C5-siRNA對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　 本課題分為兩部分,研究采用RNA技術(shù),通過(guò)沉默C5補(bǔ)體激活產(chǎn)物的表達(dá)而抑制H/R心肌細(xì)胞補(bǔ)體的激活,進(jìn)而探討其對(duì)心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響。(1)研究C5-siRNA對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧.復(fù)氧損傷的保護(hù)作用。(2)探討C5-siRNA對(duì)乳鼠H/R損傷心肌細(xì)胞C5表達(dá)量的影響。
　　 方法:
　　 (1)將培養(yǎng)的原代單層心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(Control組)、缺氧復(fù)氧組(H/R組)、H/

2、R+C5-siRNA組、H/R+空載體病毒組。其中后三組均經(jīng)歷2小時(shí)缺氧和4小時(shí)復(fù)氧,H/R+C5-siRNA組及H/R+空體病毒組在缺氧前2小時(shí)分別給予C5-siRNA及空載體病毒。用CCK-8快速比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞增殖情況(測(cè)OD值)。
　　 (2)將培養(yǎng)的原代單層心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(Control組)、缺氧復(fù)氧組(H/R組)、H/R+C5-siRNA組、H/R+空載體病毒組。按方法(1)設(shè)計(jì)加入試劑后按上述條

3、件培養(yǎng)。分別用RT-PCR法及WesternBlot法從RNA基因水平及蛋白水平測(cè)定C5表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)H/R+C5-siRNA組測(cè)定OD值顯著高于H/R組及 H/R+空載體病毒組(P<0.05)。
　　 (2)用RT-PCR法及Western Blot法測(cè)定,H/R+C5-siRNA組C5表達(dá)量均顯著低于H/R組及H/R+空載體病毒組。
　　 結(jié)論:
　　 (1)C5-siR