病毒的感染與免疫

1、三個階段：１、機體水平的研究階段２、細胞水平的研究階段３、分子水平的研究階段,病毒免疫應答的特點---宿主和病毒相互作用１、不同蛋白具有免疫原性２、病毒可增殖、變異和擴散３、其數(shù)量、分布范圍、存在部位等方面可不斷變化４、可主動感染免疫細胞和器官，改變或破壞免疫系統(tǒng),病毒的輔助結(jié)構(gòu)（某些病毒具有）,（1）囊膜：核衣殼外包繞的一層含脂質(zhì)的外膜，其中含有雙層脂質(zhì)、多糖和蛋白質(zhì)。（2）病毒蛋白酶：催化病毒核酸。（3）觸須樣

2、纖維：腺病毒唯一具有此結(jié)構(gòu)，該纖維可吸附到敏感細胞上，與致病作用有關(guān)。病毒的衣殼、囊膜中的蛋白質(zhì)和觸須樣纖維是病毒感染宿主細胞的重要結(jié)構(gòu)。也是重要的免疫源性物質(zhì),病毒感染過程,●侵入宿主——受體配體結(jié)合許多病毒通過與重要的正常細胞表面分子結(jié)合而進入細胞：HIV-1：與人T細胞的CD4分子結(jié)合 ；EB病毒：與人B細胞表面的補體受體CD21結(jié)合；鼻病毒：與細胞間粘附分子(ICAM-I)結(jié)合。 病毒特異地感染某些織或這些組織

3、中特定細胞群體并在其中復制的能力稱作病毒的親嗜性（tropism）。,個體間傳播途徑：多種多樣,水平傳播（horizontal transmission）：病毒在人群個體之間的傳播。（1）經(jīng)皮膚傳播：（2）經(jīng)粘膜表面?zhèn)鞑ィ?呼吸道粘膜 消化道粘膜 眼粘膜 生殖道粘膜 垂直傳播（vertical transmission

4、）。；通過胎盤或產(chǎn)道，病毒直接由親代傳給子代的方式為垂直傳播。,●宿主自身內(nèi)的傳播,局部播散:在侵入部位附近造成組織損傷 血液播散:病毒在侵入部位復制后播散到局 部淋巴結(jié)，并經(jīng)淋巴管進入血流， 形成病毒血癥(primary viremia）。 神經(jīng)播散:大多數(shù)經(jīng)神經(jīng)播散的病毒是通過 快速軸突轉(zhuǎn)運過程（fast

5、 axonaltransport）播散的。,病毒感染的致病機理,1、 殺細胞效應（cytocidal effect）:病毒的增殖造成細胞死亡。某些病毒結(jié)構(gòu)成分的直接毒性作用。 病毒早期蛋白抑制細胞高分子物質(zhì)的合成細胞溶酶體膜受損，釋放溶酶體酶，造成細胞自溶。也稱溶細胞性感染(cytolytic infection)。細胞染色體受損。,2、 細胞膜結(jié)構(gòu)與功能改變,細胞融合。

6、 細胞表面新抗原成分的形成膜通透性異常出現(xiàn)混濁腫脹3 包涵體（inclusion body）形成。 某些病毒感染的細胞內(nèi)，在普通光學顯微鏡下，可見在胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性或嗜堿性染色，大小和數(shù)量不同的圓形或不規(guī)則的團塊結(jié)構(gòu)，稱為包涵體.,4 整合作用，使細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。 病毒的全部或一部分核酸與宿主細胞的染色體結(jié)合，稱為整合作用（integration）

7、。 整合后的病毒核酸隨細胞的分裂而傳給子代細胞，不出現(xiàn)病毒顆粒，細胞也不被破壞，但細胞遺傳特性改變可致腫瘤發(fā)生。,病毒感染的類型,一、細胞水平類型——從感染的結(jié)局來看：溶細胞型感染穩(wěn)定狀態(tài)感染 整 合 型 感染二、從整體臨床類型；隱性感染；顯性感染；持續(xù)性感染(persistent infection)。,影響病毒毒力和致病性的因素：——病毒宿主相互作用,病毒基因組及其產(chǎn)物的變異，如包膜、衣殼、核心

8、、非結(jié)構(gòu)蛋白以及病毒基因組非編碼區(qū)均可影響病毒的毒力及致病性。宿主因素如遺傳、年齡、內(nèi)分泌、營養(yǎng)、生活習慣等也是不可忽視的影響因素。,病毒抗原的的提呈與識別,一、病毒抗原：多為結(jié)構(gòu)蛋白，少數(shù)為非結(jié) 構(gòu)蛋白， 如流感病毒有1種 非結(jié)構(gòu)蛋白和7種結(jié)構(gòu)蛋白， 結(jié)構(gòu)蛋白中5種為內(nèi)部

9、蛋白， 2種為表面抗原。,二、病毒感染細胞的膜抗原：包括出現(xiàn)的病毒抗原和產(chǎn)生的新抗原。 感染細胞的表面病毒抗原出現(xiàn)與否與下列因素有關(guān)：（1）病毒增殖環(huán)境。如仙臺病毒在MDBK細胞中增殖產(chǎn)生的子代不能產(chǎn)生導致溶血、細胞融合等與感染有關(guān)的小分子病毒表面抗原。（2）病毒變異。如痘病毒的變異株不產(chǎn)生某些特異性抗原。（3）感染時間。感染細胞表面抗原一般在病毒釋放前出現(xiàn)。如新城疫

10、病毒在感染后3小時、痘病毒為4小時、單純皰疹病毒為6小時、麻疹病毒為10~20小時。,三、抗原的提呈與識別,1、病毒抗原的提呈（1）MHC-I類分子與病毒抗原提呈 （2）MHC-II類分子與病毒抗原的提呈 2、病毒抗原的識別 （1）抗體對病毒抗原的識別 （2）T細胞對病毒抗原的識別,MHC-I類分子與病毒抗原提呈,病毒侵入----合成病毒蛋白抗原---肽段（被蛋

11、白酶體降解）---形成多肽-MHC-I類分子復合物---被高爾基體轉(zhuǎn)運至細胞膜表面---被CD8T細胞的TCR識別---被激活，分泌穿孔素---殺傷病毒感染的靶細胞。 這是免疫系統(tǒng)監(jiān)視自身細胞有無病毒感染及異常分子存在和清除的一種重要方式。,MHC-II類分子與病毒抗原的提呈,胞外游離病毒隨血流和淋巴液途徑不同組織時也可被APC隨機捕獲并攝入細胞內(nèi)。如巨噬細胞以吞噬、吞飲、吸附和調(diào)理等方式攝取，經(jīng)內(nèi)在化形成吞噬體，后者

12、與溶酶體融合形成內(nèi)體。病毒抗原在內(nèi)體的酸性環(huán)境中被水解成肽段，同時，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中新合成的MHC-II類分子轉(zhuǎn)運到內(nèi)體與其內(nèi)具有免疫原性的多肽結(jié)合。所形成的抗原肽-MHC-II類分子復合物被高爾基體轉(zhuǎn)運到APC表面，供CD4+細胞識別，并使之激活。,MHC分子與病毒感染的關(guān)系,（1）病毒抗原與MHC分子的相似性：病毒抗原與MHC之間可以發(fā)生免疫交叉反應，如EB病毒與慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎有相關(guān)性，病毒胞膜gp110抗原與HLA-DW4、DR?1

13、抗原之間存在有被T細胞識別的共同決定簇；HIV的包膜gp41抗原的C端有5個氨基酸與HLA-II類分子?鏈N端的5個氨基酸相同。反應。,（2）病毒感染可致MHC表達異常：EB病毒轉(zhuǎn)化的細胞的B細胞可使II類分子的表達顯著增強；經(jīng)12型腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠細胞在體內(nèi)具有腫瘤原性，而5型腺病毒轉(zhuǎn)化的細胞則無腫瘤原性。,抗體對病毒抗原的識別,機體感染病毒或接種疫苗后,能產(chǎn)生各種不同的特異性抗體(IgG,IgM,IgA),其中以IgG和IgA最為重

14、要. 病毒表面抗原有些可與相應抗體結(jié)合而使病毒失去感染性,也就是發(fā)生中和作用的部位,稱之為中和表位. 它們往往由8~15個氨基酸組成. 有些病毒抗原只維持病毒結(jié)構(gòu),稱之為非關(guān)鍵部位.,T細胞對病毒抗原的識別,對已進入宿主細胞的病毒,體液免疫作用受限,主要依賴細胞免疫發(fā)揮作用. 其中針對病毒感染細胞的細胞免疫主要是指T細胞介導的特異性細胞免疫. T細胞對病毒抗原的識別實際上是對表達于細胞表面的主要組織相容性分子及其提呈的病毒多肽的識別.

15、T細胞對病毒多肽的識別是由于有T細胞抗原受體TCR.,抗病毒機制,一、體液免疫：1、抗體應答 ： 特異性抗體的防御作用在病毒感染早期十 分重要。不同Ig類型的抗體在抗病毒免疫中的作用也有所差異。,IgG抗體：是重要的抗病毒抗體，可分為幾種亞類，如人類的IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4。人類的IgG1是主要的補體結(jié)合抗體和調(diào)理性抗體。IgM抗體：是病毒感染早期產(chǎn)生的主要免疫球蛋白，其產(chǎn)生通常不需要T細胞的

16、輔助，是出現(xiàn)最早的抗體。IgM抗體在體外實驗中能有效中和病毒。IgA抗體：粘膜免疫屏障的發(fā)育和分泌型IgA的存在對預防經(jīng)呼吸道和消化道的病毒感染起重要作用。IgA的防御作用主要是阻斷病毒與粘膜的結(jié)合，而不需吞噬細胞和補體的參與。,2、抗體的抗病毒作用,（1）中和作用： 機制為，①抗體覆蓋了病毒的吸附點，從而使其吸附能力降低或喪失，這是最普遍和最重要的中和機制。②病毒因抗體的作用而凝集，減少了有效的吸附位點。③其它機制。

17、如流感病毒血凝素HA的單抗作用于病毒顆粒后，病毒顆粒中的RNA多聚酶活性喪失。,（2）增強調(diào)理吞噬作用：針對病毒表面抗原的非中和抗體，本身不能使病毒的感染性喪失。但抗體與病毒的復合物可被巨噬細胞所吞噬，從而使之失去感染性。 (3）溶解殺傷作用：抗體在補體、K細胞、NK細胞或巨噬細胞的協(xié)助下，可以溶解、殺傷病毒及其感染的細胞。 (4）參與ADCC作用：當特異性IgG的Fab段與靶細胞膜上的病毒抗原決定簇結(jié)合后，其Fc段因構(gòu)型變化而

18、活化，因而與K細胞上的Fc受體結(jié)合，從而促發(fā)對靶細胞的殺傷。,（5）抗體和補體的協(xié)同作用：,●補體覆蓋在已經(jīng)與抗體結(jié)合的病毒外面， 使其難以和相應的細胞受體結(jié)合?！裱a體使結(jié)合有抗體的病毒聚集，減少感染 性的病毒顆粒。 ●通過與病毒/抗體復合體形成C3b，使病毒 易于被表達C3b 受體的吞噬細胞攝入和降解。,●補體可以直接溶解與抗體結(jié)合并含有脂 膜的病毒。 ●補體本身可以不依賴抗體直接滅活病毒。,二

19、、細胞免疫；,參與抗病毒感染的免疫細胞有：CTL、NK細胞、巨噬細胞。不同的細胞作用不同，特異性CTL意義重大。,1、細胞毒T細胞（CTL）,CTL在病毒感染后的一段時間出現(xiàn)，其對病毒感染的靶細胞的殺傷作用由病毒特異性，并受MHC的限制。一般認為CTL對某些病毒感染的恢復起重要作用。,CTL對病毒感染細胞的特異性：某種病毒誘導的CTL只能殺傷該病毒感染的靶細胞，并且要求CTL細胞與靶細胞的MHC抗原相同。CTL病毒特異性針對的是特定存在

20、于感染細胞膜上病毒抗原，而不是針對完整的病毒顆粒。CTL對病毒感染靶細胞MHC限制性：病毒特異性CTL殺傷靶細胞時需要同時識別細胞膜表面的病毒抗原和MHC抗原，并且二者具有相同的MHC單倍型時，殺傷效率高，而當二者不相同時，殺傷效率低，甚至無殺傷作用。,CTL對病毒感染靶細胞的殺傷：CTL殺傷靶細胞時需要與病毒感染的靶細胞密切接觸，殺傷機制不很清楚，但其殺傷過程分三個階段：①CTL識別病毒感染的靶細胞，與其結(jié)合在一起，此階段需要鎂離子

21、。②效應細胞與靶細胞結(jié)合，激活CTL活性，開始對靶細胞不可逆的損傷過程，需鈣離子參與這一過程。③CTL脫離損傷的靶細胞，靶細胞自行解體。,病毒特異性CTL殺傷靶細胞的特點：①預先由抗原誘導、活化的CTL細胞可特異性殺傷病毒感染的靶細胞。②CTL細胞的殺傷作用受MHC-I類分子限制。③CTL細胞可連續(xù)殺傷靶細胞，其殺傷效率高。,2、巨噬細胞： 單核巨噬細胞（包括外周血單核細胞、組織巨噬細胞和樹突狀細胞）對預防病毒感染和促

22、使病毒感染的恢復，有重要作用。,其抗病毒感染主要表現(xiàn)在：,（1）直接殺傷病毒 （2）巨噬細胞能提呈病毒抗原 （3）分泌干擾素 （4）巨噬細胞表面有IgG的Fc受體，可與IgG 的Fc段結(jié)合,3、自然殺傷細胞（natural killer cell，NK細胞）,不需抗原預先致敏，也不依賴抗體存在，具有自然殺傷病毒感染細胞和腫瘤細胞的能力。,小鼠NK細胞的特點 ：,●新生小鼠NK細胞活性很低，比成年鼠對病

23、毒易感●遺傳性NK細胞缺陷或低水平的小鼠比正常 小鼠對某些病毒易感●病毒感染可致NK細胞活性增高●低水平NK細胞活性的小鼠輸入NK細胞可 增強抗病毒感染的能力。,NK細胞殺傷病毒感染靶細胞機制 ：,① 結(jié)合階段：NK細胞非特異性識別靶細胞，淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1（LFA-1）和靶細胞表面的細胞間黏附分子（ICAM-1）參與NK細胞的識別過程。②激活階段：NK細胞由靶細胞抗原決定簇激活，這一步驟依賴于鈣離子和適宜的

24、溫度。③效應階段：激活的NK細胞釋放可溶性介質(zhì)（穿孔素），在鈣離子的存在下，單體的穿孔蛋白聚合到靶細胞膜上，滲入至微脂體中引起2個不同大小的管道，使膜損傷導致靶細胞溶解。,,三、細胞因子的抗病毒作用,細胞因子是指由活化的免疫細胞和某些基質(zhì)細胞分泌的、介導和調(diào)節(jié)免疫及炎癥反應的小分子多肽，是除免疫球蛋白和補體外的另一類非特異性免疫效應因子。 具抗病毒感染作用的細胞因子有干擾素、腫瘤壞死因子TNF和白細胞介素（如IL-2）。,1

25、、干擾素（interferon，IFN） 是機體受病毒或其它干擾素誘生劑刺激而產(chǎn)生的一組蛋白質(zhì)，具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學活性。,干擾素的分類（根據(jù)抗原性的不同 ）：,?-IFN：主要由白細胞產(chǎn)生 ?-IFN：主要由成纖維細胞產(chǎn)生 ?-IFN：由活化的T細胞產(chǎn)生 ?-IFN和?-IFN又稱I型干擾素， ?-IFN又稱II型干擾素。各型干擾素的作用不盡相同，但均有相對的種屬特異

26、性。,干擾素誘生劑 ：,（1）各種病毒：RNA病毒較DNA病毒的 誘生作用更強。（2）人工合成的雙股核酸鏈。如聚肌胞 （polyI：C）。（3）某些細菌、脂多糖、促有絲分裂原等。,抗病毒機制：,IFN本身并無抗病毒作用。IFN誘生劑誘生的IFN從細胞中釋放后，并非直接作用于病毒，而是通過自分泌和旁分泌作用于自身和鄰近細胞膜上的IFN受體。當IFN與受體結(jié)合后，使細胞內(nèi)產(chǎn)生一類抗病毒蛋白。這些蛋白有蛋

27、白激酶、寡腺苷酸合成酶E和磷酸二酯酶等。,IFN誘導的抗病毒狀態(tài)的特點：,①有相對的種屬特異性而無病毒特異性， 有廣譜的抗病毒作用。②作用于細胞而非直接作用于病毒。③有細胞間的傳遞性。④作用的暫時性，一般在體外建立的抗病 毒狀態(tài)只能維持24~72小時。⑤對已侵入細胞內(nèi)增殖的病毒無作用。,2、腫瘤壞死因子TNF 由LPS以及各種侵襲性刺激引起相應細胞分泌的一種可溶性細胞因子，有TNF-?、和TNF-?兩

28、種類型。前者由單核巨噬細胞所產(chǎn)生，后者又稱淋巴毒素，主要由淋巴細胞所產(chǎn)生。,體外抗病毒作用：在多種人細胞中具有抗病毒活性，如HEL、WI-38、FS-4等，但在BUD-8、WISH等正常細胞株中無抗病毒活性。 研究結(jié)果不統(tǒng)一，甚至矛盾。確切作用有待更深入的研究。,3、白細胞介素IL-2 促使T細胞從G1期轉(zhuǎn)至S期的關(guān)鍵因子，主要由抗原或絲裂原激活的CD4+T細胞產(chǎn)生，CD8+T細胞產(chǎn)生量少。

29、 實驗證據(jù)：缺乏功能性T細胞的無胸腺裸鼠一般均死于接種野生型痘病毒后的播散性感染，實驗證明，如果將整合有鼠源性IL-2基因的重組痘病毒接種裸鼠足墊部，則只引起輕微的腫脹，幾天后即恢復；即使靜脈接種，體內(nèi)都分離不出病毒。,免疫制品,一、特異性抗體 二、 疫苗三、其它,特異性抗體（被動免疫）,●雙特異性抗體 ●嵌合抗體 ●抗獨特型抗體 1.不能得到足夠抗原的情況下，可用抗獨特型單抗代替 2.對含有自身交叉反應

30、的非保護性抗原的病毒用抗獨特型抗體 可避免自身免疫損傷 3.由于Ab2誘導的保護性免疫應答似乎不具有MHC限制性，使得 由異種動物制備的Ab2可用于人體,體液免疫的特點,X-specifc Antibody titers,Weeks,,,AntigenX,AntigenX,2,4,6,8,10,12,,,IgM response,IgG response,,病毒感染后的免疫反應,

31、,,Viraltiters,CTL,Antibody,Days post-infection,7,14,28,35,0,Illness,,免疫的目標,,,CTL,Antibody,,Vaccine,Infection,,,,CTL,Antibody,,Illness,疫苗,●減毒活疫苗：毒力高度減弱或基本無毒的 變異株，接近于自然感染，有一定的增殖 能力，激發(fā)體液和細胞應答，有毒力回復 的危險。 ●滅活疫苗：

32、用物理或化學方法將病毒殺死 或滅活，不能增殖，有一定的免疫原性， 接種量大，次數(shù)多。,●基因工程疫苗：應用基因重組技術(shù)將保護 性抗原基因重組到適當?shù)妮d體，再將重組 體轉(zhuǎn)入到細胞或細菌內(nèi)使之表達相應的保 護蛋白或多肽，經(jīng)純化后的產(chǎn)物即為基因 工程疫苗。因在提純過程中破壞了蛋白質(zhì) 的空間結(jié)構(gòu)，僅能誘導體液應答。 ●亞單位疫苗：設(shè)法除去病毒體對激發(fā)保護性 免疫無用的甚至有害的

33、成分，保留其有效的 免疫成分，所制成的疫苗稱亞單位疫苗。也 可以說是使用完整的生物體的天然成分的疫 苗。缺點是安全性不夠，對免疫能力低下者的 風險很大。,● DNA疫苗：將含有病原體保護性抗原基因 的真核表達質(zhì)粒DNA直接接種動物體內(nèi)，在 動物細胞內(nèi)該質(zhì)粒表達相應抗原，并刺激機 體的免疫系統(tǒng)引起引起持久的特異性細胞 免疫及體液免疫應答,DNA疫苗的特點,①避免制備傳統(tǒng)疫苗的煩

34、瑣過程。②接種后的表達產(chǎn)物可與MHC-I、II類分子結(jié) 合，無毒力回復。③免疫時產(chǎn)生的抗原多肽的提呈過程和自然感 染相似，可誘導細胞免疫。④具有共同的理化性質(zhì)，可聯(lián)合免疫。⑤可同種異株交叉保護（基因為編碼保守蛋白 的核酸序列）。,三、其它,1、免疫效應細胞：將具有病毒特異性的CTL回輸，可徹底清楚體內(nèi)病毒。因此，在體外將特異性CTL克隆大量增殖后再回輸將是病毒性疾病治療的一個重要和有希望的免疫療法。2、以

35、抗原提呈為基礎(chǔ)的免疫： 采用病毒抗原多肽體外致敏APC如樹突狀細胞，體內(nèi)免疫可大大提高病毒抗原的提呈能力，激發(fā)機體產(chǎn)生特異性免疫反應。,病毒的免疫逃避,一、病毒變異●常見于RNA病毒●中和表位的基因變異株　如HIV、HCV等?！?CTL決定簇的基因變異株 如淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒。,二、病毒侵犯免疫細胞　　病毒入侵免疫細胞（T、B細胞、巨噬細胞、NK細胞等）后，不易被免疫細胞或因子清除，或長期持續(xù)存在，或可在免疫

36、細胞中增殖，造成免疫功能低下。　　HIV、HBV、CMV、風疹病毒、麻疹病毒、狂犬病病毒等均可在淋巴細胞中增殖。,三、病毒感染導致宿主細胞的MHCⅠ類抗原表達低下　　CTL殺傷靶細胞受MHCⅠ類抗原識別所限制，故當病毒感染細胞表達MHCⅠ類抗原低下時，其殺傷作用顯著下降?！　∠俨《荆残停涸缙诘鞍譋３與MHCⅠ類抗原結(jié)合　　腺病毒１２型：阻止MHC基因的轉(zhuǎn)錄或使其mRNA在細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)出　　EB病毒：腫瘤細胞表面的粘附因子ICAM

37、-1和LFA-3表達低下　　CMV：從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中除去新合成的MHCⅠ類分子,五、產(chǎn)生非中和抗體或靶細胞表面病毒抗原發(fā)生變化　　非中和抗體可阻斷中和抗體或淋巴細胞對病毒或病毒感染的靶細胞的殺傷?！　】贵w與補體協(xié)同，使感染病毒的細胞表面的病毒抗原發(fā)生變化。如麻疹病毒（形成“帽狀”）,六、產(chǎn)生抑制天然免疫和特異性免疫的因子　　產(chǎn)生細胞因子受體的同源分子?！　《徊《荆篒FN-?、TNF、IL-1　　EB病毒：IL-10,免疫病理學,免

38、疫病理的產(chǎn)生機制：１、引起免疫抑制，導致慢性感染和多重感染２、ADE作用，增強病毒的致病性３、交叉抗體反應導致自身免疫病４、病毒編碼蛋白表達于細胞膜上，構(gòu)成靶抗原５、病毒抗原與抗體形成免疫復合物沉積于小血管,６、激活補體，直接損傷感染細胞，或通過補體活化過程產(chǎn)生的各種肽類產(chǎn)物，引起炎癥反應７、誘導介質(zhì)釋放，造成局部及全身反應８、增強細胞膜表面MHC分子的表達，促進CTL的殺傷作用,產(chǎn)生自身免疫的機制：１、多克隆B細胞被激

39、活２、噬淋巴細胞病毒侵入淋巴細胞３、由于免疫系統(tǒng)失調(diào)產(chǎn)生抗淋巴細胞抗體４、病毒感染Ts／Tc細胞以及作用于細胞因子，影響其功能５、病毒與正常組織器官之間有交叉抗原６、病毒感染改變了宿主的抗原,登革病毒的感染與免疫,生物學特性,歸屬于黃病毒科黃病毒屬有四個血清型，有抗原性交叉為單股正鏈RNA病毒，顆粒為球形編碼３種結(jié)構(gòu)蛋白和７種非結(jié)構(gòu)蛋白,感染類型,大多數(shù)不產(chǎn)生臨床癥狀，但可產(chǎn)生抗體，對同型病毒的再次感染具有免疫力　　根

40、據(jù)WHO標準，可分為：●登革熱（DF）：高熱，全身肌痛，骨胳和關(guān)節(jié)疼痛，極度乏力，皮疹，淋巴結(jié)腫大和白細胞減少●登革出血熱和登革休克綜合征（DHF／DSS）：常發(fā)生于再次感染。特點是起病較緩慢，發(fā)熱２－４天后病情突然加重，多個器官發(fā)生出血。DHF患者若同時伴有休克，則稱DSS。,致病機理,感染,,單核巨噬細胞中增殖,,進入血循環(huán),,再定位于單核巨噬細胞和林巴組織,抗登革病毒抗體可促使病毒在上述細胞中復制，并可與病毒形成免疫復合物，激

41、活補體系統(tǒng)，導致血管通透性增加、白細胞和血小板減少。從而導致廣泛性出血、體液和蛋白滲出、組織間水腫以及骨、肌肉、關(guān)節(jié)疼痛。,DHF/DSS發(fā)生機理的假說,抗體依賴性增強（antibody dependent enhancement, ADE）：多數(shù)學者認同。病毒變異學說：毒力增強的病毒變異株引起DHF/DSS。,機體對登革病毒感染的免疫應答,●非特異免疫應答一、干擾素　　單核細胞感染12小時后產(chǎn)生?-IFN，48小時達高峰，但不產(chǎn)

42、生?和?-IFN?！　林巴細胞再次接觸抗原時，可產(chǎn)生高滴度的?-IFN。,二、巨噬細胞　　巨噬細胞是登革病毒復制的主要場所。登革２型病毒感染小鼠發(fā)生免疫抑制時，缺乏細胞免疫應答，同時對異型病毒的體液和細胞免疫受到抑制。三、NK細胞　　NK細胞可溶解病毒感染的細胞，有助于感染的終止。,●特異性免疫應答一、細胞免疫　　登革病毒可促進同型病毒致敏的CTL增殖，而異型病毒的促進作用較弱，這種促進作用受HLA－DR1和HLA－DPW

43、4基因限制。,二、體液免疫初次感染：抗體上升緩慢，抗體水平較低，一般于感染２１天左右出現(xiàn)同型抗體，以IgM為主，以后出現(xiàn)IgG?？贵w的特異性較高。再次感染：抗體產(chǎn)生早，滴度上升快，抗體滴度較高。一般于８－９天后就出現(xiàn)抗體，主要為IgG?？贵w的特異性低。,免疫診斷,血凝抑制試驗：補體結(jié)合試驗中和試驗ELISA斑點免疫結(jié)合實驗,檢測抗體,檢測抗原　　上述檢測抗體的方法經(jīng)改良后可用于抗原的檢測，但病毒血癥期短，病毒含量低，因此陽

44、性率低。,免疫防治,一、特異性抗體　　理論上抗血清和單抗可用于被動免疫，目前仍局限于動物實驗。,●減毒活疫苗（傳統(tǒng)和現(xiàn)代）●滅活疫苗●基因工程疫苗●DNA疫苗,二、登革疫苗,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN2，單價）,CTL具有特異殺傷活性，抗體滴度1:800，保護率90.9%。,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN3，單價）,效靶比越高，CTL特異性殺傷百分率也越高。效靶細胞比例為20:1 時，特異性CTL 殺傷百分率為32.

45、 5 %,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN3，單價）,效靶比越高，CTL特異性殺傷百分率也越高。效靶細胞比例為20:1 時，特異性CTL 殺傷百分率為32. 5 %,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1和pcDNA-NS1 （聯(lián)合免疫，DEN2，單價）,中和抗體效價最高1:32；雙質(zhì)粒免疫組高于單質(zhì)粒免疫組，最高為1:30。,以pIRES構(gòu)建四價疫苗（DEN1-4）,同時產(chǎn)生針對登革病毒４個血清型的抗體，最高抗體滴度為1:160。,思考題：