細(xì)胞工程集體備課

1、細(xì)胞工程集體備課內(nèi)容,五蓮中學(xué)高三生物組馬啟明2018.1.19,一、考綱要求：,1.植物組織培養(yǎng)（Ⅱ）2.細(xì)胞融合與單克隆抗體（ Ⅱ ）3.動物細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克?。?Ⅱ ）,,,二、近三年高考題研究,6.（2015·江蘇卷.3）下列關(guān)于動物細(xì)胞工程和胚胎工程的敘述,正確的是（ ）A. 乳腺細(xì)胞比乳腺癌細(xì)胞更容易進(jìn)行離體培養(yǎng)B. 細(xì)胞核移植主要在同種動物、同種組織的細(xì)胞之間進(jìn)行C. 采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生

2、同卵多胚的數(shù)量是有限的D. 培養(yǎng)早期胚胎的培養(yǎng)液中含維生素、激素等多種能源物質(zhì),【考點(diǎn)定位】動物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎分割本題綜合考查了動物細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，意在檢測學(xué)生對相關(guān)知識的理解和記憶能力。由于現(xiàn)代生物科技專題的知識都是學(xué)生在中學(xué)期間無法直接觀察到和直接操作實(shí)驗(yàn)的知識，所以學(xué)生學(xué)習(xí)只能依靠自己想象的理解和識記相關(guān)的考點(diǎn)知識才能完成相應(yīng)試題。,c,9.（2015·天津卷.6）2015年2月

3、3日，英國議會下院通過一項(xiàng)歷史性法案，允許以醫(yī)學(xué)手段培育“三親嬰兒”。三親嬰兒的培育過程可選用如下技術(shù)路線。據(jù)圖分析，下列敘述錯誤的是（ ）A、該技術(shù)可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代B、捐獻(xiàn)者攜帶的紅綠色盲基因不能遺傳給三親嬰兒C、三親嬰兒的染色體全部來自母親提供的細(xì)胞核D、三親嬰兒的培育還需要早期環(huán)胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù),C,【考點(diǎn)定位】本題考查核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)、體外受精和早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植及

4、細(xì)胞質(zhì)遺傳和核基因遺傳等知識。,考生需要了解細(xì)胞質(zhì)基因的遺傳與細(xì)胞核基因的遺傳的不同點(diǎn)，然后再結(jié)合圖示做出具體判斷。圖示信息告訴同學(xué)們這三親分別是母親、捐獻(xiàn)者、父親，母親提供細(xì)胞核，捐獻(xiàn)者提供去核卵母細(xì)胞，父親提供精子?？忌€需要知道染色體存在于細(xì)胞核中，因此結(jié)合圖示即可做出正確的推斷：三親嬰兒的染色體來自于母親和父親。由此可知本題很好的考查了考生的識記能力、分析能力。,10.（2015·北京卷.5）在應(yīng)用農(nóng)桿菌侵染植物葉片獲

5、得轉(zhuǎn)基因植株的常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟中，不需要的是（ ）A.用攜帶目的基因的農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞B.用選擇培養(yǎng)基篩法導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞C.用聚乙二醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的原生物質(zhì)融合D.用適當(dāng)比例的生長素和細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)愈傷組織生芽,【考點(diǎn)定位】基因工程操作程序和植物細(xì)胞工程解決本題必須明確土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)基因植株的程序有：獲取目的基因 → 目的基因與Ti質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒 → 將重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌 → 用土壤農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞

6、 → 檢測是否導(dǎo)入目的基因并鑒定是否成功表達(dá) → 通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng) → 獲得轉(zhuǎn)基因植株。,C,4.（2016江蘇卷.9）下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，正確的是A.PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合B.用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細(xì)胞破裂C.骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D.核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體,D,【考點(diǎn)定位】細(xì)胞融合，人工種子，單克隆抗體，核移植,此題是對細(xì)胞工程的考查，解答本

7、題的關(guān)鍵在于理解動植物細(xì)胞融合的區(qū)別，表現(xiàn)在誘導(dǎo)因素和融合過程的區(qū)別；同時(shí)理解制備人工種子的過程，理解原生質(zhì)體的應(yīng)用范疇；對于單克隆抗體的制備過程要重視；弄清楚核移植的過程是正確D項(xiàng)的關(guān)鍵。,27.( 2015·四川卷.9)（11分）將蘇云金桿菌Bt蛋白的基因?qū)朊藁?xì)胞中，可獲得抗棉鈴蟲的轉(zhuǎn)基因棉，其過程如下圖所示（注：農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)拉上只有T－DNA片段能轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中）。（1）過程①需用同種＿＿＿＿酶對含Bt基因的D

8、NA和Ti質(zhì)粒進(jìn)行酶切。為將過程②獲得的含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌篩選出來，應(yīng)使用＿＿＿＿培養(yǎng)基。（2）過程③中將棉花細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在讓＿＿進(jìn)入棉花細(xì)胞；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含卡那霉素的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，目的是＿＿＿＿＿＿＿＿。（3）若過程④僅獲得大量的根，則應(yīng)在培養(yǎng)基中增加＿＿＿＿以獲得芽；部分接種在無激素培養(yǎng)基上的芽也能長根，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（4）檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因棉的抗蟲性狀，常用方法是＿＿＿＿。種植轉(zhuǎn)基因

9、抗蟲棉能減少＿＿＿的使用，以減輕環(huán)境污染。,【答案】（1）限制性核酸內(nèi)切　　選擇　?。?）T－DNA　　篩選獲得T－DNA片段的植物細(xì)胞（3）細(xì)胞分裂素濃度　　頂芽端合成的生長素向基部運(yùn)輸，促進(jìn)根的分化（4）投放棉鈴蟲　　農(nóng)藥,【考點(diǎn)定位】查基因工程與細(xì)胞工程的原理與相關(guān)操作，涉及培養(yǎng)基的功能及使用等知識點(diǎn)?；蚬こ滩僮饕c(diǎn)提示：（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的第二步即，也是基因工程的核心。（2）對于植物來說，受體細(xì)胞可

10、以是受精卵或體細(xì)胞，但常用體細(xì)胞。（3）對于動物來說，受體細(xì)胞一般是受精卵。受精卵作為受體細(xì)胞具有體積大、易操作、經(jīng)培養(yǎng)可直接表達(dá)性狀的優(yōu)點(diǎn)。而動物體細(xì)胞的全能性受限。選擇培養(yǎng)基的運(yùn)用主要依據(jù)的是質(zhì)粒上的標(biāo)記基因。,20.（2016新課標(biāo)2卷.40)[生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）下圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程,回答下列問題：（1）圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可

11、為____________。過程①表示去除細(xì)胞核，該過程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用_______的方法。②代表的過程是__________。（2）經(jīng)過多次傳代后，供體細(xì)胞中______的穩(wěn)定性會降低，因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。（3）若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是______。（4）與克隆羊“多莉（利）”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了_________

12、_。,【答案】（15分）（1）XX或XY 顯微操作（去核法） 胚胎移植（2）遺傳物質(zhì) （3）卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的形狀產(chǎn)生影響（4）已經(jīng)分化的動物體細(xì)胞核具有全能性,【考點(diǎn)定位】核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植本題以“獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程圖”為情境，綜合考查學(xué)生對核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植的熟記和理解能力。解決此類問題的關(guān)鍵是，熟記并理解相關(guān)的基礎(chǔ)知識、

13、形成知識網(wǎng)絡(luò)，“讀懂”流程圖中的每個箭頭的含義，據(jù)此結(jié)合每個問題情境進(jìn)行圖文轉(zhuǎn)換、實(shí)現(xiàn)對知識的整合和遷移。,12．（2017?海南卷.31）[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）甲、乙兩名同學(xué)分別以某種植物的綠色葉片和白色花瓣為材料，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖該植物?；卮鹣铝袉栴}：（1）以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體，在一定條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗，其原理是__________。（2）甲、乙同學(xué)在誘導(dǎo)愈傷組織所用的

14、培養(yǎng)基中，均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到__________。若要用細(xì)胞作為材料進(jìn)行培養(yǎng)獲得幼苗，該細(xì)胞應(yīng)具備的條件是____________（填“具有完整的細(xì)胞核”“具有葉綠體”或“已轉(zhuǎn)入抗性基因”）。（3）圖中A、B、C所示的是不同的培養(yǎng)結(jié)果，該不同結(jié)果的出現(xiàn)主要是由于培養(yǎng)基中兩種激素用量的不同造成的，這兩種激素是________。A中的愈傷組織是葉肉細(xì)胞經(jīng)_______形成的。,（4）若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快

15、速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖，在培養(yǎng)時(shí)，___________（填“能”或“不能”）采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是____________。,【學(xué)科網(wǎng)考點(diǎn)定位】植物組織培養(yǎng) 明確植物組織培養(yǎng)過程和原理是解題關(guān)鍵。,【答案】（1）綠色葉片和白色花瓣的細(xì)胞具有全能性，在一定條件下能發(fā)育成完整的植株。 （2）葡萄糖、果糖 具有完整的細(xì)胞核 （3）細(xì)胞分裂素、生長素 脫分

16、化 （4）不能 對雜合體的植株來說，其體細(xì)胞的基因型相同，而花粉粒的基因型與體細(xì)胞的基因型不同。用花粉粒進(jìn)行組織培養(yǎng)得到花卉基因型不同于原植株。,15．（2017?新課標(biāo)Ⅲ卷.38）[生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示。,回答下列問題：（1）現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上

17、編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是_____________________________________。（2）某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為______________，加入了___________作為合成DNA的原料。,（3）現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙

18、、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2。①由圖2 可知，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是__________________。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，

19、CO2的作用是__________________。②僅根據(jù)圖、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。,【答案】（1）編碼乙的DNA序列起始端無ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無起始密碼子（2）模板 dNTP（3）①進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng) 維持培養(yǎng)液是的pH ② C,【考點(diǎn)定位】基因工程、細(xì)胞工程,,三

20、、課本內(nèi)容分析,專題二、細(xì)胞工程,1、概念:,植物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程,基因工程：操作水平分子水平 胚胎工程只是指對動物的早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)。,所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ),植物細(xì)胞工程,通常采用的技術(shù)手段,植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交,植物細(xì)胞的全能性,,,,,,一、植物細(xì)胞工程,(離體的植物器官、組織或細(xì)胞),脫分化避光,再分化光照,培養(yǎng)條件：,離體、含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、激素、一定的溫度、空氣、無

21、菌環(huán)境、適合的PH、適合的光照等,外植體,舉例：,花藥離體培養(yǎng)；基因工程培育的抗棉鈴蟲的棉花植株；細(xì)胞工程中培育的“番茄-馬鈴薯”雜種植株等。,1、植物組織培養(yǎng),,,,,,,,去壁,去壁,纖維素酶果膠酶,原生質(zhì)體,植物細(xì)胞,融合的原生質(zhì)體,離心、振動、電刺激聚乙二醇,再生細(xì)胞壁,雜種細(xì)胞,脫分化,愈傷組織,雜種植株,激素,篩選,激素,再分化,2、植物體細(xì)胞雜交過程示意圖,,,,,,,,,,植物體細(xì)胞雜交原理： 細(xì)

22、胞膜流動性,植物組織培養(yǎng)原理： 植物細(xì)胞全能性,A,B,意義：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙、培育新品種,6.下圖為植物體細(xì)胞雜交過程示意圖，據(jù)圖回答：,⑴步驟①是去掉 ，最常用的方法是用 酶去除，使植物細(xì)胞成為 。⑵步驟②一般常用的化學(xué)試劑是 ，目的是 。⑶在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植株的過程中，運(yùn)用的技術(shù)手段是

23、 　，其中步驟④相當(dāng)于 ，步驟⑤相當(dāng)于 。,細(xì)胞壁,纖維素酶和果膠酶,原生質(zhì)體,聚乙二醇,誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,植物組織培養(yǎng),脫分化,再分化,⑷植物體細(xì)胞雜交的目的是獲得新的雜種植株，使兩株植物的性狀能夠在新的植物體上有所表現(xiàn)，其根本原因是 　 。⑸從理論上講，雜種植株的育性為 。若運(yùn)用傳

24、統(tǒng)有性雜交方法能否實(shí)現(xiàn)？ 　　　　 因此，這項(xiàng)研究對于培養(yǎng)作物新品種方面的重大意義在于 　　　　。⑹利用植物體細(xì)胞雜交的方法培育作物新品種的過程中，遺傳物質(zhì)的傳遞是否遵循孟德爾的遺傳規(guī)律？為什么？,雜種細(xì)胞具有兩個親本的遺傳物質(zhì),可育,不能,克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,不遵循，植物體細(xì)胞雜交屬于無性生殖。,(1)③過程是 ，實(shí)際融合的過程中原生質(zhì)體可能會形成 種細(xì)胞團(tuán)(只考慮兩個細(xì)胞

25、融合的情況)。與④過程密切相關(guān)的細(xì)胞器是 。,3,高爾基體和線粒體,課堂練習(xí),原生質(zhì)體融合,(2)若番茄細(xì)胞內(nèi)含A條染色體，馬鈴薯細(xì)胞內(nèi)含B條染色體，若將番茄和馬鈴薯采用有性雜交的育種方法培育(假設(shè)能成功)，得到的后代應(yīng)含 條染色體，若采用體細(xì)胞雜交技術(shù)所得植株含 條染色體，(3)若番茄是二倍體，馬鈴薯是四倍體，則雜種植株為 倍體。,習(xí)題,(A+B)/2,A+B,六,(4) 在培養(yǎng)雜種苗

26、的過程中，一般在24~28小時(shí)后，大部分原生質(zhì)體已經(jīng)再生出細(xì)胞壁。怎樣鑒別細(xì)胞壁是否再生？,植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原實(shí)驗(yàn),植物組織培養(yǎng)技術(shù)有哪些應(yīng)用？,⑴.植物繁殖的新途徑①微型繁殖： 不僅可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性,還可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。②作物脫毒：利用植物分生組織(如莖尖、根尖)進(jìn)行培養(yǎng),可以使新長成的植株脫除病毒。,③人工種子： 植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽或腋芽,包上人工種皮就可以形

27、成人工種子。右圖是人工種子的結(jié)構(gòu)示意圖。,,人工種子,自然種子,,胚狀體包埋在膠囊內(nèi)形成球狀結(jié)構(gòu)：膠質(zhì)化合物薄膜——種皮營養(yǎng)成分和植物激素 ——人工胚乳胚狀體——新植物的幼體,優(yōu)點(diǎn)： 快速繁殖，解決作物繁殖能力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。保持雜種優(yōu)勢。,(2)作物新品種的培育 ①單倍體育種： 花藥離體培養(yǎng)過程就是植物組織培養(yǎng)過程。,單倍體育種的優(yōu)點(diǎn)是后代不發(fā)生性

28、狀分離,都是純合子，能夠穩(wěn)定遺傳,明顯縮短了育種年限。,②突變體的利用： 在植物組織培養(yǎng)過程中,由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài),因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而發(fā)生突變。 從這些產(chǎn)生突變的個體中可以篩選出對人們有用的突變體,進(jìn)而培育成新品種。(3)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)： 可以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)大量生產(chǎn)某些細(xì)胞產(chǎn)物,如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、藥物、香料、生物堿等。,1.對細(xì)胞全能性的

29、表述正確的是A.非離體植物細(xì)胞能夠表現(xiàn)出全能性B.動物細(xì)胞融合標(biāo)志著動物細(xì)胞全能性的實(shí)現(xiàn)C.單克隆抗體的制備原理依據(jù)是細(xì)胞的全能性D.花粉培育成單倍體是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)2.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是A.給予適宜的營養(yǎng)和外界條件B.脫離母體后，給予適宜的營養(yǎng)和外界條件C.導(dǎo)入其他植物細(xì)胞的基因D.將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi),,,3.在生物體的所有細(xì)胞中，全能性最高的是A．卵細(xì)胞 B 植物花粉 C

30、．體細(xì)胞 D.受精卵4.在生物體內(nèi)，細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，而是分化為不同的組織、器官，是因?yàn)椋?A.細(xì)胞喪失了全能性 B.基因的表達(dá)有選擇性 C.不同的細(xì)胞內(nèi)基因不完全相同 D.在個體發(fā)育的不同時(shí)期，細(xì)胞內(nèi)的基因發(fā)生了變化,,,5.植物組織培養(yǎng)可以形成愈傷組織，下列有關(guān)愈傷組織的敘述錯誤的是A.愈傷組織是離體細(xì)胞經(jīng)過脫分化形成的B.形成愈傷組織的培養(yǎng)基不需含有機(jī)分子C.愈傷組織可以形成具有生根

31、能力的胚狀結(jié)構(gòu)D.愈傷組織細(xì)胞的線粒體和核糖體可能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對6.能刺激愈傷組織形成的誘導(dǎo)劑是A.細(xì)胞分裂素和生長素 B.赤霉素 C.生長素和赤霉素　　 D.細(xì)胞分裂素和乙烯,,,7.將胡蘿卜韌皮部細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)，下列條件中不需要的是A、具有完整細(xì)胞核的細(xì)胞 B、一定的營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素C、離體狀態(tài) D、導(dǎo)入指定基因 8.（多選）植物體細(xì)胞的組織培養(yǎng)常被用于保留雜種優(yōu)勢。

32、因?yàn)橹参锝M織培養(yǎng)的過程 A.不可能發(fā)生基因突變 B.生殖方式屬于無性生殖C.子代不發(fā)生性狀分離 D.體細(xì)胞內(nèi)不存在等位基因,,,,10.植物體細(xì)胞雜交的目的是A.用酶解法去掉細(xì)胞壁分離出有活力的原生質(zhì)體B.以人工誘導(dǎo)法使兩個不同植物的原生質(zhì)體融合C.用植物組織培養(yǎng)法培養(yǎng)融合的原生質(zhì)體得到雜種植株D.通過以上三者來完成 11.在細(xì)胞工程 ― 原生質(zhì)體融合育種技術(shù)中，、其技術(shù)的重要一環(huán)是將營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞

33、壁除心去，通常是采用纖維素酶的酶解破壁法處理。如將去掉了細(xì)胞壁的成熟植物細(xì)胞置于清水中，細(xì)胞最終將 A.皺縮 B.脹破 C.呈球形 D.保持原狀,,,二、動物細(xì)胞工程,植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：,植物組織培養(yǎng)、 植物體細(xì)胞雜交等,,動物細(xì)胞培養(yǎng),動物細(xì)胞核移植,動物細(xì)胞融合,單克隆抗體制備等,回顧：,常用的技術(shù)手段：,動物組織,單個細(xì)胞,細(xì)胞懸液,貼壁生長,分瓶培養(yǎng),,,,,,,10代細(xì)胞,50代細(xì)胞,不死細(xì)胞,,

34、,原代培養(yǎng),,傳代培養(yǎng),胰蛋白酶,剪碎,加培養(yǎng)液,接觸抑制,少數(shù)癌變,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)流程,畸形分化,？？？傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代后就不易傳下去了。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型,1.動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理是什么？2.動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？3.進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)的材料一般有何特點(diǎn)？,離體的細(xì)胞在適宜的條件下可以增殖（ 細(xì)胞增殖）,通常含有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)

35、鹽、微量元素、動物血清等。,一般取胚胎組織或幼齡動物的組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)。因?yàn)榕咛ソM織或幼齡動物的組織的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)。,4.哪些細(xì)胞會失去接觸抑制？5.在體外培養(yǎng)動物細(xì)胞需要什么物質(zhì)和環(huán)境條件？6.動物細(xì)胞培養(yǎng)有何應(yīng)用價(jià)值？,腫瘤細(xì)胞,無菌無毒環(huán)境、充足營養(yǎng)（血清或血漿）、適宜溫度、PH、氣體環(huán)境（O2和CO2，C02的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH）。,①.大規(guī)模生產(chǎn)生物制品，如病毒疫苗、干擾素、 單克

36、隆抗體等；②.藥性、毒性檢測；③.培養(yǎng)基因工程中的受體細(xì)胞,動物細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物,動物細(xì)胞核移植：,是將動物的一個細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）,分類：,細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易,,細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難,原理：動物細(xì)胞核的全能性,細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核,細(xì)胞核移植,,多莉羊的培育過程,體細(xì)胞核移植的過程,卵母細(xì)胞去核,體細(xì)胞取

37、核,重組細(xì)胞,體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景,1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程,2、保護(hù)瀕危物種,3、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植,細(xì)胞膜的流動性,,滅活病毒、PEG、電激等,,融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞,誘導(dǎo)的手段？,,融合后細(xì)胞的類型？,AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？,三種AA、AB、BB,含兩種生物的遺傳物質(zhì),1.2動物細(xì)胞融合過程,原理？,1.2動物細(xì)胞融合過程,為什么滅活的病毒能作誘

38、導(dǎo)劑？,滅活喪失感染性,保留融合活性,,,,,,,,,,,,,,,,,,1.4 比較動、植物細(xì)胞雜交技術(shù),抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法,抗原,反復(fù)注射動物,從動物的血清中分離抗體,,,該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。,,,如何解決這個問題呢？,單克隆抗體！,讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念,人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單

39、一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。,2.1單克隆抗體的概念,,,,單克隆抗體：單個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體,一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖,,雜交瘤細(xì)胞,,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),設(shè)計(jì)方案：,動物細(xì)胞融合技術(shù),單克隆抗體,既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細(xì)胞,1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn),①為什么給小鼠注射特定的

40、抗原蛋白？② 會有幾種融合方式？ ③ 雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？有何特點(diǎn)？ ④ 是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤ 如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？,,BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）,（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活,獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞,（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞,,√,體外培養(yǎng),小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng),,,雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。,單克隆抗體,雜交細(xì)胞,雜

41、交瘤細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,特異性雜交瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞系,提取,,經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞,,動物細(xì)胞融合技術(shù),動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),單克隆抗體的制備過程：,特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖,特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備,,強(qiáng)調(diào)：,是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。,,,,,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？,你學(xué)會了嗎？,2.3單克隆抗體的應(yīng)用,1、診斷試

42、劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速,單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。,“生物導(dǎo)彈” ＝單克隆抗體＋藥物 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭,2、治療疾病和運(yùn)載藥物,主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。,例．下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。,（1）_______________技術(shù)是單

43、克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（4）動物細(xì)胞融合除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的_______________特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的_______________特點(diǎn)。（6）淋巴細(xì)胞是由

44、動物體_________中的______________細(xì)胞分化、發(fā)育而來。（7）雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。,動物細(xì)胞培養(yǎng),選擇,特異性強(qiáng),靈敏度高,滅活的病毒,在體外大量增殖,分泌特異性抗體,骨髓,造血干細(xì)胞,主動運(yùn)輸,1975年Kohler和Milstein的單克隆抗體技術(shù)在生產(chǎn)和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀(jì)元，圖10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：（1）該技術(shù)是在

45、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和 技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。（2）圖10中細(xì)胞A體外培養(yǎng)不具有分裂能力，但能分泌 ，細(xì)胞B體外培養(yǎng)能夠 。（3）動物細(xì)胞融合常用的方法是 。,圖10,動物細(xì)胞融合,分泌特異性抗體,無限增殖,PEG（滅活的病毒、電激）,圖10,（4）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，要篩選出

46、細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為了促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖，常向培養(yǎng)液中加入 (激素) （5）要獲得大量的單克隆抗體，可對獲得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行 培養(yǎng)。,體外或體內(nèi),雜交瘤,胰島素,,例人類在預(yù)防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，且疾苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：,提取,請回答：（1）過程①代表的是

47、 。（2）過程②構(gòu)建A基因表達(dá)載體時(shí)，必須使用 和 兩種工具酶。,DNA連接酶,逆轉(zhuǎn)錄,限制性核酸內(nèi)切酶,（3）過程③采用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是 ，獲得的X是 。（4）對健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的 所制備的疫苗。 對該傳染病疑似患者確診時(shí)，可以疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進(jìn)行 ___

48、______ 比較；或用圖中的 ___ ____ 進(jìn)行特異性結(jié)合檢測。,抗A蛋白的單克隆抗體,細(xì)胞融合 雜交瘤細(xì)胞,A蛋白,核酸（基因）序列,,(4)在培養(yǎng)時(shí)通過________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項(xiàng)）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗