利谷隆致雄性仔鼠的生殖毒性及其機制研究.pdf

1、目的：探討利谷隆致雄性仔鼠的生殖毒性及其機制。
　　 方法：孕期妊娠第13-18天時用花生油溶解利谷隆(0、50、100、150、200mg/kg)灌胃染毒，于孕期妊娠(GD)20天各組解剖數(shù)只孕鼠，提取雄性胎鼠尿生殖結節(jié)和睪丸做病理切片；于雄性子代出生后28d測量肛殖距(anogenital distance，AGD)和稱重；于雄性子代出生后第2天用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbentass

2、ay，ELISA)檢測睪酮激素水平；在胚胎20d解剖孕鼠，提取雄性胎鼠睪丸做電鏡觀察睪丸間質(zhì)細胞的超微結構的變化、免疫組織化學檢測睪丸間質(zhì)細胞中P450scc、3β-HSD、PCNA蛋白，AR的表達情況，用實時熒光定量的RT-PCR實驗檢測睪丸間質(zhì)細胞中P450c17、17β-HSD、PCNA、AR基因表達情況。
　　 結果：1.各組之間雄性仔鼠體重無明顯差異。在一定的劑量范圍內(nèi)，隨著染毒劑量的增加，用藥組AGD隨之有縮短的趨勢

3、。2.LIN染毒組與空白LIN Omg/kg對比，病理見睪丸索變細，睪丸內(nèi)各細胞空泡變性，核固縮增多。3.LIN染毒組雄性子代出生后第2d睪酮激素水平較LIN Omg/kg降低。4.電鏡觀察結果：睪丸間質(zhì)細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，線粒體腫脹。5.免疫組織化學結果：在睪丸間質(zhì)細胞中P450scc酶、3β-HSD、PCNA蛋白表達降低(P均<0.05)，AR蛋白表達與LIN Omg/kg相近(P>0.05)。6.實時熒光定量的RT-PCR實驗顯示

4、：在睪丸間質(zhì)細胞中P450c17基因，17β-HSD、PCNA基因表達減弱(P均(0.05)，AR基因表達與LIN Omg/kg相近(P>0.05)。
　　 結論：孕期暴露LIN可透過胎盤屏障，對雄性仔鼠造成如下影響：1.各染毒組與LINOmg/kg之間體重無差異。在一定的劑量范圍內(nèi)，隨著染毒劑量的增加，染毒組AGD隨之有縮短的趨勢。2.染毒組與空白LIN Omg/kg對比病理見睪丸索變細，睪丸內(nèi)各細胞空泡變性，核固縮增多。3.

5、ELISA顯示：除染毒組50mg/kg外，其以上劑量可使睪酮激素水平降低，可見睪酮激素分泌水平與染毒劑量之間具有劑量效應關系。4。電鏡觀察結果證實了LIN能夠引起大鼠睪丸間質(zhì)細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，線粒體腫脹，從而導致睪酮激素的合成障礙。5.免疫組化顯示LIN能夠降低睪丸間質(zhì)細胞中合成睪酮代謝酶P450scc和3β-HSD，PCNA酶蛋白的活性表達，從而影響睪酮的產(chǎn)生。6.實時熒光定量的RT-PCR實驗顯示：LIN降低了P450c17，17