AMPK在氯離子介導心肌細胞缺氧-復氧損傷中的作用.pdf

1、目的：在調節(jié)心肌能量代謝過程中，AMPKα2起著非常重要的作用。本實驗擬建立H9c2細胞缺氧/復氧(A/R)及去除細胞外Cl-的A/R(Cl--freeA/R)損傷模型，探討AMPKα2低表達在氯離子介導心肌細胞A/R損傷中的作用，以便進一步研究心肌A/R損傷機制。
　　 方法：運用RNA干擾技術，以pSuper.Retro為載體，構建AMPKα2 shRNA重組質粒。通過質粒轉導，建立AMPKα2正常表達和低表達的心肌細胞(H

2、9c2)，Western Blot法測定AMPKα2的蛋白表達情況。實驗分五組，每組重復6次：(1)正常對照組；(2)A/R組；(3)去除細胞外Cl-的A/R組(Cl--free A/R)；(4)pSuper+C1--free A/R組；(5)pS-AMPKα2+Cl--free A/R。四唑鹽(MTT)法測定各組心肌細胞存活率；測定各組抗氧化物酶SOD、乳酸脫氫酶LDH、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px的活性；流式細胞儀測定各組ROS水

3、平、線粒體膜電位、細胞凋亡程度。
　　 結果：1.經過酶切鑒定及基因測序結果證實：AMPKα2 shRNA干擾質粒重組成功；2.Western Blot檢測表明：重組質粒能有效下調H9c2中AMPKα2蛋白表達；3.正常H9c2細胞經A/R處理后損傷嚴重，去除細胞外Cl-的A/R組有明顯對抗A/R導致的細胞存活率、SOD、GSH-PX酶活性下降，對細胞起保護作用；而AMPK低表達組中Cl--free對細胞的保護作用明顯消失，細胞

4、存活率、SOD、GSH-PX酶活性、線粒體膜電位下降，細胞內ROS含量、LDH活性升高，細胞凋亡程度明顯比Cl--free A/R組嚴重(P<0.01)。pSuper+Cl--free A/R組與Cl--free A/R組相比，各指標無明顯差異(P>0.05)。
　　 結論：AMPKα2參與了去除細胞外氯離子(Cl--free)對抗心肌急性缺氧/復氧損傷的作用，AMPKα2基因沉默使Cl--free在心肌細胞缺氧/復氧中的保護作