FrzA基因轉(zhuǎn)導(dǎo)干預(yù)Wnt信號(hào)通路減輕TNF-α誘導(dǎo)心肌細(xì)胞炎癥損傷的研究.pdf

1、目的：以雙鏈重組 AAV9(dsAAV9)型腺相關(guān)病毒為載體介導(dǎo)的FrzA基因轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞炎癥損傷模型，觀察是否能抑制心肌細(xì)胞 Wnt通路表達(dá)活性，從而減輕心肌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活。
　　方法：利用 TNF-α刺激 H9c2心肌細(xì)胞建立心肌細(xì)胞炎癥損傷模型，模擬體內(nèi)心肌缺血狀態(tài)， MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性及 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率，確定 TNF-α最佳濃度。dsAAV9介導(dǎo) FrzA基因轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞

2、， Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞 Wnt通路關(guān)鍵分子蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞 Wnt通路關(guān)鍵分子 mRNA的表達(dá)。Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)， AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率的變化。
　　結(jié)果：
　?。?）免疫熒光結(jié)果顯示心肌細(xì)胞的純度可達(dá)到98％以上。
　?。?） MTT與 AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示 TNF-α濃度對(duì)心

3、肌細(xì)胞活性的影響是以劑量依賴的方式，隨著 TNF-α的濃度增加，心肌細(xì)胞活性降低，細(xì)胞凋亡率增高，應(yīng)選擇濃度50μg/L的TNF-α來(lái)建立心肌細(xì)胞炎癥損傷模型。
　?。?） Western blot及 RT-PCR結(jié)果均顯示 TNF-α可有效激活 Wnt信號(hào)通路，且 FrzA基因轉(zhuǎn)染可抑制 Wnt信號(hào)通路的活性。
　　（4） Western blot及 AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示，TNF-α激活 Wnt信

4、號(hào)通路后，細(xì)胞凋亡增多。而 dsAAV9介導(dǎo) FrzA基因轉(zhuǎn)導(dǎo)可有效減輕 TNF-α誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡，并且這種抗凋亡作用有可能正是通過(guò)抑制 Wnt信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　結(jié)論：CMV啟動(dòng)子介導(dǎo)的dsAAV9載體可高效的轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，TNF-α刺激體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可建立心肌細(xì)胞炎癥損傷模型，模擬體內(nèi)心力衰竭狀態(tài)，激活 Wnt信號(hào)通路，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。DsAAV9介導(dǎo) FrzA基因轉(zhuǎn)染可抑制心肌細(xì)胞 Wnt信號(hào)通路的表達(dá)活性，可