實(shí)驗(yàn)一小鼠實(shí)驗(yàn)技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)一 小鼠基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和各種檢驗(yàn)標(biāo)本的采集,首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)系,孫 泉,四次實(shí)驗(yàn)課安排,小鼠的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和各種檢驗(yàn)標(biāo)本的采集技術(shù)（第3周，3月19日）大鼠的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和各種檢驗(yàn)標(biāo)本的采集技術(shù)（第4周，3月26日）大鼠阻塞性黃疸及急性胰腺炎模型的制作（第5周，4月2日）兔的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和靜脈插管技術(shù)（第6周，4月9日）,考核方式,出勤；20%實(shí)驗(yàn)操作情況；30%實(shí)驗(yàn)報(bào)告：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?shí)

2、驗(yàn)器材；實(shí)驗(yàn)內(nèi)容；總結(jié)；50%,注意事項(xiàng),注意安全：抓??；注射器等。上課紀(jì)律：按時(shí)上課，穿實(shí)驗(yàn)服，保持安靜。保持衛(wèi)生：每次課安排4個(gè)同學(xué)打掃衛(wèi)生，動(dòng)物尸體放入尸體房。分組情況：1305教室:18人；1306教室:18人,一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握小鼠的抓取和固定 掌握小鼠的編號(hào)與標(biāo)記方法 掌握小鼠的常用給藥方法 掌握小鼠的常用麻醉方法 掌握小鼠的安死術(shù) 掌握小鼠的采血方法 了解小鼠的采尿、糞的方法 了解小鼠各種

3、臟器標(biāo)本的采集方法,二.操作內(nèi)容,分組：兩人一組，每組小鼠2只，♀♂各1只。品系：ICR,1.小鼠的抓取和固定,單手固定：肌肉、腹腔、灌胃,,雙手固定：肥胖或妊娠小鼠；雙人配合固定器：尾靜脈注射與采血；固定板：外科手術(shù)或解剖；,2.小鼠的性別鑒定及稱重,將小鼠抓取后，放在燒杯中，稱量體重，記錄體重。辨別雌雄根據(jù)排泄孔和生殖孔的距離辨別。 距離近的為雌性 距離遠(yuǎn)的為雄性,3.小鼠的編號(hào)與標(biāo)記方法,染色法：①一般用于短期

4、實(shí)驗(yàn)；②常用的染液有3%-5%的苦味酸溶液（黃色）、0.5%的中性品紅溶液（紅色）；③逆毛流方向涂上有色斑點(diǎn)；④編號(hào)的原則是“從上到下，從左到右”,一種顏色代表十位，另一種顏色代表個(gè)位，這樣可標(biāo)記到99號(hào),,穿耳孔法：用動(dòng)物專用耳孔器在動(dòng)物耳朵的不同部位打一小孔或打成缺口來表示一定號(hào)碼的方法。左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。這種方法可標(biāo)記100只左右的動(dòng)物。,4.小鼠的常用給藥方法,尾靜脈注射 小鼠：0.05ml/10g體

5、重～0.1ml/10g體重①放入固定器，露出尾部， 準(zhǔn)備好注射液；②酒精擦拭尾部；③左手食指托住尾部下方，拇指配合，右手持注射器④針尖輕輕抬起與血管平行刺入，輕推藥液⑤血管由紅變白；用干棉球按住注射點(diǎn)，將針頭撥出，用力按壓止血。,,,皮下注射：①俯臥固定；頸背部皮膚；左手拇指和食指捏住皮膚提起，右手持針沿縱軸方向刺入皮下；②進(jìn)針時(shí)感覺有阻力，繼續(xù)刺入，突然阻力消失，活動(dòng)針頭皮內(nèi)注射：①與皮膚平行刺入捏住的皮膚；②注

6、射時(shí)感覺阻力很大，并且手指有膨脹，注射部位局部形成皮丘，注射畢，為避免藥液流出，停留片刻，再將針頭撥出,,腹腔注射：①仰面保定；②腹正中線左右兩側(cè)，與腹股溝平行的部位，用酒精棉球消毒③右手持針，30-45°角刺入不要太深，把針尖向上挑起皮膚和肌肉，證明未刺入內(nèi)臟，回抽無血，即可注入藥液。,,灌胃法：①先將動(dòng)物保定，身體成一條直線；②灌胃針頭的前端放進(jìn)動(dòng)物口腔，順著上腭插入咽部③先少量注入藥液，如果小鼠無強(qiáng)烈掙扎，證

7、明未插入氣管肌肉注射：注射針穿過皮膚至肌肉，回抽無血，即可注射藥液,5.小鼠的常用麻醉方法,抓取、稱重將小鼠抓取后，放在燒杯中，稱量體重，記錄體重。計(jì)算麻醉藥用量記錄給藥、進(jìn)入興奮期、麻醉期的時(shí)間。呼吸麻醉 （了解）,小鼠常用麻醉藥的劑量及注射途徑,單位：mg/kg i.v－靜脈注射；i.p－腹腔注射；i.m－肌肉注射,觀察麻醉期,①全身麻醉的第一期（隨意興奮期）：出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)和運(yùn)動(dòng)失調(diào)；②全身麻醉的第二期（不隨意興奮期）：

8、是由意識(shí)完全喪失至深而規(guī)則的自動(dòng)呼吸開始時(shí)止。③全身麻醉的第三期（外科麻醉期）：角膜反射由遲鈍漸趨消失，翻正反射消失，疼痛反射消失，④全身麻醉的第四期 （延髓麻痹期）：進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過量，故臨床上嚴(yán)禁出現(xiàn)此期。,尾尖采血法；眼眶靜脈叢采血法；心臟采血法；,6.小鼠的常用的采血方法,7. 小鼠的采尿、糞的方法,代謝籠,少量采集：在抓取固定時(shí)受到刺激排出少量尿液和糞便長期大量采集：使用代謝籠,8.安死術(shù),1.頸椎脫臼

9、法用左手按住動(dòng)物的頭部于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，右手抓住尾根部，快速、不間斷地向后、略向上使勁拉，以致脊椎脫臼，脊髓與腦干斷離而死亡。2.過量麻醉法 給動(dòng)物注射正常麻醉3～4倍的藥量。3.空氣栓塞法 向動(dòng)物的靜脈注射2～3mL左右的空氣。,9. 小鼠各種臟器標(biāo)本的采集方法,腹腔臟器1：肝，胃，十二指腸，空腸，回腸，結(jié)腸,小鼠各種臟器標(biāo)本的采集方法,腹腔臟器2：胰臟，脾臟，腎臟，腎上腺,胸腔器官,小鼠各種臟器標(biāo)本的采集方法,♀