基因工程藥物的研究現(xiàn)狀乙肝疫苗

1、基因工程藥物的研究現(xiàn)狀——乙肝疫苗,,引言：  1953年Waston和Crick發(fā)現(xiàn)遺傳物質(zhì)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，給整個(gè)生物學(xué)乃至整個(gè)人 類社會(huì)帶來(lái)了一場(chǎng)革命。此后，一系列有關(guān)遺傳信息即基因研究的成果很快的向應(yīng)用和開發(fā)拓展。1972年，美國(guó)斯坦福大學(xué)P.Berg博士研究小組使用EcorRⅠ,第一次在體外獲得了包括SV40 DNA和λ噬菌體DNA的重組DNA分子。1973年，S.Cohen等將兩中分別編碼卡那霉

2、素和四環(huán)素的抗性基因相連，構(gòu)建出重組的DNA分子，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得了既抗卡那霉素又抗四環(huán)素的轉(zhuǎn)化子菌落，這是第一次成功的基因克隆實(shí)驗(yàn)，標(biāo)志著基因工程的誕生。1977年Boyer首次獲得生長(zhǎng)激素抑制因子的克隆，1982年第一個(gè)基因工程重組產(chǎn)品——人胰島素被批準(zhǔn)應(yīng)用，進(jìn)入市場(chǎng)。迄今為止，已有50多種基因工程藥物上市，近千種處于研發(fā)狀態(tài)?；蚬こ趟幬镆呀?jīng)形成一個(gè)巨大的高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)，產(chǎn)生了不可估量的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益，由于基因藥物的

3、出現(xiàn)，可以大大改善人類的生命質(zhì)量，,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus HBV），其表面由HBsAg(乙肝表面抗原)構(gòu)成。在HBV攜帶者血液中存在大量的HBsAg。目前，HBV不能再離體組織或細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，無(wú)法用傳統(tǒng)方法制造疫苗。但經(jīng)研究證實(shí)HBV攜帶者血液中HBsAg提純，去除HBV和其他雜質(zhì)所制成的亞單位血源乙型肝炎疫苗可有效預(yù)防HBV的感染。乙肝疫苗的主要有效成分為HBsAg均吸附于佐劑【多為Al（OH）3】上。,

4、一 、簡(jiǎn)介,乙 肝 五 項(xiàng) 檢 測(cè),表面抗原（HBsAg） 體內(nèi)是否存在乙肝病毒表面抗體（抗-HBs） 是否有保護(hù)性e抗原（HBeAg） 病毒是否復(fù)制既具有傳染性e抗體（抗-HBe） 病毒復(fù)制是否受到抑制核心抗體（抗-HBc） 是否感染過(guò)乙肝病毒,二 、臨床上應(yīng)用的乙肝疫苗的種類,,重組痘苗乙型肝炎疫苗重組CHO細(xì)胞乙型肝炎疫苗重組釀酒酵母乙型肝炎疫苗,血液乙型肝炎疫苗,基因工程疫苗,三、什么

5、是重組乙型肝炎疫苗（CHO細(xì)胞）,采用基因工程技術(shù)將無(wú)傳染性的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的S基因片段克隆到載體，用重組載體轉(zhuǎn)染真核生物CHO細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、分泌出HBsAg到培養(yǎng)液中，收集分泌液，經(jīng)高速離心、純化、除菌后，加入佐劑吸附（氫氧化鋁）而制成。,CHO？,CHO——(Chinese hamster ovary)【中國(guó)倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞】，該細(xì)胞具有不死性，可以傳百代以上。全世界應(yīng)用于人類疾病治療或預(yù)防的基因工程產(chǎn)品大部

6、分是由CHO細(xì)胞和大腸桿菌生產(chǎn)的。 另外CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，是一種非分泌性細(xì)胞，本身很少分泌CHO內(nèi)源蛋白，因此對(duì)目標(biāo)蛋白分離純化工作十分有利。,,四、重組CHO細(xì)胞乙型肝炎疫苗的生產(chǎn)工藝,,五、重組CHO細(xì)胞乙肝疫苗的優(yōu)缺點(diǎn),優(yōu)點(diǎn)：CHO細(xì)胞表達(dá)的重組HepB是高等真核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物，其天然結(jié)構(gòu)較低等的真核細(xì)胞酵母表達(dá)的HBsAg蛋白更適合人體吸收，生產(chǎn)工程中不同于酵母使用硫氰酸鹽處理，安全性好。缺點(diǎn)：產(chǎn)

7、生一些副作用，例如 紅腫、疼痛、發(fā)癢、手臂酸重等癥狀，或者是產(chǎn)生低熱、乏力、惡心、食欲不振等與一般疫苗相似的輕微反應(yīng)。,五、疫苗使用方法,一般易感者使用10µg/支，每次注射一支，1個(gè)月及6個(gè)月時(shí)注射第2、3支。全程注射3次。新生兒使用20µg/支，第一針在出生后24小時(shí)內(nèi)注射，其余兩針同上。高危人群，可用20µg/支。注射部位為上臂三角肌肌內(nèi)。,不宜接種乙肝疫苗的人群,有血清病、支氣管哮喘、過(guò)敏性蕁

8、麻疹及對(duì)青霉素、磺胺等一些藥物過(guò)敏者禁用。低體重、早產(chǎn)、剖腹產(chǎn)等非正常出生的新生兒，暫時(shí)不宜接種乙肝疫苗。雖然乙肝疫苗對(duì)這部分新生兒并無(wú)害處，但因其自身的體質(zhì)狀況易發(fā)生偶合事件，因此最好推遲接種時(shí)間。,六、現(xiàn)有疫苗的發(fā)展史及存在的問(wèn)題,現(xiàn)有疫苗存在的問(wèn)題,,,什么是成纖維細(xì)胞？,定義： 普遍存在于結(jié)締組織中的一種中胚層來(lái)源的細(xì)胞。分泌前膠原、纖連蛋白和膠原酶等細(xì)胞外基質(zhì)成分，傷口愈合過(guò)程中可遷移到傷口進(jìn)行增殖。

9、成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞呈梭形或扁的星狀，具有突起。根據(jù)不同的功能活動(dòng)狀態(tài)，將細(xì)胞分為成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞二型：成纖維細(xì)胞乃是功能活動(dòng)旺盛的細(xì)胞，細(xì)胞和細(xì)胞核較大，輪廓清楚，核仁大而明顯，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)；纖維細(xì)胞功能活動(dòng)不活躍，細(xì)胞輪廓不明顯，核小著色深，核仁不明顯，細(xì)胞質(zhì)少。此二型細(xì)胞可互相轉(zhuǎn)化。 作用原理: 成纖維細(xì)胞攝取所需的氨基酸，如脯氨酸和賴氨酸等，在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白