αBC對LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建LPS誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞炎癥損傷模型，觀察αBC對LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用，并闡明其可能機(jī)制。 方法：1.將大鼠心肌H9c2細(xì)胞于42.5℃水浴箱中熱休克1h，然后恢復(fù)37℃，5％CO2恒溫培養(yǎng)0min，30min，60min，6h，12h，24h后收集細(xì)胞，并收集未作熱休克處理的細(xì)胞作為對照，免疫印跡檢測Hsp25，Hsp27，Hsp90以及αBC的表達(dá)。 2.(1)對高表達(dá)αBC的大鼠心肌細(xì)

2、胞以及野生型大鼠心肌細(xì)胞，采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min，1h，2h，同時(shí)采用未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對照，提取蛋白用于免疫印跡檢測IKB激活。(2)對H9c2大鼠心肌細(xì)胞株瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NFkB-luc質(zhì)粒、pRL-SV40質(zhì)粒、PCI或PCI-αBC質(zhì)粒，采用LPS(100ng/ml)培養(yǎng)2h后收集細(xì)胞，同時(shí)將未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對照，進(jìn)行NF-kB報(bào)告基因活性的檢測。 3.對高表達(dá)αBC的大鼠心

3、肌細(xì)胞以及野生型大鼠心肌細(xì)胞，采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min，1h，2h，同時(shí)采用未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對照，提取蛋白用于免疫印跡檢測Akt以及MAPK信號通路的激活。 結(jié)果： 1.H9c2細(xì)胞熱休克處理后恢復(fù)不同時(shí)間點(diǎn)，Hsp90表達(dá)未見顯著性變化。Hsp25，Hsp27以及αBC均于恢復(fù)1h起表達(dá)開始上調(diào)(P<0.05)， 12h達(dá)高峰，其后略有下降。 2.αBC對大鼠心肌細(xì)胞LPS

4、誘導(dǎo)NF-kB激活具有保護(hù)作用(1)αBC高表達(dá)減少LPS誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞IkB的激活。LPS處理后30min起IkB即降解(P<0.05),至1h進(jìn)一步降解，且αBC及對照組間有顯著性差異(P<0.05),隨后恢復(fù)，至2h兩者均基本恢復(fù)至正常水平。(2)大鼠心肌細(xì)胞中αBC抑制了LPS誘導(dǎo)的NF-kB激活。NF-kB報(bào)告基因檢測顯示，LPS處理后2hNF-kB已被激活(P<0.05)，且αBC組顯著低于PCI組(P<0.05)。

5、 3.(2)αBC高表達(dá)減少LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞MAPK通路的激活。LPS處理30min起，H9c2細(xì)胞JNKs，ERKs，P38即被激活，至2h αBC組JNKs，ERKs，P38磷酸化激活程度均顯著低于對照組(P<0.05)。(3)αBC高表達(dá)增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞Akt通路的激活。LPS處理30min后，H9c2細(xì)胞Akt磷酸化水平增加(P<0.05)，但與對照組相比較，30min和2h時(shí)間點(diǎn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染aBC組的Akt磷