缺氧誘導(dǎo)因子-1在心肌細(xì)胞缺氧、復(fù)氧損傷中的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與藥物干預(yù)研究.pdf

1、目的：觀察阿托伐他汀(ATV)和PI3K信號(hào)通路的抑制劑渥曼青霉素(WT)對(duì)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷的影響,及其對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(GLUT-1)和血紅素加氧酶-1(HO-1)mRNA表達(dá)的影響,探討阿托伐他汀和PI3K信號(hào)通路保護(hù)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的機(jī)制,為臨床預(yù)防和治療心肌缺血再灌注損傷提供新的思路。
　　方法：分離SD乳鼠(出生1~3天)心肌細(xì)胞進(jìn)

2、行原代培養(yǎng),免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定心肌細(xì)胞;建立H/R模型;取培養(yǎng)第3~4天的心肌細(xì)胞隨機(jī)分成5組:正常對(duì)照組(Control組)、H/R組、H/R+ATV組、H/R+WT組和H/R+ATV+WT組;倒置顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并計(jì)數(shù)細(xì)胞搏動(dòng)頻率;應(yīng)用MTS法檢測(cè)心肌細(xì)胞的存活率;化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)心肌細(xì)胞特異性損傷指標(biāo)肌鈣蛋白I(cTnI)的含量;采用SYBRGREEN熒光定量PCR檢測(cè)HIF-1α、VEGF、GLUT-1和HO-

3、1mRNA表達(dá)水平。應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用One-WayANOVA分析,兩兩比較采用LSD分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：(1)接種4~6h左右后心肌細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng),24h后貼壁的心肌細(xì)胞呈梭形、菱形或多角形,48h后心肌細(xì)胞呈放射狀排列的細(xì)胞簇,72h后細(xì)胞伸出偽足連接成片,出現(xiàn)同步化搏動(dòng),第4天搏動(dòng)達(dá)高峰,搏動(dòng)頻率為100~120/min,從第7天起搏動(dòng)頻率逐漸減少;(2)H/R模型成

4、功建立;(3)與Control組比較,H/R組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率及存活率明顯降低(P<0.05),肌鈣蛋白I明顯升高(P<0.05),HIF-1α、VEGF、GLUT-1和HO-1mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05);與H/R組比較,H/R+ATV組細(xì)胞搏動(dòng)頻率及存活率明顯升高(P<0.05),肌鈣蛋白I明顯降低(P<0.05),HIF-1α、VEGF、GLUT-1和HO-1mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05);與H/R組比較,H

5、/R+WT組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率及存活率明顯降低(P<0.05),肌鈣蛋白I明顯升高(P<0.05),HIF-1α、VEGF、GLUT-1和HO-1mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05);與H/R+ATV組比較,H/R+ATV+WT組細(xì)胞搏動(dòng)頻率及存活率明顯降低(P<0.05),肌鈣蛋白I明顯升高(P<0.05),HIF-1α、VEGF、GLUT-1和HO-1mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：HIF-1可能通過(guò)調(diào)