雙酚A對SD大鼠雄性生殖發(fā)育毒性及機(jī)制的研究.pdf

1、雙酚A(BisphenolA，BPA)是環(huán)境雌激素的一種，是一類苯酚衍生物，廣泛應(yīng)用于殺真菌劑、染料及制造機(jī)械儀表、醫(yī)療器械、食品包裝材料等，環(huán)境分布廣泛。許多環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的實驗研究結(jié)果證實BPA具有模擬雌激素的作用，可以模擬雌激素與體內(nèi)雌激素受體結(jié)合，干擾機(jī)體的內(nèi)分泌代謝，導(dǎo)致健康危害效應(yīng)。目前，有關(guān)BPA對SD大鼠F1雄性子代生殖發(fā)育毒性和功能損傷機(jī)制的報道相對較少，本研究選擇BPA為研究對象，通過體內(nèi)實驗探索BPA對斷乳期F1

2、雄性子代SD大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育的影響以及體外實驗研究BPA對大鼠睪丸支持細(xì)胞(Sertolicells)功能的影響及其損傷機(jī)制。 從孕O天對母鼠染毒50mg／kg、1.00mg／kg、200mg／kgBPA至斷乳期停止染毒，觀察n雄性子代性器官發(fā)育及體內(nèi)性激素水平的變化，并對睪丸的Bax、Bcl-2、PCNA、ER、HSP70、Vimentin的表達(dá)進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)O親代母鼠經(jīng)BPA持續(xù)染毒后，斷乳期末200

3、mg／kgBPA實驗組FO親代母鼠血清PRL水平顯著升高，100mg／kg、200mg／kg組E2水平顯著升高。F1子代，BPA染毒劑量與血清E2水平呈正相關(guān)，與血清T水平呈負(fù)相關(guān)，200mg／kgBPA組FSH下降，100mg／kg、200mg／kg組睪丸臟器系數(shù)較對照組明顯減小。免疫組織化學(xué)結(jié)果可見實驗組睪丸Bax在生精小管上皮表達(dá)增強(qiáng)，Bcl-2和PCNA表達(dá)減弱，說明睪丸增殖減弱，凋亡增強(qiáng)，提示實驗組生精小管發(fā)育滯后。此外生精上

4、皮的ER表達(dá)實驗組均低于對照組，提示ER調(diào)控的各種轉(zhuǎn)錄和表達(dá)受阻。HSP70在生精細(xì)胞中的表達(dá)也明顯下降，由于它參與生精細(xì)胞的減數(shù)分裂，說明BPA能阻礙初級精母細(xì)胞發(fā)育成為次級精母細(xì)胞和精子細(xì)胞。BPA能抑制睪丸支持細(xì)胞波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)，且隨著染毒劑量增高，表達(dá)減弱，提示BPA影響支持細(xì)胞骨架。 在體外分離培養(yǎng)SD大鼠睪丸支持細(xì)胞，設(shè)置空白對照和溶劑對照組，通過MTT法測定細(xì)胞增殖和FCM分析細(xì)胞周期分布，BP

5、A使睪丸支持細(xì)胞的存活率大大降低，且干擾其細(xì)胞周期分布。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，10-4mol／L、10-Smol／LBPA實驗組顯著抑制大鼠睪丸支持細(xì)胞PCNA的表達(dá)，說明BPA能抑制大鼠睪丸支持細(xì)胞正常增殖。BPA在10-4mol／L、10'5mol／L、10-6mol／L劑量組顯著抑制大鼠睪丸支持細(xì)胞內(nèi)Vimentin的表達(dá)，說明BPA能直接影響支持細(xì)胞骨架，干擾其功能。通過本研究發(fā)現(xiàn)，BPA導(dǎo)致F1雄性子代生殖發(fā)育毒性的機(jī)制，既有