海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)疫苗對(duì)淡、海水養(yǎng)殖魚類的保護(hù)性試驗(yàn).pdf

1、近年來我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅猛,隨著高密度、集約化、大規(guī)模水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的出現(xiàn),魚類疾病頻繁爆發(fā)。特別是細(xì)菌性疾病種類多、發(fā)病率和死亡率高,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于藥物的頻繁使用,導(dǎo)致了大量耐藥性病原菌的出現(xiàn),同時(shí)也造成大量的藥物殘留,對(duì)人類食品安全及人類健康提出巨大挑戰(zhàn)?，F(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),接種疫苗已被作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)漁業(yè)養(yǎng)殖計(jì)劃的一個(gè)重要組成部分,開發(fā)環(huán)保高效的魚病疫苗成為當(dāng)今水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的當(dāng)務(wù)之急。本研究主要針對(duì)給淡、海水魚類養(yǎng)殖

2、業(yè)帶來巨大危害的海豚鏈球菌(Streptococcus iniae S.iniae)病,以制備的海豚鏈球菌滅活疫苗為研究對(duì)象,主要進(jìn)行了海豚鏈球菌滅活疫苗對(duì)淡水羅非魚和海水花鱸魚的保護(hù)性試驗(yàn)。通過本試驗(yàn)篩選了最佳疫苗免疫原用量和最佳免疫佐劑,同時(shí)也對(duì)藥物免疫調(diào)節(jié)劑在魚類中應(yīng)用進(jìn)行了初步探討。為海豚鏈球菌滅活疫苗的推廣應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。
　　 將S.iniae海水株HD-1、HD-4,S.iniae淡水株TBY-1,TBY-5的培養(yǎng)

3、液滅活后,制備弗氏佐劑滅活疫苗,腹腔注射接種羅非魚(1×1010CFUxmL-10.1mL×尾-1),經(jīng)過兩次免疫,初次免疫后35天,分別用對(duì)應(yīng)的菌株攻毒,統(tǒng)計(jì)14天內(nèi)各組魚的死亡情況,計(jì)算各免疫組的相對(duì)保護(hù)率(RPS),并測(cè)定各組魚血清抗體效價(jià)的變化。結(jié)果表明:HD-1株弗氏佐劑滅活疫苗保護(hù)率達(dá)到93.6％,最高血清抗體凝集效價(jià)達(dá)到1:64；TBY-1株弗氏佐劑滅活疫苗保護(hù)率達(dá)到100％,最高血清抗體凝集效價(jià)達(dá)到1:64。海水株HD-

4、1和淡水株TBY-1免疫效果均較好,可作為海水魚和淡水魚制苗菌株的候選。
　　 利用S.iniae海水株HD-1對(duì)大亞灣地區(qū)主要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類石斑魚、紅鰭笛鯛、卵圓鯧鲹、花鱸及美國紅魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果顯示花鱸魚對(duì)S.iniae海水株HD-1最為敏感,可以作為S.iniae海水株HD-1滅活疫苗試驗(yàn)用魚進(jìn)行進(jìn)一步的相關(guān)試驗(yàn)。
　　 將S.iniae海水株HD-1制備成1010CFUxmL-1、109CFUxmL-1及

5、108CFUxmL-1三種菌體抗原濃度的白油佐劑滅活疫苗對(duì)花鱸魚進(jìn)行了免疫保護(hù)性試驗(yàn),攻毒結(jié)果顯示:1010CFUxmL-1組相對(duì)保護(hù)率為100％、109CFUxmL-1組相對(duì)保護(hù)率為92.5％、108CFUxmL-1組相對(duì)保護(hù)率為85％、對(duì)照組的死亡率是100％；最高抗體滴度分別為1:16、1:64、1:32。1010CFUxmL-1組相對(duì)保護(hù)率與109CFUxmL-1組相對(duì)保護(hù)率比較,無顯著性差異(p>0.05)；與108CFUxm

6、L-1組相對(duì)保護(hù)率為85％比較,1010CFUxmL-1組保護(hù)率較高,具有顯著性差異(p<0.05)。綜合考慮生產(chǎn)實(shí)際等各項(xiàng)指標(biāo),本試驗(yàn)采用109CFUxmL-1菌體抗原濃度為制苗用菌體抗原量的濃度。
　　 將含109CFUxmL-1菌體抗原濃度的S.iniae海水株HD-1滅活并制備成白油佐劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗,對(duì)花鱸魚進(jìn)行免疫保護(hù)性試驗(yàn),攻毒結(jié)果顯示:白油佐劑疫苗獲得92.5％的相對(duì)保護(hù)率,鋁膠佐劑疫苗組獲得82.5％的相對(duì)

7、保護(hù)率；兩種疫苗的最高抗體滴度分別為1:64、1:32。兩者比較具顯著性差異(p<0.05)。白油佐劑疫苗獲得較好的保護(hù)效果,可以有效防制花鱸魚海豚鏈球菌病。
　　 將左旋咪唑和中藥蘆薈多糖分別以一定的量加入到109CFUxmL-1菌體抗原濃度的S.iniae海水株HD-1白油佐劑滅活疫苗中制備成復(fù)合佐劑疫苗(compound adjuvant vaccine),同時(shí)設(shè)白油佐劑疫苗基礎(chǔ)上單獨(dú)注射蘆薈多糖組、白油佐劑組及PBS組,

8、對(duì)花鱸魚進(jìn)行免疫保護(hù)性試驗(yàn),攻毒結(jié)果顯示:各試驗(yàn)組相對(duì)保護(hù)率差異性不顯著(p>0.05)；但白油佐劑滅活疫苗加單獨(dú)注射蘆薈多糖組魚血清抗體滴度比其他各組要高(p<0.05),而左旋咪唑復(fù)合佐劑疫苗組魚血清抗體效價(jià)顯著低于白油佐劑滅活疫苗組(p<0.05),另外各組血清抗體滴度之間比較沒有顯著性差異。測(cè)定各組血清中溶菌酶變化顯示,單獨(dú)注射免疫增強(qiáng)劑蘆薈多糖組血清溶菌酶含量明顯比其他各組都要高(p<0.05),試驗(yàn)結(jié)果表明:中藥免疫增強(qiáng)劑蘆