中醫(yī)肝郁證的動物模型研究

1、<p>　　中醫(yī)肝郁證的動物模型研究</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 肝郁 </p><p>　　摘要：綜述了肝郁動物模型的復制方法：藥物造模法和情志刺激造模法 及藥物+情志刺激造模法；概述了肝郁動物模型的病理改變，包括循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免 疫系統(tǒng)及神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的病理改變。評析了肝郁動物模型研究存在的問題。認為建立符合中醫(yī)肝失疏泄病理特點的慢性心理應激 肝郁模型及肝郁模型評

2、價標準，對動物模型病理改變進行多系統(tǒng)、多病種、多指標及多 證型之間的比較觀察，將是今后的努力方向。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：肝氣郁結(jié)； 疾病模型，動物；綜述，指導性 </p><p>　　肝郁氣滯是中醫(yī)許多疾病的共同證候和發(fā)病因素。近年來，隨著生活節(jié)奏的加快，生活壓力 的加大，肝郁致病越來越引起醫(yī)學界的注意。許多研究人員為了探討此證的實質(zhì)，在其病理 生理方面進行了廣泛而深入的研究。動

3、物模型的復制是動物實驗研究成敗與否的關(guān)鍵所在。 科研人員對肝郁證動物模型的復制也作了大量的研究。現(xiàn)將近年來有關(guān)此證的動物模型研究 作一綜述。 </p><p>　　1 肝郁模型的造模方法 </p><p>　　自1979年湖南醫(yī)學院首先用艾葉注射液建立了肝郁證模型以來，國內(nèi)外已相繼出現(xiàn)了許多種 肝郁模型。這些模型主要從兩方面入手，一是用過量或毒性藥物造成急、慢性中毒損傷來復 制模型，二是通

4、過情志刺激改變動物的生理狀況來復制模型。 </p><p><b>　　11藥物造模法 </b></p><p>　　111 艾葉注射法 </p><p>　　艾葉性溫，味苦平，入脾、肝、腎經(jīng)。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其成分(艾葉油)有擬腎上腺的作用， 臨床 口服大量艾葉可引起中毒性肝炎，還對中樞神經(jīng)有興奮作用［１］。湖南醫(yī)學院選用 １９～２８?g的小鼠

5、，腹腔注射，用藥量為?64?g&#12539;kg－１，２?d?1 次， 用藥?４５～６０?d?即出現(xiàn)肝郁癥狀：小鼠活動增加，興奮撕打，不易抓到［ １ ］。另一種方法是選用大鼠以艾葉注射液?2?mL?腹腔注射，2次/d，半月后改為 隔日1次；小鼠以艾葉注射液?06?mL?腹腔注射，1次/d，在注射后?40?d? 左右形成肝郁模型［２］。 </p><p>　　112 腎上腺素皮下注射法 </p>

6、;<p>　　肖純［３］等取動情期大鼠(180～２００?g)子宮內(nèi)膜片段移植于卵巢周圍或腹壁內(nèi) 側(cè)面，術(shù)后４～５?d傷口基本愈合后，以?1g?&#12539;Ｌ－１?腎上腺素?0 15?mL?/只，作皮下注射，每周1次，共4次。3周后，肝郁型子宮內(nèi)膜異位癥動物模型即 成，模型動物具有中醫(yī)“肝郁”的臨床癥狀及腎上腺的病理改變。此造型方法簡便易行，周 期短，成活率高。 </p><p>　　12

7、 情志刺激造模法 </p><p>　　肝郁證的產(chǎn)生多因消極應激及不良情緒體驗所致。因此現(xiàn)在許多研究人員認為造模應從病因 即情志入手，他們用各種自然激怒法復現(xiàn)“怒傷肝，久則郁”的臨床現(xiàn)象來制造肝郁證動物 模型。典型造模法有頸部帶枷單籠喂養(yǎng)法、夾尾激怒打斗法和捆綁法。 </p><p>　　121 頸部帶枷單籠喂養(yǎng)法(模具法) </p><p>　　陳小野［４，５］選

8、用?180～２２１?g?大鼠為實驗對象，將自制的頸部枷鎖 套在大鼠的脖子上，模具影響大鼠日間理毛、撓癢等活動，從而引起大鼠情志變化。7 ～１０?d?后，造模大鼠反應和行為遲緩，皮毛枯黃，眼睛瞇小，有眼眵，甚至目赤， 糞便干、少、小，倦怠食少，爪甲紫暗，尾巴呈棕紅色，且有鱗片出現(xiàn)。 </p><p>　　122 夾尾激怒打斗法 </p><p>　　須惠仁［６］主張用夾尾刺激引發(fā)大鼠打斗的方

9、法造模。他將雄性Wistar遠交系大鼠 ，體重?３００～４００?g，３～７只同置于一籠中，用尖端以紗布包裹的止血 鉗夾 其中1只大鼠的尾巴，令其與其他大鼠打斗，從而激怒全籠的大鼠。每次刺激?30?min ，每隔?3?h?刺激1次，每天刺激4次，2?d?后大鼠間劇烈撕打減弱，飲水和吃 食也明顯減少，甚至不思飲食，多呈困倦狀態(tài)，毛發(fā)變暗、枯黃，體重下降。 </p><p><b>　　123 捆綁法 <

10、;/b></p><p>　　呂志平［７］等采用雄性Wistar大鼠，體重為(240±２8)g，用細繃帶束縛 四肢，使之行走困難，并裝入飼養(yǎng)籠內(nèi)，然后定時觀察并記錄大鼠狀態(tài)。1周后大鼠出現(xiàn)肝 郁表現(xiàn)。趙益業(yè)［９］等用(20±2)g的昆明小鼠以同樣的方法制作肝郁模型 。 另外，還可采用雙后肢立式束縛激怒的方法造模，此法首次刺激?30min?，以后隔天 增加?10?min，共2周［１］。 &

11、lt;/p><p>　　13 藥物+情志刺激造模法 </p><p>　　此法結(jié)合前兩種方法，目前采用的有夾尾加腎上腺素注射法。具體方法如下：取?150?g ?左右的大鼠，用貼有膠布的夾子夾住動物的尾巴，使之保持激怒爭斗狀態(tài)?45?min &#12539;d－１，同時每天皮下注射?1?g&#12539;L－１?腎上腺素 ?02?mL/ 只，造模時間為?30?d［５，９］。肝郁造

12、模大鼠隨著造模時間的增加，逐 漸出現(xiàn)肝郁證的行為學特征：大鼠飲水量增加，容易激惹、咬人，喜歡扎堆、貼邊，大便松 散而特臭［９］。 </p><p>　　2 肝郁模型的病理改變 </p><p>　　中醫(yī)認為肝為剛臟，喜條達，惡抑郁，主疏泄。肝主疏泄功能主要體現(xiàn)在調(diào)暢氣機、調(diào)節(jié)血 量、調(diào)暢情志、以及調(diào)節(jié)脾胃升降和女子胞等功能五個方面。肝失疏泄會導致這五個方面的 失常。有學者認為，肝郁證是對抑

13、郁、焦慮、悲痛等負性情緒心理應激狀態(tài)下，以高級神經(jīng) 中樞調(diào)節(jié)機制紊亂為前提，神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、循環(huán)、消化、感覺、運動等多個系統(tǒng)的某 些病理改變、病癥表現(xiàn)的有機概括［１０］。 </p><p>　　21 肝郁模型循環(huán)系統(tǒng)的病理改變 </p><p>　　肝主疏泄對維持氣血條達起重要作用，肝郁則氣行不利、血行不暢。實驗研究表明，肝郁能 夠?qū)е聶C體微循環(huán)障礙和血液流變學的改變。呂志平［７］為了

14、揭示“肝郁致瘀”的 機理，測定肝郁大鼠模型(捆綁法造模)血漿6-酮-前列腺素Ｆ１α(6-keto-PGF１α )、血栓烷素Ｂ２(ＴＸＢ２)和肝微區(qū)、胃微區(qū)血細胞灌注量(blood cell pouring amo unt,BCPA)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與正常對照組和逍遙散服藥組比較，肝郁大鼠模 型血漿TXB２明顯升高，６ketoPGF１α明顯降低，6ketoPGF１α／ＴＸＢ ２比 值明顯下降(Ｐ＜００1)，肝微區(qū)、胃微區(qū)ＢＣＰＡ顯著減少( Ｐ

15、＜００1)。須惠仁［６］等在對肝郁模型組(夾尾法造模)做血液流變學 檢查中發(fā)現(xiàn)：肝郁動物的血小板的含量要比對照組多58%，全血粘度、血漿比粘度明顯高于 對照組(Ｐ＜００1)，復鈣時間比對照組明顯延長，其相應的粘度上升 率、紅細胞比容則明顯減少，血沉顯著快于對照組(Ｐ＜００1)。 </p><p>　　22 肝郁模型消化系統(tǒng)的病理改變 </p><p>　　肝郁則橫克脾土，因此肝郁亦會對消化

16、系統(tǒng)造成影響。張小麗［１１］研究暢胃膠囊 對肝郁癥大鼠(夾尾加腎上腺素注射法造模)的治療作用時，發(fā)現(xiàn)肝郁癥模型組的大鼠(與空 白對照組比較)胃體、胃小彎、胃竇部的漿膜血管均增大、增粗、明顯瘀血，胃粘膜有較多 的白色苔狀物，部分動物有出血點，胃體發(fā)紅發(fā)暗。鄒世潔等［１２］觀察慢性萎縮 性胃炎模型大鼠(捆綁法造模)的胃腸內(nèi)分泌情況，發(fā)現(xiàn)肝郁胃炎組胰高血糖素含量、胃動 素含量降低較其他組明顯。張沁園［１３］運用酶組織化學技術(shù)、電鏡技術(shù)探討肝氣

17、 郁 大鼠(捆綁法造模)和肝氣逆大鼠的小腸吸收功能，結(jié)果證明上述二證型在小腸肌電活動、吸 收細胞的酶活性和超微結(jié)構(gòu)三方面均低于正常組(Ｐ＜００1或 Ｐ＜００５)，而肝氣郁組顯著低于肝氣逆組(Ｐ＜００５) 。呂志平等［１４］發(fā)現(xiàn)肝郁造模組大鼠(捆綁法造模)肝細胞超微結(jié)構(gòu)較空白對照組 明顯腫脹，基質(zhì)減少，線粒體部分溶解，內(nèi)外膜結(jié)構(gòu)不清，核膜模糊，染色質(zhì)減少，細胞膜 溶合，胞漿內(nèi)成分嚴重脫落；肝郁服藥組病理改變明顯減輕。呂志平［１５］還報道

18、肝郁造模組大鼠的肝細胞、血漿丙二醛(MDA)明顯高于空白對照組，肝 細胞、 紅細胞超氧</p><p>　　23 肝郁模型免疫系統(tǒng)的病理改變 </p><p>　　國外有文獻報道，消極應激及不良情緒體驗可導致機體細胞免疫、產(chǎn)生抗體及細胞因子功能 降低［１６］，說明肝郁證有某些免疫功能的變化。國內(nèi)也有實驗證明肝郁對免疫系 統(tǒng)造成破壞。陳松等［１７］發(fā)現(xiàn)肝郁證模型(夾尾加腎上腺素注射法造模)大

19、鼠T、B 淋巴細胞轉(zhuǎn)化率顯著升高，IgM水平顯著降低，認為肝郁證淋巴細胞活性增強。劉蓮等 ［１８］在實驗中發(fā)現(xiàn)，肝氣郁結(jié)證大鼠(模具法造模)免疫器官重量明顯減輕；T細胞亞 群比例失衡；白細胞介素2水平降低；血漿皮質(zhì)酮水平明顯升高(均為Ｐ＜ ００1)。嚴燦等［１９，２０］在實驗中發(fā)現(xiàn)肝郁大鼠(夾尾加腎上腺素注射法造 模)的胸腺、脾臟重量較正常對照組明顯減輕，腹腔巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)降低， 腎 上腺糖皮質(zhì)激素水平升高，與正常對照組比

20、較有顯著性差別。提示肝郁大鼠下丘腦―垂體― 腎上腺軸的興奮性升高，出現(xiàn)免疫抑制狀態(tài)。趙益業(yè)［８］發(fā)現(xiàn)肝郁造模組動物(捆 綁法造模)脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、溶血素水平低于正常組，白細胞介素2產(chǎn)生能力明顯抑制，而 逍遙散對其有改善作用。從而認為免疫學異常，免疫力低下是肝郁證的重要發(fā)病環(huán)節(jié)。 </p><p>　　24 肝郁模型神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的病理改變 </p><p>　　王希浩等［２１］選用有正常

21、性周期的雌性大鼠，采用夾尾刺激法復制肝郁模型。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在激怒狀態(tài)下，大鼠出現(xiàn)性周期紊亂，連續(xù)給予刺激的第7天，雌性大鼠血清卵泡 刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕激素(P)水平下降，雄激素(T)水平升高 ，與正 常對照組比較，均有顯著性差異，提示肝郁雌性大鼠的垂體和卵巢功能顯著降低。神經(jīng)遞 質(zhì)的測定能夠反映機體的植物神經(jīng)功能，喬明琦等［２２］研究發(fā)現(xiàn)肝郁大鼠(模具 法造模)下丘腦去甲腎上腺素(NE)顯著低于正常對

22、照組，腎上腺素、多巴胺(DA)、5-羥色胺( 5- HT)顯著高于正常對照組，高香草酸降低，但未達到顯著性水平；肝、心、腎、腎上腺器官 中上述指標呈現(xiàn)類似改變，認為肝主疏泄與調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。毛海燕［２３］ 觀察模具法造模1周和4周的肝郁證大鼠中樞神經(jīng)遞質(zhì)變化，得出如下結(jié)論：造模1周組各 腦區(qū)5-HT無顯著變化，DA含量減少(Ｐ＜００1或Ｐ＜ ００５)；造模4周組各腦區(qū)的5-HT含量與正常對照組比較增多(Ｐ＜０ ０1)，DA含量顯

23、著升高(Ｐ＜００1)，經(jīng)疏肝法治療后降至正常。植 物神經(jīng)系統(tǒng)釋放的遞質(zhì)，內(nèi)分泌腺釋放的激素和生</p><p><b>　　3 問題與展望 </b></p><p>　　中醫(yī)“證”是疾病的病因、病位及病邪性質(zhì)的概括，且臨床多以病人主觀感覺反映出來，確 切的 客觀指標尚在探索之中，一些客觀表現(xiàn)如舌象、脈象、神志等不易在動物身上模擬出來，因 而加大了中醫(yī)證候模型復制的難度

24、。藥物造模如艾葉、腎上腺素等均造成了實質(zhì)性肝臟的急 慢性損傷，然而中醫(yī)肝郁證并不等于肝臟的實質(zhì)性損傷，同時藥物也會影響動物多個器官系 統(tǒng)的功能。情志造模引起動物心理應激反應，與中醫(yī)肝郁病因相關(guān)，但仍存在三個問題值得 深入探討。一是“怒傷肝”與肝郁的關(guān)系，怒傷肝會導致肝郁，但同樣會導致肝陽上亢；出 現(xiàn)何種證型是取決刺激量還是動物品系?二是中醫(yī)的肝郁并不都產(chǎn)生于怒， 所有 的情志不暢，郁而不發(fā)均可產(chǎn)生肝郁證，如社會壓力過大或不得志、傷感又無

25、處傾訴也可產(chǎn) 生肝郁證，而臨床上多產(chǎn)生于這種情況。因而這種怒傷肝導致的肝郁模型與臨床上出現(xiàn)的肝 郁亦存在著一些差別。三是上述肝郁模型的表現(xiàn)不盡相同，目前仍無統(tǒng)一的評價標準。肝郁 證的基本病變是肝失疏泄，從目前掌握的資料分析，肝郁證涉及神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分 泌系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)等多系統(tǒng)功能改變。在研究這些病理改變時，大多采取情志刺激造模 法，各指標的改變與</p><p>　　筆者認為中醫(yī)證候動物模型的研究方法

26、當以中醫(yī)的病因病機理論為準則，既要符合中醫(yī)的致 病因素，又要符合臨床自然發(fā)病的實際過程。我們應采取多種復合方法，模擬中醫(yī)情志因素 ，不斷驗證、充實、完善，復制出符合中醫(yī)病因病機的肝郁模型，同時形成一套統(tǒng)一的肝郁 模型評價標準。我們在研究肝郁證的病理改變時，要遵循中醫(yī)病因病機學說，進行多系統(tǒng)、 多病種、多指標的同步研究；不僅要與空白對照組進行比較，還要在多種證型之間進行 比較，以便更深入地揭示肝郁證的實質(zhì)，為中醫(yī)辨證客觀化提供診斷依據(jù)。

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