)。該模型的R2為0.9523，表明95%的實驗數(shù)據(jù)可由該模型解釋。T統(tǒng)計量檢驗結(jié)果表明，析因點的平均響應值與中心點的平均響應值之間有差異顯著性，即