wnt-β-catenin信號通路對膿毒癥急性肺損傷的影響.pdf

1、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是感染、創(chuàng)傷、中毒、急性胰腺炎、休克等心源性因素以外的各種肺內(nèi)外致病因素導致的急性、進行性、頑固性低氧血癥和呼吸衰竭。目前，ARDS病理生理機制還不是很清楚。其病理改變主要表現(xiàn)為：肺泡上皮細胞損傷，肺血管內(nèi)皮細胞損傷并毛細血管通透性增大，大量膠原蛋白沉積，大量炎癥細胞浸潤并釋放過量炎性介質(zhì)，肺泡水腫或者塌陷、肺泡間隔增寬和肺纖維化的形成。有研究發(fā)現(xiàn)wnt/β-catenin信號通路在ARDS患者的肺泡上皮細

2、胞損傷和肺組織纖維化過程過中被異常激活，這提示W(wǎng)nt/β-catenin信號通路可能在ARDS過程中起作用。考慮到Wnt/β-catenin信號通路可能參與ARDS過程，本實驗以Wnt/β-catenin信號通路為研究靶點，采用盲腸結(jié)扎（CLP）術(shù)建立SD大鼠膿毒癥急性肺損傷模型；通過腹腔注射XAV939小分子化合物抑制Wnt/β-catenin信號通路來觀察Wnt/β-catenin信號通路對膿毒癥急性肺損傷的影響。這將為通過調(diào)節(jié)Wn

3、t/β-catenin信號通路來治療膿毒癥急性肺損傷這一新策略提供重要的理論基礎(chǔ)。
　　考慮到Wnt/β-catenin信號通路可能參與ARDS過程，本實驗以Wnt/β-catenin信號通路為研究靶點，采用盲腸結(jié)扎（CLP）術(shù)建立SD大鼠膿毒癥急性肺損傷模型；通過腹腔注射XAV939小分子化合物抑制Wnt/β-catenin信號通路來觀察Wnt/β-catenin信號通路對膿毒癥急性肺損傷的影響。這將為通過調(diào)節(jié)Wnt/β-cat

4、enin信號通路來治療膿毒癥急性肺損傷這一新策略提供重要的理論基礎(chǔ)。
　　研究目的：
　　探討Wnt/β-catenin信號通路對膿毒癥急性肺損傷的影響。
　　研究方法：
　　選取250±10g健康成年SD雄性大鼠50只，隨機分為三組：第一組：對照組（control組），共10只，僅進行麻醉后，打開腹腔，找到盲腸后放回腹腔，給予縫合處理；第二組：膿毒癥急性肺損傷組（CLP組），共20只，具體操作過程見實驗部分；第

5、三組：用藥組（CLP+XAV939組），共20只，在CLP術(shù)后， CLP+XAV939組大鼠在術(shù)后第一天和第二天給予腹腔注射XAV939處理，具體操作過程見實驗部分。
　　觀察對照組、CLP組和CLP+XAV939組三組大鼠之間活動度以及死亡率的差異。48小時后處死大鼠并取大鼠肺組織進行下一步檢測。采用Westen-Blot（WB）技術(shù)檢測肺組織內(nèi)Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白的表達情況和肺組織內(nèi)炎性因子表達情況；肺組織病理切片觀察大鼠肺

6、組織病理損傷程度的變化情況；免疫組化(IHC)和免疫熒光(IF)實驗手段檢測 Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白在肺組織內(nèi)的表達量和表達部位；實時定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)觀察Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白基因表達水平的變化情況。
　　研究結(jié)果：
　　CLP術(shù)成功建立膿毒癥感染模型。CLP組與control組比較發(fā)現(xiàn)：CLP組大鼠組在48小時內(nèi)死亡率為40％而control組大鼠死亡率為0，CLP組大鼠嗜睡，活動明顯減少，體重

7、下降約20%；CLP組大鼠肺組織內(nèi)炎性因子TNF-α表達量明顯升高；CLP組大鼠肺組織病理切片觀察到肺泡水腫和塌陷，肺泡間隔增厚增寬并大量炎癥細胞浸潤，肺血管充血明顯；WB檢測發(fā)現(xiàn)在CLP組中Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白β-catenin及CyclinD等表達量較control組明顯升高；IHC提示CLP組大鼠肺組織內(nèi)炎癥細胞，支氣管上皮細胞，肺泡細胞等細胞均有大量β-catenin蛋白表達；IF中也顯示在CLP組大鼠肺組織內(nèi)表達大量胞膜蛋白

8、LRP5/6；Real-time PCR顯示在CLP組大鼠肺組織內(nèi)β-catenin mRNA表達量升高。
　　給予腹腔注射XAV939抑制Wnt/β-catenin信號通路后CLP+XAV939組與CLP組比較發(fā)現(xiàn)：CLP+XAV939組大鼠死亡率為0；CLP+XAV939組大鼠活動度與control無明顯差異；CLP+XAV939組大鼠體重下降率為10%，下降率小于 CLP組；CLP+XAV939組大鼠肺組織病理切片發(fā)現(xiàn)肺病理

9、損傷程度較CLP組明顯減輕；CLP+XAV939組大鼠肺組織內(nèi)炎性因子TNF-α和β-catenin蛋白、CyclinD蛋白表達量較CLP組均明顯降低；Real-time PCR顯示CLP+XAV939組大鼠肺組織內(nèi)β-catenin的mRNA表達量較control組無明顯差異，但是較CLP組明顯降低。
　　研究結(jié)論：
　　在本研究中，通過對膿毒癥動物模型的研究發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號通路參與膿毒癥急性肺損傷過程；