torch檢測的應(yīng)用解析

1、深圳中山泌尿外科醫(yī)院——李永成,,1.前言…2.TORCH 簡介3.TORCH篩查的重要性&感染后處理&結(jié)果應(yīng)用4.TORCH方法學(xué)的對比與選擇5.常見問題解答,,影響一個準(zhǔn)媽媽生出一個健康寶寶的因素是什么？,環(huán)境因素遺傳因素,,染色體畸變病毒感染 有害環(huán)境：重金屬、射線….,多發(fā)性流產(chǎn)死胎畸形兒先天性疾病,,背景,★ 我國是個出生缺陷高發(fā)的國家。★ 每年約有20-30萬肉眼可

2、發(fā)現(xiàn)的先天畸形兒出發(fā)，加上出生以后才顯現(xiàn)出的缺陷兒，每年先天缺陷兒可達(dá)80-120萬，約占我國每年總出生人數(shù)的4-6%。平均每30秒就會有一個脆弱的生命降臨。,※ 與優(yōu)生密切相關(guān)的可控檢測手段：TORCH,T O R C H 簡介,Toxoplasma gondi Toxo 剛地弓形蟲Rubella virus RV 風(fēng)疹病毒Cyto

3、megalo virus CMV 巨細(xì)胞病毒Herpes Simplex virus HSV 單純皰疹病毒,,TORCH 本檢查常作為婦女懷孕期生殖道感染的常規(guī)檢查項目，若感染了會引起流產(chǎn)，早產(chǎn)，胎兒宮內(nèi)死亡，胎兒腦積水，神經(jīng)發(fā)育障礙，先天性心臟病等，對優(yōu)生優(yōu)育和習(xí)慣性流產(chǎn)的病因分析有參考價值。,傳播途徑 經(jīng)胎盤、羊水、產(chǎn)道、母乳感染,剛地

4、弓形蟲（TOXO）,1908年在突尼斯的剛地疏趾鼠中發(fā)現(xiàn)。是人和動物共患的一種寄生在除紅細(xì)胞之外的所有有核細(xì)胞內(nèi)的寄生蟲。貓科動物是其終宿主。孕婦感染弓形體后，不論其有無臨床癥狀，?？赏ㄟ^胎盤將弓形蟲傳給胎兒，從而直接影響胎兒的發(fā)育，使胎兒嚴(yán)重致畸，甚至死亡，亦可發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)或增加妊娠合并癥。感染發(fā)生得越早，胎兒受損越嚴(yán)重。,孕婦感染弓形蟲后，胎兒的感染率及對胎兒的影響,我國人群既往感染率(IgG陽性)平均為7.88%。

5、 ——2005年《全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查報告》孕婦感染率：4-10%，接觸貓狗等寵物易感染。,風(fēng)疹病毒（RV）,屬于皰疹類病毒中的披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬，是引起風(fēng)疹的病原體，為RNA病毒。病毒經(jīng)過呼吸道傳播，潛伏期約2~3周。人是其唯一自然宿主。RV通過呼吸道傳播，人類對RV普遍易感，由于感染后一般癥狀較輕，預(yù)后佳，人群中感染率約為95%，也可通過注射疫苗進(jìn)行主動防御。在

6、孕期6個月內(nèi)感染RV，可通過胎盤垂直傳播，除引起流產(chǎn)、死產(chǎn)外，存活者大約29%表現(xiàn)為“先天性風(fēng)疹綜合征”（CRS）。 CRS —— 即出生時體重低于2.5公斤，發(fā)育遲緩；出生后全身性器官受損，先天性心臟病，畸形，耳聾、失明等。 在孕期內(nèi)再次感染或6個月后的感染 對胎兒沒有影響。,巨細(xì)胞病毒（CMV）,是一種雙鏈DNA病毒，φ≈200nm，為最大的動物病毒。人類CMV感染非常普遍

7、，多呈隱性感染，極少有臨床癥狀，成人70~90%有CMV抗體。多數(shù)人因感染過而產(chǎn)生免疫力，但多數(shù)可長期帶毒成為潛伏感染?？赏ㄟ^密切接觸唾液、乳汁、尿液、血液、精液或?qū)m頸分泌物等多種途徑傳播。 我國孕婦原發(fā)感染率約1-2％，由原發(fā)感染的孕婦所造成的新生兒感染率為15-50%。 CMV先天性感染可造成死胎或流產(chǎn)，多數(shù)患兒在出生后數(shù)小時或數(shù)周內(nèi)死亡；對存活者會造成嚴(yán)重的后遺癥。目前對CMV感染尚無針對性的、有效治療方法。,單

8、純皰疹病毒（HSV）,是一種雙鏈DNA病毒，分Ⅰ型和Ⅱ型，人類是唯一宿主。 HSV-Ⅰ型主要引起上半身皮膚、口腔粘膜等部位感染，經(jīng)呼吸道傳播； HSV—Ⅱ型主要引起腰部以下部位、外生殖器皮膚粘膜感染，性接觸為主要傳播途徑，并與胎兒先天性感染關(guān)系密切。孕期的首次感染對胎兒均有嚴(yán)重影響，可發(fā)生流產(chǎn)、先天畸形、發(fā)育遲緩、智力障礙、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎等。新生兒HSV感染與否主要取決于生殖道有無病毒。人類HSV感染非常普遍，感染率約為80~9

9、0%，胎兒感染致死率高達(dá)40%。,TORCH篩查的必要性,孕婦由于內(nèi)分泌系統(tǒng)的改變而導(dǎo)致機體免疫力下降，易發(fā)生原發(fā)性感染，以前曾感染過的孕婦，其體內(nèi)潛伏的病毒也容易被激活而發(fā)生復(fù)發(fā)感染。TORCH感染后，多發(fā)病隱匿，沒有臨床癥狀。TORCH病原體感染孕婦后果嚴(yán)重，?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引起圍產(chǎn)期感染，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和智力障礙等各種異常結(jié)果。這就是所謂的 ——“TORCH綜合癥”。,,《國家人口和計劃生育委員會關(guān)于

10、開展出生缺陷一級預(yù)防工作的指導(dǎo)意見》和《國家人口和計劃生育委員會優(yōu)生促進(jìn)工程實施方案》明確規(guī)定把TORCH作為孕前篩查必檢項目。,TORCH篩查的最佳時機是夫妻雙方在計劃懷孕前3～6月，這樣可以做到早預(yù)防、早監(jiān)測、早干預(yù)(三早)。,TORCH感染后處理原則,TORCH結(jié)果的臨床應(yīng)用,IgG親合力——如人體感染CMV后，前幾個月內(nèi)產(chǎn)生的CMV-IgG抗體與抗原結(jié)合能力弱,隨著抗體發(fā)育的成熟結(jié)合力逐漸增加。當(dāng)加入能夠降低抗體與抗原結(jié)合的物質(zhì)

11、,例如尿素時,能使結(jié)合力低下的IgG抗體游離出來,并被洗脫掉,此時僅能檢測到結(jié)合力高的IgG抗體。這種IgG與抗原結(jié)合的能力稱為IgG親和力。,IgG抗體親合力試驗是TORCH檢查非常有力的補充，使得結(jié)果更加可靠、有效,TORCH結(jié)果的臨床應(yīng)用(CMV為例),,病毒感染后特異抗體產(chǎn)生的規(guī)律,機體具備一定的免疫力，當(dāng)機體遭受病原體感染時，體內(nèi)會產(chǎn)生相應(yīng)的抗體（Ig）來抵抗病原體，以保護(hù)機體功能的正常運轉(zhuǎn)。一般規(guī)律是先產(chǎn)生IgM抗體，然后

12、產(chǎn)生IgG抗體，IgM抗體滴度在達(dá)到高峰后很快開始逐漸下降至較低水平，下降后一般不易檢出，而IgG抗體達(dá)到高峰后則基本穩(wěn)定在一個較高的滴度且持續(xù)較長時間。檢查出特異性IgM 抗體說明患者近期感染，潛伏的病毒被激活產(chǎn)生復(fù)發(fā)感染時亦可檢出IgM抗體。查出IgG抗體說明曾經(jīng)感染過，而且有一定的免疫水平。當(dāng)患者發(fā)生繼發(fā)感染時，IgM和IgG都能較快地上升到較高滴度，其中IgG上升極其顯著（一般可上升4倍以上），因此臨床上若測出高滴度的IgG，

13、則意味著再次感染。,TORCH檢測方法的選用,幾種常見的TORCH感染實驗室診斷方法比較,,選用合理的診斷方法，對孕婦進(jìn)行TORCH感染產(chǎn)前監(jiān)測，采取相應(yīng)措施，可減少畸形兒等病兒出生，避免流產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象發(fā)生。近年來，國際上已將TORCH-IgM 作為孕期常規(guī)篩查項目。PCR具有靈敏度極高的特點，但不能判定人群抗體水平，且易出現(xiàn)假陽性，衛(wèi)生部不建議在臨床上使用；金標(biāo)法操作簡單，特異性不強，靈敏度也不高，不能確診；ELISA檢測的是抗

14、體，具有靈敏度高、特異性強的特點，常檢測IgM和IgG抗體，既可判斷近期感染，又可檢測人群抗體（免疫力）水平，是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界最受推崇的TORCH檢測方法。由此可見，ELISA方法因具有靈敏度高，特異性強，操作簡便、結(jié)果快速、經(jīng)濟(jì)適用等特點而廣泛應(yīng)用于TORCH篩查。同時，ELISA方法也是國家計生委推薦的孕前TORCH檢測方法！,,捕獲法與間接法的區(qū)別,ELISA 標(biāo)本稀釋的作用？,在抗原抗體反應(yīng)時，生成AC的量與反應(yīng)物的濃度有關(guān)，

15、只有在兩者比例合適時才會出現(xiàn)最強的反應(yīng)。ELISA實驗中，血清標(biāo)本一般進(jìn)行預(yù)稀釋處理，一方面，降低了標(biāo)本中其它影響因子的濃度，減少其對實驗的干擾，增加試劑的特異性；另一方面，可使試劑中的抗原/抗體與標(biāo)本中的抗體/抗原達(dá)到最佳反應(yīng)濃度，提高試劑的靈敏度。,TORCH檢測常見問題解答,1.在日常檢測中，為什么做很多標(biāo)本都查不出一個IgM陽性結(jié)果？ ——作為TORCH急性感染指標(biāo)，一般人群中IgM抗體陽性率較低（約0.5%~3%，在不同地區(qū)

16、、不同人群、不同時期均有差異）。有些廠家的間接法試劑為去除特異性IgG和類風(fēng)濕因子（RF）的干擾，在標(biāo)本稀釋液中加入粗制的抗人IgG以圖去除掉標(biāo)本中特異性IgG而達(dá)到消除干擾的目的，但往往因其中大量的雜質(zhì)對待測標(biāo)本的IgM也有相當(dāng)大的吸附去除作用， 而將IgM陽性標(biāo)本漏檢，甚至根本做不出陽性結(jié)果；而另外有些廠家的捕獲法試劑則為了節(jié)省原料，降低成本，人為地大大降低了抗體、抗原、酶聯(lián)物的濃度，同樣使得IgM檢測查不出陽性結(jié)果。 2. 為

17、什么：測IgM時，有時會出現(xiàn)很多的陽性結(jié)果？ ——排除對特定人群檢查、流行病爆發(fā)等因素，IgM抗體陽性率過高通常為試劑的特異性差所致，結(jié)果不可信。一些試劑采用粗制抗原及不純的酶聯(lián)物，或沒有相應(yīng)措施去除特異性IgG和RF干擾，檢測結(jié)果容易造成假陽性。,,3.為什么：測IgG時，有時會出現(xiàn)很多的陽性結(jié)果？ ——樣品血清IgG的陽性率比同樣的IgM的陽性率要高得多，有些IgG的陽性率甚至達(dá)到90%以上，以至?xí)性谝慌鷺悠穼嶒炛泻苌偕踔翈?/p>

18、乎沒有陰性的情況出現(xiàn)，這都是正常的。弓形體IgM陽性率為0.05~1%，IgG陽性率為3~25%以上；風(fēng)疹病毒IgM陽性率為0.3~1%，IgG陽性率為50~85%以上；單純皰疹病毒1+2型IgM陽性率為0.1~1.5%，IgG陽性率為60~95%以上。4. 在TORCH檢測時為什么會出現(xiàn)幾項IgM同時陽性的不正常情況？ ——出現(xiàn)IgM幾項同時陽性的結(jié)果時，多數(shù)情況下是錯誤的，多為標(biāo)本中特異性IgG和RF干擾造成。在間接法試劑

19、中，標(biāo)本中特異性IgG和RF易形成“IgG-RF”復(fù)合物，此復(fù)合物的“IgG-”易和包被的抗原結(jié)合，而“RF-” 易和抗IgM的酶聯(lián)物結(jié)合，造成假陽性結(jié)果。雖然有些間接法試劑使用了抗人IgG來消除干擾，但由于少數(shù)人群中特異性IgG和RF含量較高，這些試劑的原料不純，且存在方法學(xué)上的缺陷，無法避免這種異常情況的發(fā)生。,,5.同一標(biāo)本、同種試劑為什么會出現(xiàn)前后判斷陰陽結(jié)果不同的情況？ ——排除人為操作因素，為所用試劑的穩(wěn)定性不高、重復(fù)性

20、差造成的。事實上，試劑盒中的酶標(biāo)板的質(zhì)量對實驗結(jié)果影響極大。劣質(zhì)的酶標(biāo)板，其透光均一性和吸附性差造成孔間差有可能達(dá)到50~150%。而個人操作時加樣不準(zhǔn)，亦可使孔間讀數(shù)差達(dá)到30%以上。 6.為什么說捕獲法的試劑靈敏度比間接法更高？ ——優(yōu)質(zhì)捕獲法試劑包被的是抗IgMμ鏈的單克隆抗體，使用了高純度的抗原和具有特異性的抗抗原酶聯(lián)物；而間接法試劑即使采用了高純度的抗原和特異性的吸附劑，在保留IgM和去除IgG方面仍然難以達(dá)到完美的平衡

21、，靈敏度自然不如捕獲法。,7.  是否所有的捕獲法試劑都比間接法試劑要好？ ——并非如此。事實上，捕獲法試劑盒對原材料要求很高，有些捕獲法試劑生產(chǎn)廠家任意降低成本，用劣質(zhì)的酶標(biāo)板、多克隆抗體、粗制的抗原和酶聯(lián)物等試劑，隨意降低工作濃度，其質(zhì)量可信度令人懷疑；相反，有的間接法試劑選用了重組抗原、特制吸附劑、優(yōu)質(zhì)酶標(biāo)板和酶標(biāo)二抗（單抗）等，產(chǎn)品質(zhì)量亦有相當(dāng)?shù)谋ＷC；此外，有臨床實驗室反映，某些捕獲法試劑的陽性對照血清不具特異性，交