杉木木材形成相關擴展蛋白基因組織定位研究.pdf

1、本研究在課題組已有的杉木分子木材形成的分子生物學研究基礎上，利用RNA原位雜交技術對擴展蛋白基因ClEXP2在莖段組織中的表達進行了空間定位。主要結果如下：
　　 1.用杉木基因型020的當年生莖段為實驗材料，制作石蠟切片。結果顯示組織切片清晰完整。
　　 2.本研究中，用NBT/NCIP顯色法對石蠟組織切片中內源性堿性磷酸酶進行檢測顯示，被檢組織具有高豐度的藍紫色斑點，且集中分布于髓、韌皮部和皮層中。這說明在本實驗的活

2、體組織切片中內源性的堿性磷酸酶具有活性，必須在原位雜交實驗中進行內源性堿性磷酸酶的封阻。
　　 3.通過設計5’端加有酶切位點的特異引物擴增得到CLEXP2基因的280bp特異序列，構建至含有T7啟動子的T載體，經線性化處理陽性克隆質粒，并以此為模板，合成了帶有地高辛標記的CLEXP2基因mRNA反義探針。
　　 4.在用CLEXP2基因mRNA反義探針進行反復的原位雜交實驗中發(fā)現(xiàn)，僅在實驗組中檢測到反義探針所具有的雜交