VEGF基因組織工程聯(lián)合ERK通路干預(yù)減輕硬膜外瘢痕形成的研究.pdf

1、目的:
　　 體外轉(zhuǎn)染人血管內(nèi)皮生長因子165(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF165)基因于大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并與自體脂肪顆粒混合回植入大鼠腰椎椎板切除術(shù)后缺損區(qū)、同時(shí)腹腔注射ERK信號通路抑制劑，通過對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)本的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)及分子生物學(xué)等指標(biāo)的檢測，觀察其自體脂肪移植的存活率、VEGF與ERK信號通路之間的相關(guān)性，以預(yù)防椎板切除術(shù)后硬膜外瘢痕形成及粘連。
　　 方法:<

2、br>　　 (1)體外慢病毒轉(zhuǎn)染VEGF165基因于大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代、純化、培養(yǎng)，待細(xì)胞狀態(tài)良好，準(zhǔn)備混合種子細(xì)胞植入大鼠體內(nèi)。
　　 (2)將56只SD大鼠隨機(jī)分成4組:A組為含有VEGF165干細(xì)胞-脂肪顆粒和透明質(zhì)酸鈉凝膠復(fù)合物植入組;B組為含有干細(xì)胞-脂肪顆粒和透明質(zhì)酸鈉凝膠復(fù)合物植入組;C組為脂肪細(xì)胞顆粒和透明質(zhì)酸鈉凝膠復(fù)合物植入組;D組為空白對照組。A組與D組里隨機(jī)分成2小組:ERK干預(yù)組和未干預(yù)組。

3、r>　　 (3)大鼠麻醉后，術(shù)區(qū)定位、消毒，背部正中縱行切開，向下鈍性分離，充分暴露，切除L1～L3棘突及椎板，造成椎板缺損模型，分別植入A、B、C、D各組復(fù)合物。術(shù)后觀察一天，術(shù)后第二天開始ERK干預(yù)組腹腔注射ERK抑制劑U0126(0.1mg/kg)，未干預(yù)組等量腹腔注射DMSO，每天1次。
　　 (4)術(shù)后4、8、12周分別處死大鼠并制作標(biāo)本。大體觀察按改良Rydell-Balazs標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行粘連程度評分;組織學(xué)HE染色觀

4、察脂肪移植存活和硬膜外瘢痕形成情況，按改良Nussbaum標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分;免疫組化檢測P-ERK1/2表達(dá);WesternBlot檢測VEGF在體內(nèi)表達(dá)量，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 ①大體觀察:A組瘢痕粘連最輕，可見較多脂肪組織，B、C組其次，D組瘢痕粘連嚴(yán)重;
　　 ②HE染色觀察:A組4周、8周、12周硬膜外可見較多存活脂肪顆粒，瘢痕粘連輕，D組4周時(shí)已形成較多致密瘢痕粘連，8周時(shí)最嚴(yán)重，12周時(shí)仍有瘢

5、痕粘連，B組與C組介于A、D兩組之間;
　　 ③免疫組化:ERK干預(yù)組與未干預(yù)組比較P-ERK表達(dá)明顯減少(P＜0.01)，A組聯(lián)合未干預(yù)組與D組聯(lián)合未干預(yù)組比較P-ERK表達(dá)少，有差異(P＜0.05);
　　 ④12周時(shí)WesternBlot檢測VEGF蛋白表達(dá)A組明顯高于其它組。
　　 結(jié)論:
　　 VEGF165基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞混合自體脂肪顆粒移植體內(nèi)能有效提高脂肪移植存活率，在硬膜外形