Wnt-β-catenin通路介導(dǎo)MSCs對損傷心肌細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　通過提取培養(yǎng)心肌細(xì)胞及建立損傷心肌細(xì)胞模型，研究Wnβ-catenin信號通路是否參與心肌細(xì)胞凋亡，并將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與損傷心肌細(xì)胞共培養(yǎng)，進(jìn)一步探討Wnt/β-catenin信號通路及心肌細(xì)胞凋亡的變化，為損傷心肌細(xì)胞的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療提供一定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　[方法]
　　應(yīng)用酶消化法及差速貼壁法獲得乳鼠原代心肌細(xì)胞，用免疫組化法檢測所獲得細(xì)胞中有無α-橫紋肌肌動蛋白(α-smooth mu

2、scle actin，α-SMA)以鑒定心肌細(xì)胞。用1mg/L阿霉素(Adriamycin，ADR)建立損傷心肌細(xì)胞模型[1]，據(jù)不同的損傷時(shí)間將心肌細(xì)胞分為A、B、C、D四組，A: ADR損傷心肌細(xì)胞12h，B: ADR損傷心肌細(xì)胞24h，C:ADR損傷心肌細(xì)胞48h，D:正常心肌細(xì)胞組，應(yīng)用Western blot法檢測各組的Wnt2、β-catenin及p53蛋白的表達(dá)差異。
　　進(jìn)一步分離、鑒定并培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bo

3、ne marrowmesenchymal stem cells，BMSCs)，將心肌細(xì)胞分為三組:E:正常心肌細(xì)胞組，F(xiàn):損傷心肌細(xì)胞組，G: BMSCs與損傷心肌細(xì)胞共培養(yǎng)組。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測各組心肌細(xì)胞凋亡率，應(yīng)用Western blot法檢測β-catenin、c-myc、p53蛋白的表達(dá)。
　　[結(jié)果]
　　1.對獲得的乳鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行α-橫紋肌肌動蛋白檢測，染色呈陽性，提示體外培養(yǎng)的細(xì)胞為心肌細(xì)胞。

4、r>　　2.對A、B、C、D四組進(jìn)行wnt2、β-catenin及p53蛋白檢測，結(jié)果顯示，wnt2蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.24+0.04、1.15+0.05、0.35+0.05，β-catenin蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.21+0.04、0.34+0.04、0.71+0.04，p53蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.17+0.03、0.61+0.40、0.83+0.04，wnt2、β-catenin及p53蛋白

5、在A、B、C組的表達(dá)量逐漸增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Wnt-2、β-catenin和p53在D組中無表達(dá)，Wnt-2和β-catenin相關(guān)系數(shù)為0.314、wnt2和p53相關(guān)系數(shù)為0.584，其中p53與β-catenin的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.940)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。推測Wnt/β-catenin信號通路參與心肌細(xì)胞的損傷過程。
　　3.E組心肌細(xì)胞凋亡率為(0.74±0.65)％，

6、F組為(26.58±3.89)％，G組為(7.72±0.90)％，經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)組的凋亡率高于E、G組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.E組β-catenin、c-myc及p53三種蛋白表達(dá)不能測出，F(xiàn)組的β-catenin，c-myc，p53蛋白表達(dá)水平均高于G組，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。β-catenin與c-myc的相關(guān)系數(shù)為0.942、β-catenin和p53的相關(guān)系數(shù)為0.852，c-