肺炎鏈球菌莢膜多糖血清型3結(jié)合疫苗的研制及免疫原性的研究.pdf

1、肺炎鏈球菌所引發(fā)的疾病在全球的發(fā)病率和死亡率非常高，人數(shù)最多的是老人和兒童。已有實驗證明其莢膜多糖是TI抗原，再次免疫不能使降低的抗體達到初次免疫的水平，不能誘導免疫記憶細胞的產(chǎn)生。若將其共價連接到蛋白卻使之成為TD抗原，能夠?qū)胗變汉屠先水a(chǎn)生抗體，免疫效果會得到提高。因此研究肺炎鏈球菌多糖蛋白結(jié)合疫苗具有重要意義。
　　論文以3型肺炎鏈球菌莢膜多糖蛋白結(jié)合工藝的研究為對象，通過對3型莢膜多糖水解預處理，分子篩，氧化醛基，超濾，共

2、價結(jié)合CRM197蛋白，SDS-PAGE電泳，液相純化工藝流程研制結(jié)合疫苗，并通過動物免疫實驗觀察免疫原性。
　　首先研究了多糖水解預處理方法，從不同水解溫度和不同水解時間兩個方面，通過分子篩的測定，發(fā)現(xiàn)隨著溫度和時間的增加，分子量變得越來越小。在85℃下用0.2mol/L乙酸溶液水解1.0h，可以得到分子量較大的結(jié)合產(chǎn)物，游離蛋白很少;其次多糖活化過程中發(fā)現(xiàn)活化反應16h以后，多糖溶液中高碘酸鈉基本已經(jīng)反應完全。隨著加入高碘酸鈉

3、的濃度升高，活化度降低，超濾后的多糖回收率也逐漸降低。加入0.4g/L高碘酸鈉，活化度為10左右，活化多糖的回收率在78％左右;然后結(jié)合過程中，通過從反應體系容器，結(jié)合反應時間，投料比，多糖和蛋白回收率四個方面的優(yōu)化研究結(jié)合疫苗，發(fā)現(xiàn)在4mL體系中選用50mL離心管，多糖和蛋白的投料比為20∶10，加入7倍醛基含量的氰基硼氫化鈉，在37℃下反應48h時，利用SDS-PAGE電泳，液相純化和超濾可以獲得收率較高，沒有游離蛋白的大分子量結(jié)合