羅非魚(yú)海豚鏈球菌疫苗的研制及免疫效果的初步研究.pdf

1、海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)病是水生動(dòng)物的一種重要細(xì)菌性疾病，可感染多種海水和淡水魚(yú)類(lèi)，在世界許多國(guó)家均有該病的暴發(fā)和流行，對(duì)漁業(yè)生產(chǎn)造成巨大危害。該病主要集中在地中海、中亞、東南亞和澳大利亞等地區(qū)，近年來(lái)我國(guó)海豚鏈球菌病暴發(fā)呈上升趨勢(shì)。海豚鏈球菌不僅是引起魚(yú)類(lèi)鏈球菌病的主要病原，而且對(duì)食品安全和人類(lèi)健康構(gòu)成了威脅，該菌可引發(fā)人類(lèi)蜂窩織炎、心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、脊髓炎等。該病目前主要靠用化學(xué)藥物進(jìn)行防治，但化

2、學(xué)療法有很多弊端，相比而言疫苗接種對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境和人類(lèi)健康是安全的，因此被認(rèn)為是防治細(xì)菌性疾病的最重要的方法之一。目前國(guó)外已有很多學(xué)者已開(kāi)展了海豚鏈球菌疫苗的研究和探索并取得了一定成效，但國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)疫苗研究的相關(guān)報(bào)道。 廣西是羅非魚(yú)養(yǎng)殖的主要地區(qū)之一，魚(yú)類(lèi)鏈球菌病造成的經(jīng)濟(jì)損失和隨之帶來(lái)的藥物殘留及環(huán)境污染已嚴(yán)重影響廣西羅非魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本研究從廣西各地發(fā)病的羅非魚(yú)體內(nèi)分離出了9株鏈球菌，采用傳統(tǒng)方法和分子生物學(xué)方法相結(jié)合的手

3、段對(duì)分離的致病性菌株進(jìn)行了詳細(xì)鑒定，最終確定8株為為海豚鏈球菌，證明海豚鏈球菌是廣西羅非魚(yú)鏈球菌病的主要病原；選取3株具有區(qū)域代表性的菌株對(duì)羅非魚(yú)先后進(jìn)行不同劑量的兩次攻毒試驗(yàn)，選擇具有較好免疫原性和交叉免疫保護(hù)力的菌株做為疫苗候選菌株，并采用福爾馬林常規(guī)滅活的方法制備了滅活疫苗。本研究對(duì)研制的滅活疫苗進(jìn)行了羅非魚(yú)免疫后的免疫應(yīng)答和保護(hù)效果的初步研究。通過(guò)不同免疫途徑(注射、浸泡、口服)和免疫劑量對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行免疫效果試驗(yàn)；并在免疫前和免

4、疫后的不同時(shí)間里對(duì)試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行尾靜脈采血，通過(guò)測(cè)定血液中白細(xì)胞的數(shù)量、各類(lèi)白細(xì)胞的含量及其吞噬活性，血清的抗菌活力、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力及抗體水平。實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)過(guò)疫苗免疫的羅非魚(yú)對(duì)致病性海豚鏈球菌的抵抗力明顯增強(qiáng)，具有很高的相對(duì)保護(hù)率，注射組的相對(duì)保護(hù)率高達(dá)90％以上；研究結(jié)果還表明，疫苗免疫后白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血細(xì)胞的吞噬活性明顯增強(qiáng)。血清的抗菌活力、溶菌酶活性和抗

5、體水平與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，其中注射免疫組羅非魚(yú)的免疫能力提高最明顯，浸泡和口服免疫的羅非魚(yú)其免疫能力也有不同程度的提高。研究結(jié)果證明本研究制備的羅非魚(yú)海豚鏈球菌疫苗是有效的，可以通過(guò)合適的免疫途徑對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行免疫接種海豚鏈球菌疫苗來(lái)預(yù)防該病的感染和暴發(fā)。 本研究還對(duì)羅非魚(yú)的血清免疫球蛋白(immunoglobulin)進(jìn)行了純化和初步分析，確定了羅非魚(yú)血清免疫球蛋白的分子量，為羅非魚(yú)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步研究奠定基