二氨嗪后處理對成年大鼠心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷的保護作用.pdf

1、目的：研究線粒體ATP敏感性鉀通道（Mitochondrial ATP-sensitive potassiumchannel, mitoKATP通道）開放劑二氮嗪(Diazoxide, DZ)后處理對成年大鼠心肌細胞缺氧/復(fù)氧( Hypoxia/reoxygenation, H/R)損傷的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)原代成年大鼠心肌細胞建立缺氧/復(fù)氧損傷模型，并隨機分為5組(n=6)：①Normal組：在CO2培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)6

2、h(37℃，95％Air+5％CO2);②HR組：缺氧(37℃，95％N2+5％CO2,FiO2＜1％)3h、復(fù)氧(37℃，95％Air+5％CO2)3h;③DZ組：缺氧3h、復(fù)氧3h，在復(fù)氧5min時給予100μM終濃度的DZ;④DZ+5-HD組：缺氧3h、復(fù)氧3h，在缺氧末給予100μM終濃度的5-HD，然后在復(fù)氧5min時給予100μM終濃度的DZ;⑤5-HD組：缺氧3h、復(fù)氧3h，在缺氧末給予100μM終濃度的5-HD。復(fù)氧3h

3、末檢測培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase,LDH)活性和微量丙二醛(Malondialdehyde， MDA)含量；通過計數(shù)心肌細胞長桿率測定細胞存活率；采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)測定心肌細胞凋亡指數(shù)；測定單個心肌細胞收縮幅度；免疫印跡法測

4、定心肌細胞內(nèi)pGSK-3β、GSK-3β、Bc1-2和Bax的表達。
　　 結(jié)果：復(fù)氧3h末，與Normal組相比，其他四組培養(yǎng)液中LDH活性和MDA含量明顯升高，凋亡指數(shù)也顯著增高，心肌細胞存活率和單個心肌細胞收縮幅度明顯降低(P＜0.05)；與H/R組比較，DZ組培養(yǎng)液中LDH活性及MDA含量降低，心肌細胞凋亡指數(shù)也明顯降低，而心肌細胞存活率和單個心肌細胞收縮幅度明顯改善(P＜0.05)，復(fù)氧即刻同時給予5-HD可以逆轉(zhuǎn)DZ

5、的作用(P＜0.05）；復(fù)氧即刻單獨給予5-HD與H/R組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。復(fù)氧3h末，與Normal相比，其他四組心肌細胞內(nèi)Bc1-2表達降低，Bax表達水平升高；與H/R組比較，DZ組可以明顯增加心肌細胞內(nèi)Bc1-2的表達，抑制Bax的表達水平，并且pGSK-3β的表達顯著升高(P＜0.05)，而復(fù)氧即刻給予5-HD可以逆轉(zhuǎn)DZ的這些作用(P＜0.05)，復(fù)氧即刻單獨給予5-HD與H/R組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0